H5亚型禽流感病毒一步法复合RT-PCR检测方法的建立

针对近年来H5亚型禽流感(AI)频发的严峻形势,本研究通过分析GenBank中AI的221个HA基因和M基因序列,在保守区内用Oligo4.0软件设计合成2对引物,建立了能同时鉴别AIV型与亚型的一步法复合RT-PCR,其扩增的目的片段大小分别为372、229 bp。通过对AIV尿囊液和棉拭子浸出液进行不同稀释倍数检测,结果病毒在尿囊液最低检出量为10-4稀释。用病毒分离和该方法同时检测不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品,结果该方法检测灵敏度比病毒分离低10~100倍。用该方法检测H1~H15亚型AIV和鸡新城疫病毒等其他14种禽病毒,结果所有AIV均有M基因229 bp的目的条带,且仅H5亚型AIV有372 bp的特异性条带,而其他14种禽病毒无任何目的条带。     

鸡传染性法氏囊炎、传染性鼻炎及病毒性关节炎疫苗的安全性和免疫效力试验

鸡传染性法氏囊病 (ＩＢＤ)、鸡传染性鼻炎 (ＩＣ)、鸡病毒性关节炎病 (ＲＥＯ)是危害养禽业的几种主要传染病 ,优质高效的疫苗能有效地预防这些疫病的发生。受梅里亚动物保健有限公司的委托 ,对该公司生产的疫苗进行免疫效力评估 ,现将该公司生产的ＩＢＤ、ＩＣ和ＲＥＯ疫苗的安全性免疫效力检测结果报告如下。1　材料和方法1.1　疫苗ＩＢＤ油乳剂灭活疫苗Ａ(新疫苗 ) ,生产日期为 2 0 0 0 0 90 3,仅供试验使用 ;ＩＢＤ油乳剂灭活疫苗Ｂ(旧疫苗 ) ;ＩＣ油乳剂灭活疫苗 (ＨＥＡＭＯＶＡＸ) ,批号为 0 2 88;ＨＶＴ -ＢＵＲ70 6二联液氮苗 ,批…     

动物流感病毒与人流感流行株起源变异关系的探讨

流行性感冒是由流行性感冒病毒引起的急性上呼吸道传染病。此病具有高度的传染性、传播迅速、易发生流行的特点。而动物流感作为人类研究最早的病毒之一，自1515年至1930年的420年间，流感共发生世界性大流行30多次，平均每14年发生一次，而动物流感中的禽流感自1878年perroncito首次报道意大利鸡群暴发禽流感至今的一百多年历     

新型抗菌药物防治奶牛乳房炎的研究进展

防治奶牛乳房炎的氟喹诺酮类药物的抗菌机理、抗菌活性、药代动力学及临床应用。,尤其在药代动力学上,这类药物能进入吞噬细胞内,杀死吞噬细胞内的金黄色葡萄球菌;还可能过血乳屏障,进主乳腺,这在乳房炎的治疗上明显优于其他抗生素类药物。经临床试验,这类药物能显著提高奶牛乳房火的治愈率。     

抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为k链.Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白.间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白.利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位.该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础.     

禽流感对食品安全的影响

禽流感对食品安全的影响是巨大的,是影响肉食品安全的重要风险因素。论文从禽流感对家禽养殖业发展的影响、通过食品链条对人类健康造成危害、重大食品安全事故影响国际贸易和企业发展三方面论述了禽流感对食品安全的影响。阐明了认清禽流感的病原并掌握正确的防范措施,采取切实可行的对策,依靠实用有效的科学技术,就一定能成功地防止禽流感可能造成的重大食品安全事故,避免经济损失和社会影响,保证国民经济健康地向前发展。     

H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白在原核系统中的表达

应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(HgN2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9.将此重组质粒转化到宿主菌BL21中,用诱导剂异丙基硫代...     

不对称RT-PCR结合芯片技术鉴别4种禽病的初步研究

本研究结合非对称RT-PCR和基因芯片两种技术,构建可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型和N1、N2神经氨酸酶亚型以及鸡传染性支气管炎病、新城疫病、鸡传染性法氏囊病的基因芯片。分别T／A克隆部分禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因,鸡传染性支气管炎病毒np基因、新城疫病np基因、鸡传染性法氏囊A基因,并构建重组质粒;以重组质粒为模板,用PCR方法扩增制备探针,纯化后点于氨基修饰的载玻片上,制备基因芯片;常规方法从待检样品中提取RNA,用Cy3标记引物进行RT-PCR,将荧光素引入PCR产物中;并对扩增条件进行优化。研究发现检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交,呈现较强的杂交信号;该方法可以准确进行4种主要禽病的鉴别诊断和禽流感主要流行亚型鉴定,对感染样品和现地样品检测结果与RT．PCR、鸡胚接种有较高一致性,符合率分别为100％和96％。结果显示该方法可用于同步鉴别禽流感、鸡传染性支气管炎、新城疫、鸡传染性法氏囊病,以及现地主要流行的禽流感亚型,是一种有效的新方法。