日本对虾抗白斑病子三代的抗白斑综合征病毒感染能力及免疫特性

为了更好地进行日本对虾抗病良种的选育,本文用浓度为每毫升1×105个病毒粒子的对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)粗提液注射感染抗白斑病日本对虾子三代和普通日本对虾,观察其死亡率,同时测定WSSV感染后0,4,24,48和96 h血淋巴酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和蛋白含量.结果显示:注射WSSV 14 d内抗病子三代和普通对虾的平均死亡率分别为15%和85%,前者的抗病保护率达82.4%;感染前前者的各项免疫指标均高于后者,且PO,AKP和蛋白含量存在极显著差异(P＜0.01);感染后两者血淋巴检测的5项指标在96 h内的变化趋势基本相似,除ACP以外,抗病子三代的其他指标都比普通日本对虾的高.研究结果表明,所选育的抗白斑病日本对虾子三代能够有效地抵抗对虾白斑综合征病毒的侵染,其免疫指标也高于普通日本对虾.     

河流弧菌在天然海水与人工海水中的饥饿效应

对数生长期河流弧菌分别悬浮于天然海水和人工海水后于28℃进行饥饿试验.在饥饿初期,两种海水中河流弧菌的总菌数、活菌数、菌落形成单位数都明显上升,但天然海水中的河流弧菌生长时间持续更久、增长幅度也更大;饥饿中、后期,总菌数都保持稳定,而可培养菌数与活菌数逐渐下降,其中可培养菌数下降幅度高于活菌数,人工海水中的河流弧菌下降幅度高于天然海水.河流弧菌对青石斑鱼表皮粘液的粘附量随着饥饿时间延长先上升后下降.与对数生长期相比,饥饿60 d的可培养细胞对热和紫外线的耐受性提高.饥饿细胞的间接ELISA最低检测限高于对数生长期细胞.通过SDS-PAGE分析菌体蛋白发现饥饿细胞的蛋白质条带减少.腹腔注射饥饿60 d的河流弧菌不会引起小鼠死亡,而对数生长期细胞能够引起小鼠死亡.研究结果表明,河流弧菌能够在温暖的人工海水和天然海水中长时间饥饿存活,但是饥饿细胞的毒力较低.     

黄鳍鲷肝细胞体外培养研究

以黄鳍鲷肝脏细胞为材料 ,研究其肝细胞体外培养适宜的 p H、血清浓度、谷氨酰胺等条件 ,并进行传代培养试验。结果表明 ,培养液为 :MEM含 2 0 %小牛血清、15 g/ L L-谷氨酰胺及 p H 6 .9～ 7.1时 ,在 2 3℃中静置培养 ,黄鳍鲷肝细胞生长良好 ,3～ 5 d长满单层 ,细胞主要为成纤维细胞状 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1～ 2代为适应期 ,3～ 5代为旺盛期 ,6代之后表现出衰老现象     

不同环境条件对溶藻弧菌粘附大黄鱼肠粘液的影响

研究了不同环境条件下溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用。采用细菌计数法测定溶藻弧菌的粘附作用。粘附的细菌经SYBR GreenⅠ染色后在荧光显微镜下观察，用数码相机拍照后在电脑上计数。试验结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附量随菌浓度的升高而升高，并在1—1．5h内趋于饱和；粘附作用在15—30℃、pH偏酸时较强；盐度在5—35范围内对前肠粘液的粘附作用影响不明显，后肠粘液的粘附作用在此范围内随盐度增大而加强，在盐度为0时，溶藻弧菌对前、后肠粘液都无粘附作用；56℃热处理5min及60℃处理1h均能大幅减弱溶藻弧菌对两种肠粘液的粘附作用，表明溶藻弧菌表面的某些热敏结构在粘附作用中起着重要作用。根据以上结果，可以认为溶藻弧菌能够很好地粘附于大黄鱼肠粘液层，其粘附作用受温度、盐度、pH值等环境因子影响很大，溶藻弧菌表面的某些热敏结构可能在粘附过程中起着重要作用。研究结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用是可控制的，这对于鱼类养殖疾病的控制有一定的参考价值。     

鳗鲡肠道中嗜水气单胞菌的拮抗菌筛选

从鳗鲡肠道中分离到643株细菌,用点种法筛选出65株病原性嗜水气单胞菌的拮抗菌,研究拮抗效果最好的14株拮抗菌的抗菌谱、生长曲线以及与病原性嗜水气单胞菌的共凝集作用.研究结果显示：NAC琼脂培养基筛选的2株拮抗菌（Na3-38和Nb3-15）对7株指示菌均有较强的拮抗作用,Aa3-22和Mb3-7对7株指示菌中的5株有拮抗效果;除Na3-38和Nb3-15以外,其余12株的生长系数均大于嗜水气单胞菌;11株拮抗菌（Na3-38、Nb3-15、Ab2-55、Ab2-77、Ab1-3、Aa3-22、Aa3-67、Mb1-4、Mb2-10、Mb3-7和Mb3-27）和嗜水气单胞菌的共凝集率大于10%.这表明：Aa3-22和Mb3-7在抗菌谱、生长曲线以及与病原性嗜水气单胞菌的共凝集作用都适合作为益生菌.     

致病性嗜水气单胞菌生物膜的形成特性

应用改良的微孔板法研究了致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)B 11的生物膜形成特性.结果显示,嗜水气单胞菌Bil能够在聚苯乙烯酶标板表面形成稳定而明显的生物膜,其生物膜的OD_590值在6h即达到小高峰,于22 h达到峰值,其后随着培养时间的延长而降低;随着初始菌液浓度的增加,生物膜的OD_590值逐步降低;25℃的生物膜的OD_590值显著高于其他温度的生物膜生成量(P<0.05);在起始pH值为3～4的营养肉汤中,嗜水气单胞菌几乎不能形成生物膜,OD_590值接近空白对照,而在pH值为5-10的营养肉汤中,嗜水气单胞菌均能形成明显的生物膜,且差异性不显著(P>0.05);培养液中添加氯化镁达到1 mmol/L时,生物膜的OD_590值会显著性降低(P<0.05);培养液中添加氯化钙达到lmmol/L时,生物膜的OD_590值显著性提高(P<0.05);嗜水气单胞菌在肌肉组织液包被的96孔酶标板上的生物膜形成量有所增加(P<0.05),而在其他黏液和组织提取液包被的酶标板上的生物膜形成量与对照组相比没有显著性差异(P>0.05).研究结果表明,嗜水气单胞菌Bil能在聚苯乙烯酶标板表面形成稳定而明显的生物膜;其生物膜的形成能力受温度、酸碱度、起始菌液浓度、钙、镁离子浓度等因素的影响;肌肉组织提取液也存在能影响生物膜形成的成分.本研究旨在为探讨嗜水气单胞菌生物膜形成机制和致病机理提供参考.     

人工感染溶藻弧菌对大黄鱼免疫功能的影响

为了解大黄鱼在抗溶藻弧菌感染时免疫功能的变化规律，将160尾健康大黄鱼分为感染组和对照组，通过腹腔分别注射0.2 mL浓度为2×107 CFU·mL-1的溶藻弧菌和灭菌生理盐水，在注射0，1，3，7，11，15，19 d后从两组各取6尾大黄鱼，尾静脉取血，进行外周血的血相、NBT阳性细胞数、血清抗菌活力、抗体效价等免疫学指标的测定。结果显示：在人工感染的初期，感染组大黄鱼外周血的红细胞、白细胞、淋巴细胞和NBT阳性细胞的数量及血清抗菌活力等指标均较对照组有显著提高；在注射后1 d外周血粒细胞的数量显著低于对照组；抗体效价在7 d开始增加，15 d达到峰值，且用间接ELISA和试管凝集两种方法所得结果具有非常高的同步性。结果表明：在感染溶藻弧菌后，大黄鱼能通过红细胞和白细胞增殖、释放抗菌物质、产生特异性抗体等方式提高其对溶藻弧菌的免疫力；在感染的早期阶段非特异性免疫因子起主要作用，在感染后期阶段特异性免疫因子起重要作用；NBT阳性细胞数可以作为细菌感染的指标。图2表1参24     

病原性河流弧菌对青石斑鱼体表黏液黏附特性研究

采用3H-TdR同位素示踪法研究了河流弧菌对不同处理后的青石斑鱼表皮黏液的黏附作用。结果显示：青石斑鱼表皮黏液经40、60和80 ℃热处理10 min后河流弧菌的黏附率出现显著性升高，而100 ℃处理10 min则能极显著降低河流弧菌的黏附作用；蛋白酶K和胰蛋白酶处理黏液对河流弧菌的黏附作用没有显著影响，高碘酸处理则能极显著提高河流弧菌的黏附率；8种碳水化合物中的葡萄糖、甘露糖、甘露醇、麦芽糖能极显著促进河流弧菌的黏附作用，乳糖、果糖及蔗糖能显著性促进河流弧菌的黏附作用；半乳糖则没有显著性影响；高浓度的细胞表面提取物能显著抑制河流弧菌的黏附作用，但较低浓度的细胞表面提取物反而有一定的促进作用；青石斑鱼表皮黏液经Sephadex G-100分离得到3个洗脱峰，河流弧菌对第1个洗脱峰的黏附作用最强。本文研究结果表明，病原性河流弧菌对青石斑鱼表皮黏液有较强的黏附作用；青石斑鱼表皮黏液中存在特异性黏附受体；黏液中的主要黏附受体是热稳定性较高、耐蛋白酶K和胰蛋白酶的大分子物质。     

嗜水气单胞菌感染后牛蛙血清中抗菌物质的初步研究

用1×107 mL-1的嗜水气单胞菌腹腔注射感染牛蛙，注射后7 d内试验组牛蛙血清抗菌活性都高于对照组，其中在3 d、7 d时存在显著性差异，峰值出现在感染后第3天。收集第2批人工感染后3 d时牛蛙的血清。该血清经Sephadex G25凝胶柱分离后,并在波长280 nm处测定紫外吸收值，得到两个吸收峰。以嗜水气单胞菌检测分离物的抗菌活性,结果表明经诱导的血清抗菌物质主要集中在第1个吸收峰。通过对金黄色葡萄球菌等10株指示菌抗菌谱的测定，其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌等具有明显的抗菌作用；SDSPAGE分析显示抗菌蛋白分子量较大。结果说明：牛蛙被嗜水气单胞菌感染后能很快产生多种抗菌物质，主要的抗菌物质是分子量比较大的物质，这些抗菌物质对部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌有抗菌作用。图3表1参24 关键词：牛蛙；嗜水气单胞菌；抗菌蛋白；抗菌活性     

河流弧菌对石斑鱼体表黏液的黏附作用

采用^3H-TdR同位素示踪法研究了河流弧菌（Vibrio fluvialis）TS-1对青石斑鱼（Epinephelus awoara）表皮黏液的黏附作用。研究结果显示，经TSB培养的河流弧菌对青石斑鱼表皮黏液的黏附作用极显著高于经TSA培养的河流弧菌（P〈0．01）；河流弧菌经TSB培养后能很好地黏附于青石斑鱼表皮黏液，其黏附量随菌浓度升高而增大并符合饱和黏附动力学特征；不同生长阶段河流弧菌的黏附能力不同，在培养初期阶段细菌的黏附量先是随着培养时间的延长而增大，并在培养24h后黏附量达到最大，而后随培养时间的延长其黏附量急剧下降。本实验研究结果表明，河流弧菌对青石斑鱼表皮黏液有较强的黏附作用，其黏附作用受细菌培养条件、营养状况等自身因素的显著影响。本研究结果有助于了解河流弧菌的流行病学和致病机理。[中国水产科学，2008，15（2）：347—351]