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采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-Ⅰ(huIGF-I)基因的4条寡核苷酸 片段,再通过片段1、2与3、4末端互补配对和Klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huIGF-IDNA片段,用 EcoR I/PstI酶切后克隆于 pGEM T-Easy Vector,经测序证明所得 DNA序列与设计的序列完全一致;选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ATG下游的6个密码子,并在ATG处增加Kozak序列后,插入pBI121的BamHI/ SacI位点,构建了以 35S为启动子的植物表达载体;以 Hind II/EcoRI切下“35S-Kozak-IGF-I-NOS(ter.)”插入 pCAMBIA2300之Hind II/EcoR I位点,构建成huIGF-I植物表达载体;通过CaCl2直接转化法将表达载体导入农 杆菌EHA105(Rif.r),并以菌落原位杂交技术和 DNA dot blot对重组农杆菌进行了筛选,所获得的重组农杆菌菌株为培育huIGF-I豆药用植物奠定了基础。 相似文献
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谷胱甘肽还原酶基因的表达载体构建及对马铃薯的转化 总被引:3,自引:0,他引:3
利用 pGR202和 pBin19两种质粒经过 pBI 222的改建,含有 CaMV35S启动子和 Nos终止子的 CN区DNA片段与 pBin19的 Bin区 DNA片段的不对称连接和目的基因 GR的 cDNA重组于真核表达双元载体三步亚克隆,筛选出一正向插入的谷胱甘肽还原酶基因的真核表达双元载体质粒pBin-CN-GR。再利用此质粒转化的农杆菌LBA4404进行马铃薯的遗传转化.并分化出卡那霉素抗性苗。过氧化物同工酶和酯酶同工酶谱带显示转化材料与对照之间存在显著的差异.表明转化材料的基因表达发生了变化。对转化影响因素的研究发现培养基的组成成分、选择压(Km)添加浓度及加入时机是影响转化率的重要因素。 相似文献
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根癌农杆菌介导转化抗虫基因获得转基因烟草 总被引:5,自引:0,他引:5
将抗虫PI基因构建到pIG121Hm质粒的T-DNA上,利用农杆菌LBA4404介导转化烟草,获再生植株。经GUS检测和Dot blot分析,证实外源基因已插入植物细胞基因组中,再生植株的转化率为64.3%。 相似文献
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将抗虫PI基因构建到pIG121Hm质粒的T-DNA上,利用农杆菌LBA4404介导转化烟草,获再生植株.经GUS检测和Dotblot分析,证实外源基因已插入植物细胞基因组中,再生植株的转化率为64.3%. 相似文献
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以美味猕猴桃东山峰78-16的茎段愈伤组织块为受体,根癌农杆茵(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404(pBI121)作介导菌,将愈伤组织块与农杆菌共培,扫描电镜观察农杆菌在愈伤组织块细胞表面上的附着情况;将共培后的愈伤组织块转移到含50μg/mL的卡那霉素(Kan)筛选培养基上筛选,获得抗Kan的抗性苗。抗性苗的获得初步证明外源新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)基因已整合到受体基因组中并得以表达。 相似文献
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青花菜子叶和下胚轴原生质体的遗传转化系统 总被引:2,自引:0,他引:2
用根癌农杆菌共培养法将外源基因导入青花菜上海1号的无菌苗子叶及下胚轴原生质体。菌株为EHA105,携带质粒pMOG410,含GUS和NPTⅡ基因,实验得出其子叶芽分化率最高的激素组合为6-BA 5mg/L+IAA 0.1mg/L。原生质体以8 ̄10℃暗培养5 ̄6d,然后于25℃光照8h生长的无菌苗下胚轴切片游离出的密度最高,K8P培养基激素组合(mg/L)以2,4-D1.0+BA0.5+NAA0. 相似文献
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用携带植物抗病毒基因表达栽体pBTU的农杆菌转化油菜双低品种H090.H166,最大量转基因植株。栽体质粒PBTU上有卡那霉素抗性标记基因和CaM35S启动子控制的芜菁花叶病毒TuMV-cp外壳蛋白基因,用品种H090和166的带柄子叶与携带载体质粒的农杆菌共培养后,将其转移到含有6-BA1-10mg/l的MS培养其中,7-15天后又将其转移到含有6-BA1-10mg/l的MS加卡那霉素10mg的 相似文献
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通过对CaMVCABB-BJI和Bari-1株系基因Ⅵ的克隆和转化,在根癌农杆菌菌种GV3101的介导下,利用真空渗入法获得了转化CABB-BJI和Bari-1基因Ⅵ的拟南芥转基因植株。分子检测表明,基因Ⅵ已整合进拟南芥基因组并有不同程度的表达。在转基因植株中,出现了类似病毒感染症状、多生长点及花粉生活力较低等个体的变异株。而多数转基因植株(占转基因植株70.4%)为无症状的正常植株。对转化CaMVBari-1株系基因Ⅵ的9个无症状转基因株系接种CaMVCABB-BJI病毒抗性表明,9个转基因株系表现出了不同的抗性 相似文献
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西瓜遗传转化体系优化的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
以农杆菌LBA4404/pBin19-Chi-Glu为介导,从不同苗龄的外植体、不同预培养时间、不同菌液浓度和侵染时间及对菌液进行不同的预处理等方面对西瓜的遗传转化体系进行了优化。结果表明用0.1mM乙酰丁香酮和1mM脯氨酸共同预处理农杆菌菌液均可显著地提高KanR芽的分化频率。以西瓜子叶为材料,用苗龄2d,预培养2d,共培养4d,菌液浓度OD600=0.5,侵染10min的体系较佳,KanR芽的分化频率可达11.8%。 相似文献
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CaMV基因Ⅵ在拟南芥上的遗传转化及交叉保护 总被引:2,自引:2,他引:2
通过对CaMV CABB-BJI和Bari-1株系基因Ⅵ的克隆和转化,在根癌农杆菌菌种GV3101的介导下,利用真空渗入法获得了转化GABB-BJI和Bari-1基因Ⅵ的拟南芥转基因植株。分子检测表明,基因Ⅵ已整合进拟南芥基因组并有不同程度的表达。在转基因植株中,出现了类似病毒感染症状、多生长点及花粉生活力较低等个体的变异株。而多数传基因樾株(占转基因植株70.4%)为无症状的正常植株。对转化Ca 相似文献
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将办云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白CryⅠA基因的高保守区EcoRI-F片段重组到pSE-LECT-1载体的EcoRI位点,构建出能够高效转录RNA的探针载体pSBPL-1。该载体在T7RNA聚合酶作用了,通过DIG体外标记转录制备的RNA探针,具有灵敏度高,背景清楚,省时等优点,为苏云金芽胞杆菌分子生物学研究,及对鳞翅目有特异毒性高效菌株的筛选提供了一种方便而有效的方法。 相似文献
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本实验所用的马传染性贫血病毒(EIAV)L株(EIAV-L)是我国研制成功的EIAV弱毒疫苗的原始强毒株。以EIAV-L感染马外周血液白细胞中DNA为模板,利用PCR技术,分4个片段扩增EIAV-L前病毒DNA,并分别克隆到载体质粒pBluescript SK中,得到 4个重组质粒p2.8、p2.4、p3.1和 p1.2,经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接,得到 EIAV-L前病毒基因组全序列。EIAV-L前病毒基因组全长 8235bp,其中 G+C含量为 38%。通过使用计算机软件DNASIS分析,EIAV-L与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为98.4%和96.9%。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系,另外 EIAV-L与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性,这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为316bp的LTR,其中U3为197bp,R为80BP,U5为39bp。前病毒基因组有 3个较大的开放阅读框架(ORF),分别编码 gag、pol和 env基因。gag基因位于 713~1912位碱基之间,全长1200bp;pol基因位于 1708~5109位碱基之间,全长 相似文献
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农杆菌介导水稻幼胚转化获转基因植株 总被引:10,自引:0,他引:10
本研究以根癌农杆菌LBA4404(pTOK233)为供试菌株,以水稻幼胚为供试材料,对影响农杆菌介导基因的转化效率的因素进行了研究,确立了农杆菌介导的水稻高效转化体系。采用所确立的转化体系转化了Radon、中国91、02428 3个水稻品种(系)幼胚,结果表明,gus A基因的瞬时表达率均在70%左右,最高为76%;gus A基因稳定表达率均在20%以上,平均为23%。转基因植株的GUS活性检测及Southern杂交分析表明,外源基因事于水稻基因组中,进行了有效地表达,且能稳定地遗传给后代,外源基因在后代遗传符合孟德尔遗传规律。 相似文献
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动物源不动杆菌的药敏试验 总被引:1,自引:0,他引:1
动物源不动杆菌的药敏试验收稿日期:19970604汤雅殊陆承平(南京农业大学动物医学院,南京210095)ANTIMICROBIALSUSCEPTIBILITYTESTINGOFACINETOBACTERSTRAINSISOLATEDFROMAN... 相似文献
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马铃薯Y病毒复制酶基因植物表达载体构建及转基因烟草的培育 总被引:5,自引:0,他引:5
用BamHI/KpnI从重组克隆PZD-1中切下马铃薯Y病毒脉坏死株系复制酶基因,将其插入质粒PROD2相庆切点中构成植物表达载体。用重组pROD2转化农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404菌株,通过重组农杆菌侵染叶盘将复制酶基因转入烟草品种NC89中获得转基因植株。分子生物学检测结果表明,复制酶基因在转基因烟草中获得品种NC89中获得转基因植株。分子生物学检测 相似文献
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通过根癌农杆菌介导法获得新疆甜瓜抗病优质新品系 总被引:2,自引:0,他引:2
用新疆甜瓜无菌苗子叶块,通过根癌农杆菌介导法,将黄瓜花叶病毒外壳蛋白cDNA基因导入“新红心脆”等6个品种(系),经卡那霉素筛选,获得大量Km抗性植株,其中部分Km抗性植株经Luis法检测,表达了胭脂碱合成酶活性。进一步经SDS-PAGE,DOT-Elisa,PCR特异扩增。Western-Blot等方法检测,结果证明了Km抗性植株基因组中整合了CMV-CP基因,长度为1kb,并能有效表达,表达产 相似文献
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曼海母宫殿以当年生枝条上饱满未萌发的侧芽为外植体.进行组织培养、在附加6-BA1.0mg/L的MS培养基上.芽诱导效果最好,在附加6-BA1.5+NAA0.05+ZT0.1mg/L或KT1.0+NAA0.05+ZT0.1mg/L的MS培养基上.芽的分化效果最好。在附加KT0.3+NAA0.05+ZT0.1mg/L或6-BA0.3+NAA0.05+ZT0.1mg/L的MS培养基上,壮苗效果最好。在附加IBA0.1mg/L或IBA0.1+NAA0.02mg/L的1/2MS培养基上生根效果最好。试管苗高2.5~4.0cm,且具有3~5条短根时,开瓶锻炼3~5d。移栽入土效果好、种植在保温保湿环境中.试管苗成活率高。 相似文献