组织型纤溶酶原激活剂cDNA真核表达质粒的构建与鉴定

将组织型纤溶酶原激活剂基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,构建了重组表达质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。经酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,ｔ－ＰＡ基因的插向正确,可用于哺乳动物细胞和个体表达系统中表达。     

pE3—mMT—I—cDNA重组质粒的分离纯化及对根癌农杆菌LBA4404的转化

本文通过对ｐＥ３－ｍＭＴ－Ｉ－ｃＤＮＡ克隆质粒的分离纯化及鉴定，确定了ｍＭＴ－Ｉ基因确实已整合进入ＰＥ３植物双元表达载体上。并通过三亲株杂交法将ｐＥ３－ｍＭＴ－Ｉ基因转化根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４。原位杂交结果表明，转化后的根癌农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４中带有ｍＭＴ－Ｉ基因。     

马传染性贫血病病毒L株前病毒全基因组核苷酸序列分析

 本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中，得到 ４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和 ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到 ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长 ８２３５ｂｐ，其中 Ｇ＋Ｃ含量为 ３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外 ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有 ３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码 ｇａｇ、ｐｏｌ和 ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于 ７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于 １７０８～５１０９位碱基之间，全长     

IBDV超强毒HZ株VP2基因的克隆和真核表达质粒的构建

利用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），扩增克隆传染性法低囊病病毒超强毒（ｖｖＩＢＤＶ）ＨＺ株ＶＰ２基因，并ＶＰ２基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析，同时将ＶＰ２基因与真核表达载体ｐｃＮＤＡ３相连接。结果克隆到ＶＰ２基因全序列长１３５６ｂｐ，分析表明ＨＺ株与欧洲超强毒株ＵＫ６６１高度相似，同时将ＶＰ２基因正向插入ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游，得到了ＶＰ２基因的真核表达质粒。为ＩＢＤＶ分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。     

含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建

以含有鸡传染性支气管炎病毒Ｈｏｌｔｅ株Ｓ１基因的重组质粒ｐＵＣ１８－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ和ｐＵＣ１８－Ｓ‘１．Ｈｏｌｔｅ为材料,分别构建了可表达ＩＢＶ Ｓ１基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（含ＩＢＶ先导序列）,ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３／４－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（ＩＢＶ先导序列为融合短肽）,ｐＡｃＧＨＬ－Ｃ－Ｓ１,Ｈｏｌｔｅ。     

一种豆腐凝固剂酸汤中乳酸菌的分离及其生物学特性的研究

两份自然发酵酸化的豆腐凝固剂,酸汤样品中,分离到过氧化氢酶阴性、硝酸盐还原试验阴性、不液化明胶的革兰氏阳性杆菌４株和球菌１株。并通过生化试验和糖类发酵等生物学特性的研究,确定豆腐凝固剂酸汤中的主要产酸菌为乳酸菌,并将４株杆菌分别鉴定为：Ｌ．ｃｕｒｖａｔｕｓ（ＢＴ１－２）Ｌ．ｈｉｌｇａｒｄｉｉ（ＡＴ１－３）Ｌ．ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ（ＢＴ２－３）Ｌ．ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ（ＢＴ２－５）;１株球菌为Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ．ｄｅｘｔｒａｎｉｃｕｍ（ＢＴ２－１）。     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２－ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

谷胱甘肽还原酶基因的表达载体构建及对马铃薯的转化

 利用 ｐＧＲ２０２和 ｐＢｉｎ１９两种质粒经过 ｐＢＩ ２２２的改建，含有 ＣａＭＶ３５Ｓ启动子和 Ｎｏｓ终止子的 ＣＮ区ＤＮＡ片段与 ｐＢｉｎ１９的 Ｂｉｎ区 ＤＮＡ片段的不对称连接和目的基因 ＧＲ的 ｃＤＮＡ重组于真核表达双元载体三步亚克隆，筛选出一正向插入的谷胱甘肽还原酶基因的真核表达双元载体质粒ｐＢｉｎ－ＣＮ－ＧＲ。再利用此质粒转化的农杆菌ＬＢＡ４４０４进行马铃薯的遗传转化．并分化出卡那霉素抗性苗。过氧化物同工酶和酯酶同工酶谱带显示转化材料与对照之间存在显著的差异．表明转化材料的基因表达发生了变化。对转化影响因素的研究发现培养基的组成成分、选择压（Ｋｍ）添加浓度及加入时机是影响转化率的重要因素。     

拟南芥菜LEAFY基因片段的分离及果树基因组中存在LEAFY同源基因…

利用ＰＣＲ技术从拟南芥菜基因组ＤＮＡ中扩增出一条长４１４ｂｐ的ＤＮＡ片段。该片段被克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（－）手ＥｃｏＲＶ位点上。序列分析结果证实扩增和克隆的ＤＮＡ片段是分生组织特征基因ＬＥＡＦＹ３＇端的部分片，不含内含子序列。结果表明，供试果树，基因组中均存在单拷贝的ＬＥＡＦＹ同源基因。     

FPV282E4株BamHI7．3kb片段的亚克隆

选用ＦＰＶ２８２Ｅ４株ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ含非必需区片段，经ＸｂａⅠ酶切，将Ａ、Ｂ、Ｃ３个片段亚克隆于ＫＳ（—）质粒中，同时使Ｄ片段自身环化，获得ＫＳＦａ、ＫＳＦｂ、ＫＳＦｃ、ｐＵＣＦｄ４个重组克隆，经酶切鉴定证明亚克隆正确。为以ＦＰＶ基团组非必需区的ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ片段中ＢｇｌⅡ片段所在区域构建重组载体质粒和体内重组表达外源基因的研究以及非必需区的核苷酸序列分析奠定基础