嗜水气单胞菌血毒素对草鱼血细胞的溶血作用

通过嗜水气单胞菌菌体和菌液上清对草鱼的体外溶血试验，发现菌细胞在培养１２ｈｒ后即具最高溶血活性，而菌液上清在菌培养６０ｈｒ后才达到最高溶血活性；在ｐＨ～８范围内嗜水气单胞菌溶血素可维持高溶血活性，而维持高溶血活性的最适培养温度为３５℃；部分糖和二价金属类可在不同程度上影响菌液上清的溶血活性。     

鳗源嗜水气单胞菌β—溶血素基因的克隆及表达

应用PCR技术,从1株鳗源嗜水气单胞菌ML316中扩增得到β 溶血素基因AHL316HEM,将AHL316HEM克隆到pGEM TEasyVector,经分析验证后重组到pcDNA3.0中,构建了重组质粒PDLH。转化重组质粒PDLH的大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α能在血琼脂培养皿中形成明显的β 溶血斑,重组菌纯化的胞外产物溶血价为1.28×104HU·mg-1,同时重组菌的胞外产物能被原始菌株的高免血清特异性地识别。结果证实,克隆到鳗源嗜水气单胞菌β 溶血素基因,重组质粒PDLH能够表达具有天然生物学活性的β 溶血素,为构建嗜水气单胞菌核酸疫苗奠定了基础。     

流水式养殖动物中弧菌和嗜水气单胞菌的PCR法监测

为了解流水式养殖场养殖动物中弧菌和气单胞菌的感染状况,分别针对霍乱孤菌肠毒素A亚单位(ctxA)基因、0139和01群群特异基因、毒力协同调节菌毛A亚单位基因(tcpA)、中心调节蛋白基因(toxR)、副溶血弧菌不耐热溶血素基因(tlh)、创伤弧菌Vibrio vulnificus溶细胞素基因(vvhA)和嗜水气单胞菌的气溶素基因(aerA)设计引物,建立了聚合酶链式反应(PCR)检测技术,PCR产物经电泳,根据扩增条带的大小和数目,检测和区分霍乱孤菌、嗜水气单胞菌和副溶血孤菌.对南昌沿岸霍乱流行水域及附近养殖场的养殖动物进行了18个月的连续监测,对1 440份水产品的增菌液进行PCR检测,17份检出副溶血弧菌,25份检出霍乱弧菌,创伤弧菌和嗜水气单胞菌均未检出.扩增结果与传统培养检测法的结果一致.监测结果表明,南昌附近地区霍乱弧菌和副溶血弧菌检出率分别为1.74%和1.18%,总体感染状况处于较低水平,但个别养殖品种弧菌检出率较高.     

嗜水气单胞菌对鲫组织蛋白酶活性的影响

嗜水气单胞菌按是否产胞外毒素及毒素的类型分为高毒株和低毒株两大类。具高毒性的嗜水气单胞菌对水产养殖动物，包括各种淡水养殖的鱼类、甲壳类、爬行类等普遍具感染性，同时嗜水气单胞菌也能导致人类疾病。有关嗜水气单胞菌的分离、分类、毒性检测及对人类的致病性已有大量的报道和较深入的研究，但由于不同类型动物的生理差异，有关嗜水气单胞菌对水生动物生理的影响研究很少。本试验以淡水养殖的代表动物———鲫鱼为人工感染的实验对象，并以酪蛋白为酶作底物，检测鲫在人工感染产胞外毒素的嗜水气单胞菌及菌液上清后，其血清、肝、肾…     

株鱼类肠道细菌溶血毒素的葡萄糖抑制效应

从遗传学的角度对嗜水气单胞菌的溶血毒素的产生及调控作了初步探讨，发现嗜水气单胞菌的溶血毒素产生有两种情况，一种是组成型酶，定量稳定，与培养基中葡萄糖含量没有关系；另一种是诱导酶，当有诱导物时大量产生，但这一诱导现象被培养基中的葡萄糖抑制。该结果为解释嗜水气单胞菌是否是条件致病菌探索了一条新路。     

嗜水气单胞菌感染后牛蛙血清中抗菌物质的初步研究

用1×107 mL-1的嗜水气单胞菌腹腔注射感染牛蛙，注射后7 d内试验组牛蛙血清抗菌活性都高于对照组，其中在3 d、7 d时存在显著性差异，峰值出现在感染后第3天。收集第2批人工感染后3 d时牛蛙的血清。该血清经Sephadex G25凝胶柱分离后,并在波长280 nm处测定紫外吸收值，得到两个吸收峰。以嗜水气单胞菌检测分离物的抗菌活性,结果表明经诱导的血清抗菌物质主要集中在第1个吸收峰。通过对金黄色葡萄球菌等10株指示菌抗菌谱的测定，其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌等具有明显的抗菌作用；SDSPAGE分析显示抗菌蛋白分子量较大。结果说明：牛蛙被嗜水气单胞菌感染后能很快产生多种抗菌物质，主要的抗菌物质是分子量比较大的物质，这些抗菌物质对部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌有抗菌作用。图3表1参24 关键词：牛蛙；嗜水气单胞菌；抗菌蛋白；抗菌活性     

嗜水气单胞菌在浸泡感染团头鲂的组织动态分布

利用具有绿色荧光蛋白基因标记的嗜水气单胞菌(WJ-8G FP)对团头鲂(Megalobrama amblycephala)进行浸泡攻毒试验,探究温度对浸泡感染后嗜水气单胞菌在团头鲂各组织分布的影响。实验设立A组(水温25℃),B组(水温32℃),C组(水温25℃),其中C组为对照组。用菌株WJ-8G FP对实验组A、B进行浸泡攻毒,试验组C不进行攻毒处理,攻毒后分别于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h采集各组鱼血液、脾、肾、鳃、肠道、肌肉,培养法统计分析各组织器官上的荧光细菌数量。实验结果显示,在各取样时间段实验组A(25℃)和实验组B(32℃)团头鲂各组织在均能检测到荧光嗜水气单胞菌,对照组未检测到嗜水气单胞菌;最高菌量出现在鳃,且鳃上嗜水气单胞菌数量显著大于其他组织(P0.05),其次是脾、肾;组织内的菌量随时间大体呈现先上升后下降的趋势;B实验组中各组织菌量显著大于A实验组(P0.05)。研究结果表明,鳃是嗜水气单胞菌浸泡感染团头鲂的主要组织器官,与25℃相比较,在水温32℃时团头鲂被嗜水气单胞菌感染的风险更高。     

气单胞菌基因研究

气单胞菌在一定条件下能引进养殖鱼类的大批死亡，从基因水平认识该菌对研究该菌的致病条件及防治该菌引起的各种病症等都大有帮助。自８０年代中期开始，人们陆续对嗜水气单胞菌及其它气单胞菌的气溶素基因、溶血毒素基因和蛋白酶等基因进行了研究。本文从气单胞菌溶血毒素基因及分布、毒素的调控与分泌和蛋白酶基因等方面简要综述了近年来对气单胞菌基因的研究。     

起始pH对嗜水气单胞菌溶血毒素的影响

从患败血症鲫鱼病体分离到一批溶血毒素产生菌株，对其中5株进行了致病实验，对4株致病株进行了形态学和生化鉴定，其中CRI14与嗜水气单胞菌的特征吻合。进一步研究了培养起始pH对CRI14株溶血毒素产生的影响，用SDS－PAGE和IEF证明了酸性pH（5．0）能抑制至少两种嗜水气单胞菌     

嗜水气单胞菌气溶素单克隆抗体的制备及初步应用

以1％福尔马林灭活的嗜水气单胞菌纯化的气溶素免疫8周龄的BALB／C小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，经间接ELISA筛选，获得1株稳定分泌气溶素单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为A2D3。腹水单抗ELISA效价为1：16，384（1：2^14），其能特异性抑制气溶素的溶血活性并且腹水单抗有中和特性，抑制效价和中和效价分别为1：128（1：2^7）和1：128（1：2^7）。以此单抗建立了检测嗜水气单胞菌气溶素的问接ELISA方法，对临床分离的50株嗜水气单胞菌培养上清检测，有48株呈阳性反应。     

甲鱼爆发性传染病病原体分离及抗血清制备

从患病甲鱼的肝脏中分离到9株细菌,其中7株为温和气单胞菌,2株为豚鼠气单胞菌。两种菌JA—1和JA—2对鲫鱼的半数致死量(LD_(50))各为4.3×10~5和5.5×10~7,在两种菌培养的上清液中均有一种具有溶血活性的毒素。研究表明:甲鱼的爆发性传染病是由温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌引起,用两种菌为菌种做成菌苗,结合免疫增效剂免疫家兔制得血清,效价可达1:512,治愈率达100％。     

陆封型大西洋鲑发眼卵孵化和稚鱼养殖

本文报道了从美国引进的陆封型大西洋鲑发眼卵孵化和稚鱼养殖试验情况。经42天孵化，发眼卵的孵化率为81．85％，仔鱼至上浮稚鱼成活率为96．8％，稚鱼成活率为80％。     

水位变化对蛤蟆通水库浮游植物种群动态影响的研究

1991－1993年蛤蟆通水库水位变化对浮游植物种群的动态影响研究结果表明：1）浮游植种属数随水位下降而减少；2）浮游植物生物量随水位下降而升高，其关系式为y＝299．46－3．37x,r=-0.998;3)浮游植物多样性指数随水位降低而变小，并且与水位呈明显的相关性（r＝0．999，r＝0．983）。     

鱼鳞酶解工艺的研究

应用正交实验优选鱼鳞蛋白酶解的最佳条件,结果表明,鱼鳞酶解宜采用条件温和的枯草杆菌中性蛋白酶,用醋酸作软化的预处理,可使鱼鳞蛋白得到较高程度的水解,酶解时最佳温度为５０℃,酶量宜采用１．５％,酶解的最佳时间为６ｈ底物浓度宜选择２０％。     

尼罗罗非鱼五品系生长性能评估

在我国黄河流域,长江流域及珠江流域三个农业生态区,山东青岛,上海,浙江湖州及广州四个地区,在网箱,水泥池及池塘三种水体,单养或混养系统里,对五个尼罗罗非鱼品系,即吉富品系,“７８”吕系,“８８”品系,“埃及”品系以及“美国”品系,进行生长性能的评估。评估分一龄和二龄阶段跟踪进行,共十七个试验。生长性能试验结果证明,不论是在青岛,湖州,上海还是在广州不论是池塘、水泥池,还是网箱养殖,不论是混养还是养     

鱼类化学诱变的研究

国外诱变育种工作始于1927年。Muller(1927)和Stad1er(1928)发现用X射线辐照，可以提高动植物的突变频率。1943年Auerbaeh和Robson在果蝇研究中发现了第一个化学诱变剂——芥子气，这又为诱变的研究揭开新的一页。目前已知有突变活性的化合物达数百种，并每年都在增加着。我国诱变育种始于1958年，廿多年来，用诱变方法育成的农作物新品种(或品系)，在数量和推广面积方面都已超过外国，成绩巨大。但在动物方面还很少应用，在家蚕、鱼类上的试验表明，仍有应用前景。鱼类化学诱变国内刚开始研究，国外则在六十年代就已开始，对象主要为鲤、鲢、鳙、淡水鲑、高白鲑和胭脂鱼等，不论在诱变方法和实践成果方面都取得了较大进展。现就国外鱼类化学诱变研究概况、进展作一评述。     

哈密产黄鳝的染色体组型分析

哈密产黄鳝的染色体组型分析王秀玲，吴敏，马英梅，刘伟，史为慧（新疆师范大学生物系，乌鲁木齐，８３００５３）关键词哈密产黄鳝，核型，分类ＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＫＡＲＹＯＴＹＰＥＯＦＭＯＮＯＰＴＥＲＵＳＡＬＢＵＳＩＮＨＡＭＩ￥ＷａｎｇＸｏｕｌｉｎｇ；ＷｕＭ...     

虹鳟肝癌一例

本文报道了对虹鳟肝脏肿瘤进行的组织学检验情况,认定为恶性肿瘤。病因为饲料中含黄曲霉毒素及鱼体老龄化。     

鲟鱼气泡病病例简报

本文首次对鲟鱼气泡病作了报道,文章对该病病症进行了描述。初步分析了鲟鱼气泡病病因,并提出了防治鲟鱼气泡病的几点意见。     

三种鲤对暴发性鱼病抗病力的差异

本文报道三种鲤对嗜水气单胞菌引起暴发性鱼病的抗病力试验结果。当菌液浓度为６．０×１０￣８ＣＦＵ／ｍｌ，采用１０￣０、１０￣（－１）、１０￣（－２）、１０￣（－３）四个稀释度、０．３ｍｌ／尾注射剂量时，建鲤、野鲤和镜鲤的半数致死量（ＬＤ＿（５０））分别为１０￣（－１．３７５）、１０￣（－０．９７６）、１０￣（－０．５６２）。这三种鲤的半数致死量差异显著（Ｆ＞Ｆ＿（０．０５））。从四个方面研究了抗病机理：白细胞吞噬功能和补体替代途径（Ｃ＿３旁路）杀菌能力，镜鲤较强于野鲤和建鲤，但无显著差异（Ｆ＜Ｆ０．０５）；红细胞Ｃ＿（３ｂ）受体花环率和补体总量（单位／ｍｌ），是建鲤＞野鲤＞镜鲤，差异极显著（Ｆ＞Ｆ０．０１）。本研究结果还表明建鲤的红细胞Ｃ＿（３ｂ）受体花环率和补体总量稍高，但对暴发性鱼病病原（嗜水气单胞菌）较易感染。以上结果证明，不同品系鲤鱼对暴发性鱼病有种内特异性。