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1.
试验旨在获得具有天然构象且抗原性良好的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)强毒株的H蛋白。以分离的CDV强毒株BJ16B2为模板,RT-PCR特异扩增H基因,克隆至表达载体pFastBacTM HTA上,酶切及测序鉴定正确后比对分析H基因同源性,并将重组质粒pFastBacTMHTA-H转化大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞,同源重组构建穿梭质粒rBacmid-H,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒。利用IFA和Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。结果显示,重组质粒pFastBacTMHTA-H酶切测序鉴定正确,该H基因属于Asia-1强毒株,与参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.8%~99.3%和89.6%~99.5%。在杆状病毒中所表达的H蛋白能与CDV阳性血清及His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定能够产生特异性绿色荧光,且在68 ku左右出现蛋白条带,表明H蛋白成功表达且具有良好的反应原性。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,为后续蛋白结构和抗原特性差异分析、单抗制备、CDV亚单位疫苗的开发奠定了基础。 相似文献
2.
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试验旨在获得具有天然构象且抗原性良好的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)强毒株的H蛋白。以分离的CDV强毒株BJ16B2为模板,RT-PCR特异扩增H基因,克隆至表达载体pFastBacTMHTA上,酶切及测序鉴定正确后比对分析H基因同源性,并将重组质粒pFastBacTMHTA-H转化大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞,同源重组构建穿梭质粒rBacmid-H,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒。利用IFA和Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。结果显示,重组质粒pFastBacTMHTA-H酶切测序鉴定正确,该H基因属于Asia-1强毒株,与参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.8%~99.3%和89.6%~99.5%。在杆状病毒中所表达的H蛋白能与CDV阳性血清及His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定能够产生特异性绿色荧光,且在68ku左右出现蛋白条带,表明H蛋白成功表达且具有良好的反应原性。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,为后续蛋白结构和抗原特性差异分析、单抗制备、CDV亚单位疫苗的开发奠定了基础。 相似文献
4.
采用Vero/SLAM细胞,从疑似犬瘟热病毒(CDV)感染犬的眼鼻分泌物拭子中分离到1株病毒,经细胞病变(CPE)观察、RT-PCR检测和间接免疫荧光试验鉴定,确定该分离株为CDV,命名为BJ16B2。对其H基因进行克隆和测序分析,BJ16B2株属于Asia-1型;潜在N-糖基化位点分析,共有9个位点,且在309~311位点,为强毒株。同源性比对分析发现,BJ16B2与参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为88.7%~99.5%和86.5%~99.5%。其中与Asia-1型SY株同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性均为99.5%,与疫苗株Snyder Hill、CDV3、Convac以及Onderstepoort亲缘关系较远,核苷酸和氨基酸同源性分别为90.6%~91.1%和90.3%~91.4%。强毒株BJ16B2的成功分离以及对其H基因序列分析,有利于进一步了解当前中国CDV流行株变异情况,为CDV毒力变化和宿主嗜性的研究提供参考依据。 相似文献
5.
6.
为研究日粮中添加富硒益生菌(SP)对山羊瘤胃发酵和瘤胃液脂肪酸含量变化的影响,以8头装有永久性瘘管的山羊为对象,采用4×4拉丁方设计,进行4期试验,每期15 d。日粮中分别添加0(对照)、8(LSP)、16(MSP)和32(HSP)mL.d-1的SP。结果表明:日粮添加SP能显著影响山羊瘤胃pH值(P<0.01)、总挥发性脂肪酸(P<0.05)、微生物蛋白(P<0.05)和trans11-C18∶1浓度(P<0.05);并有升高瘤胃乙酸比例(P=0.08)、α-C18∶3浓度(P=0.07)以及降低瘤胃丁酸比例(P=0.05)、氨氮浓度(P=0.08)的趋势。说明日粮添加SP对缓解瘤胃pH值的下降,促进瘤胃总挥发性脂肪酸的产生、微生物蛋白的合成和对氨氮的利用,以及提高瘤胃液α-C18∶3和共轭亚油酸前体trans11-C18∶1的含量有积极作用。 相似文献
7.
8.
为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的VP5重组蛋白以可溶形式表达,分子质量约为112.2 ku。利用MBP标签对重组蛋白进行纯化,并以其作为包被抗原,间接ELISA检测山羊血清样品,结果 5份羊血清P/N值均大于1,其中有1只羊检测结果 P/N值为2.396,鉴定为阳性血清,表明重组蛋白可以与VP5抗体反应,可以作为检测BTV VP5抗体的抗原,为今后进一步开展BT诊断研究奠定了基础。 相似文献
9.
日粮添加富硒益生菌对奶牛硒吸收转化、抗氧化能力与生产性能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
将36头经产荷斯坦奶牛随机分成4组,对照组喂基础日粮,富硒益生菌(Se-Pro)组每头牛添加108.2 g/d,益生菌(Pro)组每头牛添加20.8 g/d,亚硒酸钠(Na2seO3)组每头牛添加5 mg/d.试验期为产前30 d至产后3个月.于试验0、30、60、90、120 d,采血样测定全血se含量、GPx活性和血浆丙二醛(MDA)含量;于产后2(初乳)、30、60、90 d,采乳样测定se含量;产后每个月测定产奶量1次.结果显示,Se-Pro组和Na2SeO3组的全血、初乳、常乳Se含量和GPx活性均显著高于对照组和Pro组(P<0.05);Se-Pro组的全血、常乳Se含量和GPx活性(30 d除外)均显著高于Na2SeO3组(P<0.05);Se-Pro组和Na2SeO3组的血浆MDA含量均显著低于对照组和Pro组(P<0.05);Se-Pro组的血浆MDA含量均显著低于Na2SeO3组(P<0.05);与对照组相比,Se-Pro组、Pro组、Na2SeO3组的泌乳期前3个月的平均日产奶量(4%FCM)分别增加了2.96 kg/d(P=0.069)、1.64 kg/d(P>0.05)、0.69kg/d(P>0.05).结果表明,Se-Pro的作用效果优于Pro和Na2SeO3. 相似文献
10.
高钙饲粮对青年蛋鸡血清一氧化氮浓度和抗氧化功能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
本试验旨在研究高钙饲粮对青年蛋鸡血清一氧化氮(NO)浓度和抗氧化功能的影响。将 35日龄 100羽伊沙蛋鸡随机均分为对照组(含钙 1.00%)和高钙组(含钙 3.78%),每组 5个重复,每个重复 10羽。每天观察鸡的精神状态、食欲和粪便情况。在饲喂高钙饲粮第 0、8、16、24和 32天时,分别测定 2组鸡的血清中 NO浓度和丙二醛含量及抗氧化酶系统的变化。结果表明:1)高钙饲粮能引起青年蛋鸡长期腹泻,在饲喂高钙饲粮的第 8天就发生高血钙症。2)与对照组相比,高钙组在饲喂高钙饲粮第 8天和第 16天血清 NO浓度无显著变化(P>0.05),第24天和第 32天显著升高(P<0.05);第 8天和第 24天血清超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力无显著变化(P>0.05),第 16天显著升高(P<0.05),第 32天显著降低(P<0.05);第 8、16、24天血清丙二醛含量无显著变化(P>0.05),第 32天显著升高(P<0.05);第 24天和第 32天黄嘌呤氧化酶活性有升高趋势(P>0.05)。结果提示,饲喂高钙饲粮可导致青年蛋鸡发生长期腹泻,引起高血钙症,导致其机体内自由基的产生与清除的动态平衡遭到破坏,使自由基的产生远远超出清除能力。 相似文献