A组猪轮状病毒NSP3蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

为制备A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP3的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究将原核表达、纯化的重组NSP3蛋白(r NSP3)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA法筛选,得到一株能够稳定分泌抗Po RV(G9)的杂交瘤细胞株(5B8)。MAb鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1型;MAb细胞培养上清液效价为1∶103,western blot及间接免疫荧光结果表明该株MAb能够与Po RV反应。对NSP3蛋白进行截短表达,采用western blot试验确定所获得的MAb识别的抗原表位区域序列为290QDYD RTFL297。该MAb的制备为进一步研究NSP3蛋白的结构和功能奠定了良好的基础。     

抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为k链.Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白.间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白.利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位.该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础.     

一株抗猪脑心肌炎病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

为制备抗猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达的重组VP2蛋白(r VP2),纯化后将其免疫BALB/c小鼠,取免疫的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,通过间接ELISA方法筛选出一株稳定分泌抗VP2 MAb(1D3)。通过间接免疫荧光试验和western blot对该MAb的免疫活性和特异性进行鉴定,结果表明1D3 MAb仅能够特异性与EMCV全病毒反应。此外,通过构建截短的VP2蛋白重组质粒,采用western blot的方法对VP2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 1D3识别的线性表位区域为89DGGVFGAALRRH100。本实验结果为进一步研究VP2蛋白的功能及建立EMCV检测方法奠定了基础。     

SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1不同细胞中的表达鉴定

SAMHD1是最近发现的在人髓系细胞中发挥抗艾滋病毒作用的一种天然蛋白.为制备抗人huSAMHD1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的人huSAMHD1重组蛋白为免疫原,经腹腔免疫4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法筛选和4次有限稀释法克隆纯化,获得了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的MAb与人huSAMHD1的真核表达蛋白呈阳性反应,而与猴、马SAMHD1的真核表达蛋白呈阴性反应,表明其具有很好的特异性,可以用于ELISA、免疫荧光和免疫印迹检测以及对huSAMHD1的进一步研究.     

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB单克隆抗体的制备及其对应表位区分析

为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞.这6株MAbs亚类鉴定均为IgG1型,轻链均为K链.间接免疫荧光试验结果表明,这6株MAbs均能够识别FMDV 3AB蛋白.采用制备的MAb对分段表达的3AB蛋白进行western blot分析,结合位点分别位于3AB的第aa 55～aa 70、aa 64～aa 79、aa130～aa145区段.该结果为进一步探索3AB蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础.     

鸭肠炎病毒VP22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了制备抗鸭肠炎病毒(DEV)VP22蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以DEV Clone-03基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增UL49基因并克隆至pMD-18载体.重组质粒经测序鉴定后,将UL49基因亚克隆于原核表达载体pET-30a,构建重组表达质粒pET-30a-UL49.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,在大肠杆菌中获得表达,并对表达的重组蛋白VP22进行western blot鉴定.结果显示,表达的重组蛋白分子量约为36 ku,与预期的大小一致.重组蛋白能够被鼠抗DEV阳性血清所识别,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性.将重组蛋白纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,制备MAb,经间接ELISA、western blot和间接免疫荧光试验进行筛选及鉴定.获得4株能够稳定分泌抗DEV VP22蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2810、2G1、3F10和3G2.其MAb亚类分别属于IgG2b、IgG2b、IgA和IgM.4株MAbs都能够与DEV Clone-03发生特异性反应,表明能够识别天然构象的VP22蛋白.这4株MAb可用于DEV VP22蛋白功能研究及抗原表位的研究.     

PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达及鉴定

为制备只包含抗体可变区片段(Fv)的MAb2-5G2单链抗体(scFv),本研究从分泌MAb2-5G2的杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录制备cDNA作为模板扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因.以VH-1inker-VL的形式通过重叠PCR制备scFv基因,构建重组表达质粒pEasy-scFv,并在大肠杆菌中获得正确表达.通过western blot和间接免疫荧光鉴定表明scFv蛋白能够被兔抗MAb2-5G2的抗体(Ab3)识别,复性后的scFv蛋白能够特异性结合Marc-145细胞.该研究结果为进一步明确MAb2-5G2结合Marc-145细胞功能区域奠定了物质基础.     

细胞表面荧光免疫吸附法在猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体杂交瘤筛选中的应用

为验证细胞表面荧光免疫吸附法(CSFIA)筛选高活性杂交瘤细胞的效果,本研究以原核表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)重组N蛋白为免疫原,免疫6周龄～8周龄的BALB/c雌性小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,分别采用CSFIA和间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,并检测目的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体(MAb)效价。结果显示,CSFIA筛选的MAb 1B1比间接ELISA筛选的MAb 3D3抗体效价高10倍,并且通过观察荧光强度能够实现杂交瘤细胞的一次性筛选,无需多次亚克隆,周期缩短约30 d。本研究表明CSFIA在筛选杂交瘤细胞中具有简单、直观和高效的优点,是一种值得推广的快速制备MAb的新方法。     

尼帕病毒G和F蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗尼帕病毒(NiV)G和F蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以表达NiV G和F蛋白的真核重组表达质粒pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF分别免疫BALB/c小鼠,采用常规技术制备杂交瘤细胞;以表达G和F蛋白的重组牛痘病毒(rWR-NiVG、rWR-NiVF)分别感染BHK细胞,通过间接免疫荧光(IFA)筛...     

蓝舌病病毒15型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

为制备抗蓝舌病病毒(BTV)15型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达的重组VP2蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV15VP2蛋白的MAb(2D6)。通过western blot和间接免疫荧光试验对该MAb进行特异性鉴定。结果显示,其仅能够识别BTV15,而不能识别其他血清型BTV以及同种属的中山病毒和茨城病毒,表明该MAb具有良好的反应特异性。利用肽扫描技术对该MAb针对的B细胞表位进行鉴定,确定该MAb识别的抗原表位为15IAPAIIK RYP24。本研究为BTV15特异性抗原检测方法的建立奠定了基础。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

两种绿头鸭肌肉营养成分分析及评价

本试验旨在研究两种绿头鸭（白羽绿头鸭和绿头鸭）肌肉营养组成和价值,为绿头鸭肉产品的开发利用提供基础数据和理论依据。选择白羽绿头鸭和绿头鸭60只（每个品种各30只,公母各半）,依照国家标准测定胸肌粗蛋白质、粗脂肪、胆固醇含量及氨基酸、脂肪酸、微量元素和维生素的组成和含量,并对胸肌进行氨基酸评价及脂肪酸营养价值评价。结果显示,白羽绿头鸭肌肉粗蛋白质含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;两种绿头鸭肌肉中均检测到17种含量大于0.01%的氨基酸,其中白羽绿头鸭肌肉苏氨酸、组氨酸、丝氨酸和脯氨酸含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,赖氨酸、谷氨酸和精氨酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到13种含量均大于0.01%的脂肪酸,其中白羽绿头鸭硬脂酸和油酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到9种矿物质元素（钠、镁、钾、钙、锰、铁、铜、锌和硒）,两种绿头鸭差异不显著（P>0.05）;检测到8种维生素,白羽绿头鸭肌肉维生素B₁含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,维生素D和维生素E含量显著低于绿头鸭（P<0.05）。两种绿头鸭肌肉氨基酸比例接近世卫组织推荐的理想模式,富含人体所需的矿物质元素和维生素,具有广阔的开发利用前景。     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Analysis and Evaluation of Nutrient Composition of Muscles of Two Kinds of Mallard

This experiment was aimed to study the nutritional content and value of the muscles of two mallards (White feather mallard and mallard),and provide basic data and theoretical basis for the development and utilization of mallard meat products.60 White feathered mallards and mallards (30 for each breed,half of male and female) were chosen,and the composition and content of pectoral muscle crude protein,crude fat,cholesterol,amino acids,fatty acids,trace elements and vitamins were determined according to national standards and the nutritional values of muscle were evaluated.The results showed that the content of crude protein in muscle of White feather mallard was significantly lower than that of mallard (P<0.05).17 kinds of amino acids with contents higher than 0.01% were detected in the muscles of the two kinds of mallards,among which the contents of threonine,histidine,serine and proline in the muscles of the White feather mallard were significantly higher than those of mallard (P<0.05).The contents of lysine,glutamate and arginine were significantly lower than those of mallard (P<0.05).13 kinds of fatty acids with contents higher than 0.01% were detected,and the contents of stearic acid and oleic acid were significantly lower than those of the mallard.9 mineral elements (sodium,magnesium,potassium,calcium,manganese,iron,copper,zinc and selenium) in two kinds of mallards were detected,and there was no significant difference between the two kinds of mallards (P>0.05).8 kinds of vitamins were detected,and the content of vitamin B₁ in muscle of White feather mallard was significantly higher than that of mallard (P<0.05),but the contents of vitamin D and vitamin E were significantly lower than that of mallard (P<0.05).The ratio of amino acids in muscle of two kinds of mallards was close to the ideal model recommended by WHO,which was rich in mineral elements and vitamins for human body,and had a broad prospect of development and utilization.     

比格犬甲状腺显微与超微结构的观察

应用光镜和透射电镜技术，观察了3～6月龄比格犬甲状腺的显微和超微结构。结果表明，比格犬甲状腺实质由滤泡和滤泡旁细胞构成。滤泡呈圆形或椭圆形，直径20．22～220．00μm，平均90.80μm；由单层立方上皮细胞围成，细胞高度3．04～7.11μm，平均5.18μm，电镜下可见功能状态不同的两型滤泡上皮细胞；滤泡旁细胞很多，直径4．40～8．82μm，平均6．23μm，位于滤泡之间或镶嵌于滤泡上皮细胞之间，也可聚集在一起形成滤泡样结构，胞质内含有大量的分泌颗粒，电镜下也可见两种类型的滤泡旁细胞。     

三种圈养雉类的行为比较研究

2008年7月23日～8月5日和8月7～13日,采用目标动物取样法分别研究了4只蓝鹇(2♂2♀)、3只白鹇(1♂2♀)和5只白腹锦鸡(2♂3♀)的各种行为的发生频率进行了研究。结果发现3种雉类的各种行为类型都相似,但不同雉类间各种行为发生频次有差异。白腹锦鸡、蓝鹇和白鹇的休息行为分别在8:00、9:00和10:00达到日高峰,分别为12.05次/h、28.39次/h和14次/h。蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡运动相关行为分别在7:00、8:00、9:00出现峰值,为19.29次/h、21.76次/h、24.90次/h;10:00蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡的运动相关行为发生频次都出现了白昼的第一个谷值,分别为6.71次/h、9.29次/h、15.19次/h。蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡的梳理行为9:00出现谷值分别为7.64次/h、8.05次/h、11.67次/h,10:00出现峰值分别为17.25次/h、21.19次/h、21.0次/h。3种雉鸡的采食行为的日节律相似。     

不同类型黑麦草营养价值评估

文章旨在通过体内外试验评估不同类型黑麦草的营养价值。试验选择平均体重为（66.87±2.34）kg的绵羊12头,随机分成3组,每组4个重复,每个重复1头。3组绵羊分别饲喂新鲜、青贮和晒干黑麦草。经过14?d的饲养试验后收集粪便和牧草样品进行后续分析。结果：晒干黑麦草的干物质、有机物和无氮浸出物含量均表现最高（P＜0.05）。新鲜黑麦草粗蛋白质和半纤维素含量较青贮黑麦草分别显著提高42.10%和10.82%（P＜0.05）。青贮黑麦草粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量显著高于其他两种类型的黑麦草（P＜0.05）。新鲜、青贮和晒干黑麦草的粗蛋白质、粗脂肪和粗纤维表观消化率无显著差异（P＞0.05）。晒干黑麦草干物质表观消化率较新鲜和青贮黑麦草显著提高6.34%和6.21%（P＜0.05）,同时晒干黑麦草有机物表观消化率较新鲜黑麦草显著提高6.65%（P＜0.05）,无氮浸出物表观消化率较青贮黑麦草显著提高15.44%（P＜0.05）。当体外代谢能值以MJ/kg有机物表示时,新鲜和青贮黑麦草代谢能值较晒干黑麦草分别显著提高21.34%和22.41%（P＜0.05）,而当体外代谢能值以MJ/kg干物质表示时,新鲜黑麦草能值最高,青贮黑麦草能值次之,晒干黑麦草能值最低（P＜0.05）。结论：新鲜、晒干和青贮黑麦草在不同营养成分上各有优势,但3种牧草主要营养物质的表观消化率和代谢能值无显著差异。因此,无论是新鲜、晒干还是青贮黑麦草都可以作为反刍动物粗饲料的良好来源。 [关键词]黑麦草;青贮;营养价值;消化     

Extension of the scapulohumeral joint increases the likelihood of success of centesis of the bursa of the biceps brachii tendon of horses

The accuracy of a technique for centesis of the bicipital bursa using a 9 cm, spinal needle inserted through the tendon of the biceps brachii muscle was evaluated. A veterinary radiologist who had no previous experience of performing centesis of the bicipital bursa and an equine clinician who had little experience in performing the procedure, attempted to inject a solution of aqueous radiopaque contrast medium into the bicipital bursae of 8 horses using an approach in which the bursa was accessed by directing a needle through the tendon of origin of the biceps brachii muscle until cartilage in the lateral portion of the intertubercular groove was contacted. Centesis of the bicipital bursa using this approach in horses having no signs of disease of the bursa was consistently successful if the cubital joint was flexed and the scapulohumoral joint extended.