益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ28启动子的抑制作用（英文）

为了研究益生菌发酵乳无菌提取物对食源性有害微生物(空肠弯曲杆菌)有毒基因表达的抑制作用,以利用空肠弯曲杆菌的有毒基因flaA σ28启动子和无启动子的质粒pRYluxCDABE联结构建的生物冷光转基因模型为试验材料,通过检测生物发光特性的方法,研究了空肠弯曲杆菌有毒基因flaA表达与益生菌(5种双岐杆菌,6种乳酸杆菌)发酵乳无菌提取物之间的关系。结果表明,益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ28启动子的活性有显著的抑制作用(P<0.05),并可显著抑制空肠弯曲杆菌有害基因flaA的表达。     

空肠弯曲菌flaA基因序列及功能预测分析

[目的]对空肠弯曲菌空肠弯曲菌flaA基因的序列及功能进行预测分析。[方法]分析了多个空肠弯曲菌flaA核酸及氨基酸序列组成和序列差异性;预测分析了flaA基因密码子使用偏好性、蛋白结构和功能域、Fla A与相关功能蛋白的互作情况。[结果]不同菌株的flaA基因序列存在差异性,且差异主要存在于序列的中间区域。不同空肠弯曲菌菌株的同一基因在密码子选择上存在差异。Fla A与多个蛋白存在不同形式的相互作用。[结论]该研究可为空肠弯曲菌flaA基因序列分析和功能研究应用提供基础和依据。     

抗猪传染性胃肠炎病毒益生菌的分离、筛选及鉴定

试验从健康仔猪肠道内容物内分离筛选具有抗猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis coronavirus,TGEV)活性的益生菌。从健康仔猪肠道内容物内分离获得69株乳酸菌,通过致细胞病变(CPE)作用初步筛选出18株具有影响TGEV致细胞病变的乳酸菌,在体外试管平台上,将获得的18株乳杆菌分别与定量的TGEV感作后取上清,将病毒上清感染ST细胞,运用MTT比色法测定候选菌株对TGEV感染ST细胞的抑制作用。结果表明,18株中的2株益生菌对TGEV感染ST细胞有显著的抑制作用,其他16株对TGEV感染ST细胞的抑制作用不显著。对2株具有显著作用的益生菌进行生化鉴定及16SrRNA鉴定,最终确定为罗伊氏乳杆菌和发酵乳杆菌。     

热休克蛋白对枯草芽孢杆菌抗逆性和乙醇产量的影响

[目的]研究热休克蛋白对增强枯草芽孢杆菌的抗逆性和增加乙醇产量的影响。[方法]运用基因工程技术,用大肠杆菌的Lac启动子、运动发酵单胞菌丙酮酸脱羧酶基因(pdc)和乙醇脱氢酶基因(adhB),构建在枯草芽孢杆菌中表达的BLAP操纵子,BLAP操纵子导入枯草芽孢杆菌可使其发酵糖生产乙醇。然后用超嗜热菌强烈火球菌(Pyrococcusfuriosus)的小分子热休克蛋白基因(sHsp)构建在枯草芽孢杆菌中表达的BLAPH操纵子。[结果]成功地构建了能表达小分子热休克蛋白,产生乙醇的枯草芽孢杆菌。[结论]小分子热休克蛋白的表达,使枯草芽孢杆菌在致死温度下的存活率显著提高,对温度及乙醇的耐受性显著增强。同时枯草芽孢杆菌的乙醇产量显著提高。     

透明颤菌vgb基因在枯草芽孢杆菌中的整合表达

【目的】将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgb)在枯草芽孢杆菌中进行整合表达,提高β-半乳糖苷酶的产量。【方法】用枯草芽孢杆菌整合载体pA01和启动子P43构建vgb基因的整合表达载体pA-vgb,通过双交叉整合方式,将vgb基因整合到枯草芽孢杆菌DB104:bga的染色体上,构建枯草芽孢杆菌DB104:vbga。采用PCR和Southern blot对DB104:vbga进行检测,并通过发酵摇瓶试验研究VHb对β-半乳糖苷酶产量的作用。【结果】PCR与Southern blot检测结果表明,枯草芽孢杆菌DB104:vbga中vgb基因整合位置正确,且表达的VHb蛋白具有生物学活性。摇瓶试验结果表明,在转速250 r/min条件下,枯草芽孢杆菌DB104:vbga与DB104:bga的β-半乳糖苷酶活性无显著差异;在150 r/min的限氧条件下,vgb基因的表达促使DB104:vbga的β-半乳糖苷酶活性较DB104:bga提高了14.9%。【结论】vgb基因可用于提高枯草芽孢杆菌目的蛋白的产量。     

空肠弯曲杆菌多酶脉冲场电泳基因分型研究

为提高脉冲场电泳(PFGE)技术对空场弯曲杆菌的分型效果,利用6种限制性内切酶对33株空肠弯曲杆菌进行了基因分型研究,结果发现,BamHⅠ是单酶中分型效果最好的一种限制性内切酶,结合KpnⅠ和SacII,可以提高PFGE在空肠弯曲杆菌基因分型中的效果.     

植物乳杆菌K25发酵乳对衰老模型小鼠的抗氧化作用

利用1株经体外筛选具有较强抗氧化活性的植物乳杆菌K25制备成植物乳杆菌K25发酵乳,灌胃经D-半乳糖所致衰老模型小鼠,研究该益生菌发酵乳在小鼠体内的抗氧化作用.结果表明:植物乳杆菌K25发酵乳能显著地提高衰老模型小鼠血清和肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC),同时能降低小鼠血清和肝组织中丙二醛(MDA)含量.     

植物乳杆菌制剂对断奶仔猪肠道黏膜功能和微生物菌群及短链脂肪酸的影响

[目的]本试验旨在研究植物乳杆菌制剂对苏淮断奶仔猪肠道黏膜营养素转运体、紧密连接蛋白相关基因表达量、微生物菌群数量、短链脂肪酸及乳酸含量的影响。[方法]选取胎次和体质量(9.34 kg)相近的28日龄健康苏淮断奶仔猪144头,按饲喂日粮随机分为对照组(基础日粮)、抗生素组(基础日粮+抗生素)、植物乳杆菌制剂组(基础日粮+植物乳杆菌制剂),每组6个重复,每个重复8头仔猪。预饲期3 d,仔猪32日龄开始试验,59日龄试验结束时屠宰采样。采集十二指肠、空肠、回肠组织及黏膜样品分别用于黏膜营养素转运体和紧密连接蛋白相关基因表达量分析;分别收集盲肠和结肠食糜,测定短链脂肪酸和乳酸含量,RT-qPCR分析微生物菌群数量。[结果]与对照组相比,植物乳杆菌制剂组可显著上调十二指肠PepT1、空肠SGLT-1和PepT1以及回肠SGLT-1基因的相对表达量(P0.05),与抗生素组相比,植物乳杆菌对各基因的相对表达量均无显著影响(P0.05);与对照组和抗生素组相比,植物乳杆菌制剂组可显著上调十二指肠Occludin、空肠和回肠Occludin和ZO-1基因的相对表达量(P0.05),而对十二指肠、空肠、回肠其他基因无明显影响(P0.05);与对照组相比,植物乳杆菌制剂组可显著增加盲肠丁酸、结肠丁酸和乳酸的含量(P0.05),而对乙酸和丙酸无显著影响(P0.05);显著减少大肠杆菌数量(P0.05),显著增加结肠乳酸杆菌和梭菌ⅩⅣa群的数量(P0.05);相较于抗生素组,植物乳杆菌制剂可显著提高盲肠乳酸、结肠乳酸和丁酸含量以及盲肠和结肠中乳酸杆菌的数量(P0.05)。[结论]仔猪断奶时饲喂植物乳杆菌制剂可调节肠道黏膜营养素转运体及紧密连接蛋白相关基因表达量,提高短链脂肪酸和乳酸含量,促进肠道有益菌如乳酸杆菌、梭菌ⅩⅣa群的增殖,减少病原菌如大肠杆菌数量,从而促进肠道健康,缓解断奶应激。     

两株发酵乳杆菌体外抗氧化活性研究

[目的]本文旨在研究分离自金华火腿中发酵乳杆菌Y4和Y41的体外抗氧化活性。[方法]分别制备发酵乳杆菌的无细胞提取物、发酵上清液和菌悬液,以维生素C为阳性对照,通过测定1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟自由基(·OH)清除率、超氧阴离子自由基(O_2~)清除率和氧自由基清除活性来评价2株发酵乳杆菌Y4、Y41的自由基清除能力,并通过测定抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性探讨发酵乳杆菌的抗氧化机制。[结果]2株发酵乳杆菌的无细胞提取物具有较强的O_2~清除率和氧自由基清除能力,发酵上清液和菌悬液分别具有较强的DPPH自由基清除率和·OH清除率。菌株Y41的羟自由基及氧自由基清除能力均显著高于Y4(P0.05),其DPPH自由基清除率显著低于Y4;菌株Y41无细胞提取物O_2~清除率显著高于Y4,但发酵上清液清除率显著低于Y4。此外,2株菌株无细胞提取物中均检测到具有SOD和GSH-Px活性。[结论]2株发酵乳杆菌都具有较高的抗氧化活性,其中菌株Y41的抗氧化能力更强,其中无细胞提取物具有更高的氧自由基清除能力和SOD活性。     

不同益生菌发酵猴头菇对粗多糖提取工艺及其抗氧化能力的影响

为探究益生菌发酵处理猴头菇对粗多糖提取及其抗氧化性的影响,探讨嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌、酵母菌(高糖型)发酵处理对猴头菇水提物提取率及其多糖含量的影响,以及分析不同益生菌发酵后对粗多糖总抗氧化能力与红外光谱结构的影响。结果表明：与未经益生菌发酵相比,嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌、酵母菌(高糖型)发酵后猴头菇水提物提取率分别降低7.50%、3.50%、10.10%,但提取物中粗多糖含量分别提高25.46%、26.98%、20.20%,其中长双歧杆菌发酵得到的粗多糖提取率最高(11.55%);单因素和正交试验优化得到益生菌发酵猴头菇最佳工艺为：长双歧杆菌添加量为20%、发酵时间4 h、发酵温度42℃,在此最佳工艺条件下水提物提取率为27.85%,提取物中粗多糖含量为62.87%,粗多糖提取率为17.51%。猴头菇经酵母菌发酵后,粗多糖总抗氧化能力最高,达6.07 umol·g^-1;长双歧杆菌发酵后的粗多糖总抗氧化能力与未经益生菌发酵的粗多糖没有显著差异(P<0.05)。不同益生菌发酵后与未发酵的猴头菇粗多糖的傅立叶红外光谱图基本相似,峰位置略微偏移,具有相似的官能团。     

一种双歧杆菌发酵乳的研制

双歧杆菌作为一种典型的益生菌,其促进人体健康的有益作用越来越受到人们的重视。双歧杆菌乳制品利用双歧杆菌的益生作用在功能性乳制品的研发过程中也占有重要的一席之地。在一种双歧杆菌发酵乳的研制过程中,利用正交试验优化了这种双歧杆菌发酵乳的发酵条件:接种量4%、发酵温度40℃、菌种配比(保加利亚乳杆菌∶嗜热链球菌∶双歧杆菌)为3∶2∶1。     

基于短乳杆菌S层启动子组成型乳酸杆菌表达系统的构建

以大肠杆菌和乳酸菌穿梭分泌表达型载体pPG612为基本模型,用短乳杆菌S层启动子SlpA替换载体上gusA启动子,并以TGEV N蛋白基因为目基因构建一种乳酸杆菌组成型表达载体,用以检测SlpA启动子在三种不同乳酸杆菌中表达能力。结果表明,该组成型启动子具有表达外源功能蛋白功能,且具有严格宿主选择性,为进一步利用该载体及组成型启动子进行其他应用奠定了基础。     

木瓜益生菌发酵饮料工艺优化及品质分析

以光皮木瓜[Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne]果实为主要原料,益生菌为发酵菌种,研制木瓜益生菌发酵饮料,并对发酵前后木瓜汁品质变化进行研究。结果表明,植物乳杆菌及类干酪乳杆菌经驯化后可用于木瓜汁的发酵,复配比例4∶6较为适宜。木瓜益生菌发酵饮料的最优工艺为:发酵温度36℃,菌种用量2.5%,发酵时间24 h,在此条件下,活菌数可达8.79 lg(cfu/mL),产酸量为12.2 g/kg。益生菌发酵对木瓜汁的总酸、游离态酚和结合态酚含量影响较大,有利于改善木瓜汁的营养品质,表现为总酸含量增加8.01%,游离态酚增加38.5%,结合态酚减少51.9%。     

凝结芽孢杆菌对畜禽肠道有害菌及有益菌的抑菌性能研究

为了评估一株饲用益生菌凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans,菌株编号为YNAU 5517)对畜禽肠道主要有害菌(大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、猪霍乱沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、产气荚膜梭菌)及肠道有益菌(罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌)的抑制作用,试验设计无菌蒸馏水组、土霉素组、凝结芽孢杆菌组等3个处理组,采用牛津杯抑菌试验法,以抑菌圈直径值(Diameter of inhibition zone,DIZ)判定该株凝结芽孢杆菌对以上7个指示菌的抑制作用及效果。结果显示:该凝结芽孢杆菌对猪霍乱沙门氏菌的抑制作用达到高敏感;对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌及产气荚膜梭菌的抑制作用均为敏感;对罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌的抑制作用为不敏感。以上结果提示凝结芽孢杆菌具有抑制肠道有害菌、维持肠道有益菌、平衡畜禽肠道菌群的作用。     

四株益生菌体外抑制大肠杆菌K88株的研究

将4种机体消化道固有益生菌(产朊假丝酵母、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌)进行体外抑制大肠杆菌K88的试验.分别将益生菌单独、4种混合与K88共培养,取4种益生菌单独和混合培养的发酵滤液用牛津杯做K88抑制试验,分别将培养滤液经过乳酸脱氢酶、酸、碱、热处理.结果表明:4种益生菌皆具有抑菌功能,其中嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌的发酵滤液具备明显的抑菌能力,滤液中的抑菌物质热稳定性较好;培养滤液经乳酸脱氢酶或碱处理后抑菌能力明显下降,经乳酸处理后其抑菌能力有所增加;4种益生菌混合培养的抑菌能力强于单独培养.     

cry1Ac基因启动子表达Vip3Aa蛋白特性分析

苏云金芽胞杆菌cry基因启动子常用于构建蛋白表达载体。为探讨苏云金芽胞杆菌cry基因启动子指导Vip3Aa蛋白表达情况及杀虫活性,以p UC19载体为基础,运用重叠引物PCR方法构建Vip3Aa11表达载体,并与由T7启动子指导的Vip3Aa11表达蛋白杀虫活性、抗胰蛋白酶稳定性比较,初步探索发酵条件。结果表明,cry1Ac启动子与T7启动子均在上清液中表达大小为88 ku Vip3Aa11蛋白,对甜菜夜蛾、棉铃虫杀虫活性差异不显著,cry1Ac基因启动子在37℃、48 h更适合Vip3Aa11蛋白的表达,为vip基因表达、功能验证及杀虫机理等研究提供新思路。     

具有降胆固醇功能乳酸菌对高血脂症大鼠血脂的影响

研究体外具有降胆固醇功能的乳酸菌在体内的辅助降血脂作用。该文利用高脂饲料建立高血脂症大鼠模型,通过灌胃发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)f5发酵液,研究其对高血脂大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C,肝脏TC、TG及粪便TC、TG、TBA的调节作用。结果表明,饲喂14d高脂饲料显著提高了大鼠血清TC、TG、LDL-C的水平(P0.05),HDL-C的水平显著低于空白对照组(P0.05),高脂饲料还显著增加了大鼠的肝指数及血清、肝脏的TC、TG含量(P0.05);28d发酵乳杆菌f5发酵液的干预显著提高了高血脂大鼠对饲料的利用率(P0.05),对大鼠肝指数有显著的改善作用(P0.05),同时f5发酵液组大鼠血清的TC、TG及LDL-C水平显著低于模型组(P0.05),肝脏的TC、TG含量显著降低(P0.05),粪便中TC、TG及TBA的含量显著高于模型组(P0.05)。发酵乳杆菌f5具有良好的辅助降血脂功能,可作为良好的候选益生菌菌株。     

干发酵香肠中乳酸菌发酵剂的选择

5种乳酸菌 (植物乳杆菌 6 0 0 3、嗜酸乳杆菌 6 0 0 5、弯曲乳杆菌 6 0 31、干酪乳杆菌 6 0 33和戊糖片球菌10 196 )分别与葡萄球菌 10 14 5混合作为干发酵香肠的发酵剂 ,测定并比较不同发酵剂的干发酵香肠的产品质量 ,结果表明 :5种乳酸菌中 ,植物乳杆菌 6 0 0 3和干酪乳杆菌 6 0 33是较适合制作干发酵香肠的乳酸菌发酵剂 ,而且植物乳杆菌 6 0 0 3具有最强的生长及产酸能力     

猪源发酵乳杆菌的筛选及其潜在益生性能

【目的】对从健康仔猪粪便中筛选分离出一株发酵乳杆菌 的益生性能进行测试，为其在畜禽动物 养殖中的应用提供参考。【方法】采用 Rogosa SL 完全选择性培养基分离出 106 株乳酸菌，通过革兰氏染色、酸 和胆盐耐受初步筛选出 1 株潜在的饲用乳酸菌，经 16S rDNA 序列鉴定为发酵乳杆菌 LF1，并对其益生性能潜力 进行评估，包括抑菌活性 ( 针对大肠杆菌 K88、金黄色葡萄球菌、猪链球菌、沙门氏菌以及弧菌等 12 种病原菌 )、 对模拟胃液中酸性环境的耐受性、对胆盐的耐受性以及对小肠上皮细胞的粘附性。【结果】发酵乳杆菌 LF1 耐 酸和耐胆盐的能力较强，显示出较强的益生菌潜力，但 LF1 菌株对猪肠道上皮细胞的粘附能力不强。在生物拮 抗作用方面，发酵乳杆菌 LF1 的培养上清可以显著抑制多种常见动物病原菌生长。【结论】发酵乳杆菌 LF1 具 有较好的益生性能，通过进一步的动物实验评估后，可以作为应用于畜禽养殖业的益生菌候选菌株。     

干酪乳杆菌对雏鸡空肠黏膜结构及炎性因子水平的影响

为研究干酪乳杆菌对沙门菌感染雏鸡空肠黏膜上皮损伤的保护作用,以450只1日龄SPF健康雏鸡为研究对象,随机分成正常对照组、沙门菌组、干酪乳杆菌组、预防组、治疗组和预防治疗组,每组5个重复,每个重复15只鸡。分别用HE染色和酶联免疫吸附(ELISA)法检测雏鸡肠道黏膜结构变化和肠道中炎性因子表达量的变化情况。结果显示:1)与沙门菌组相比,饲喂干酪乳杆菌预防使肠绒毛上皮柱状细胞排列整齐,维持肠绒毛的完整性。2)饲喂干酪乳杆菌使得沙门菌感染组的促炎因子IL-17、IFN-γ和TNF-α的表达量显著减少(P<0.05),而抗炎因子IL-10的表达量显著增多(P<0.05)。综上,饲喂干酪乳杆菌能保护雏鸡肠道健康,减轻沙门菌对雏鸡空肠黏膜的损害,加强肠道的免疫功能。本研究为干酪乳杆菌预防畜禽沙门菌感染并应用于生产实践提供理论依据。