SP-SephadexC-50柱层析法纯化孕马血清促性腺激素(PMSG)

应用HPO_3沉淀-硫酸铵浓缩-乙醇分部沉淀法,从孕马血清中粗提PMRG(平均比活1026IU/mg.平均回收率75%),用SP-Scphadex C-50一次柱层析纯化PMSG粗品,获得平均比活11847IU/mg的高活性PMSG精品,对粗品的平均回收率为88.5%.     

新型鸭瘟病毒的提纯方法研究

将分离的新型鸭瘟病毒(暂定名)毒种接种12日龄番鸭胚传代，收集病毒尿囊液，用不同方法将病毒粗提、纯化。通过病毒蛋白含量测定和病毒纯度鉴定，证实以50%饱和度(NH4)2SO4法或10％聚乙二醇6000沉淀法粗提，再经葡聚糖G-200层析纯化，可获得纯度较高的病毒。     

人血清中分离纯化鸡IgG、IgM的实用方法

本试验用绵羊红细胞免疫鸡,免疫后5天采血,制备富集IgM血清。应用硫酸铵粗提、Sepharose-4B分子筛层析方法,从富集IgM的鸡血清一次性分离提取高纯度的IgM及纯度较高的IgG,DEAE－52纤维素离子交换层析进一步纯化,获得电泳纯的IgG。经鉴定该方法制备的IgG,IgM完全可以满足免疫学实验要求,从一份血清样品中同时纯化IgG、IgM两种免疫球蛋白,既省时又节省原料。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子的变化

纯化的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，经消毒，水洗处理后放入玛瑙乳钵内研磨。研磨后的卵下混入适量消化液，在４０℃恒温水浴消化３０分钟即成为球虫子孢子粗提液。此粗提液经ＤＥ５２纤维素层析柱过滤，用甘氨酸洗脱液冲洗，收集滤液经离心沉淀即得纯化的柔嫩艾美耳球虫子孢子。     

猪血清免疫球蛋白IgG的分离纯化及抗大肠杆菌作用

试验旨在从猪血清中分离纯化得到纯度较高的免疫球蛋白Ig G。试验采用硫酸铵分步沉淀法从猪血清中粗提猪血清免疫球蛋白,经DEAE52凝胶柱进行纯化,将纯化得到的免疫球蛋白进行SDS-PAGE电泳检测,并通过紫外分光光度计法测定其含量。试验结果显示,粗提可以得到免疫球蛋白Ig G,纯化后的lg G经SDS-PAGE电泳检测,检测出两条带,分别为Ig G的重链和轻链,分子量分别为56.72 k D和26.58 k D,通过紫外分光光度计法测得的Ig G浓度为2.577 mg/ml。结果提示,从猪血清中能分离纯化到免疫球蛋白Ig G,为实际工艺化生产提供理论依据。     

大肠杆菌987P抗原的提纯及部分特性鉴定

用高速匀浆法使987P纤毛从987P菌体上脱开,等电点沉淀粗提无细胞液中的987P抗原,用Sepharose CL-4B凝胶柱进一步纯化该抗原。提纯抗原的分子量为19500;电子显微镜负染观察可见匀质、僵直、长短不一的毛发状结构,直径约7nm,与抗原来源菌株OK抗血清进行的免疫电泳,只出现一条沉淀线;用纯化抗原制备的兔、豚鼠抗血清,能凝集不同血清型的987P~+参考和分离菌株。提纯的987P抗原达到了免疫纯和电泳纯,并用此抗原制备了高特异、高效价的抗血清。     

蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取和纯化

通过对蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取,分别进行了两种粗提方法(水稀释法、Pectin法)和纯化方法(硫酸铵法、PEG6000法)的比较。结果显示,当蛋黄液经pH5.0蒸馏水10倍稀释粗提后,上清液中脂肪和IgY残余率分别为32.69%和68.34%,效果较好。采用12%(w/v)PEG6000、33%(v/v)饱和硫酸铵纯化IgY,其免疫活性残余率分别为63.5%和64.1%。SDS-PAGE显示,水稀释法和Pectin法提取的上清液中杂蛋白减少,硫酸铵和PEG6000纯化后的上清液中几乎无其他杂带。研究表明,水稀释法和Pectin法提取IgY具有简便、高效和无污染的特点,硫酸铵和PEG6000适合纯化IgY。     

桑叶黄酮的提取与初步纯化

本试验对桑叶总黄酮的提取条件进行了研究,并利用AB-8大孔树脂对粗提黄酮进行初步纯化。结果表明:最佳提取条件为时间3h、温度80℃、乙醇浓度60%、料液比1∶30(g/mL),此时,大孔树脂AB-8可以有效富集与纯化桑叶黄酮。     

兔病毒性出血症病毒的提纯及部分特性鉴定

应用建立的SDS—蔗糖密度梯度超速离心法,纯化了从兔肝组织中粗提的兔病毒性出血症病毒。通过血凝、电镜观察、SDS-PAGE、琼脂双向免疫扩散、免疫印迹等试验,证明SDS—蔗糖梯度柱分离的病毒纯度高,具有4种结构多肽。     

大孔吸附树脂分离纯化贯叶连翘中的金丝桃素

以贯叶连翘粗提浸膏为材料,考察六种大孔吸附树脂分离纯化金丝桃素的性能。采用静态、动态吸附方法筛选树脂,以中压分离方法确定分离纯化的条件。结果表明:HZ-801树脂以其高吸附率、高洗脱率成为优选的分离填料,其最佳分离纯化条件为:进样液质量浓度为0.1125 g/m L,进样速度为5.0 m L/min、洗脱速度为20 m L/min,0~95%乙醇溶液梯度洗脱,金丝桃素的纯度为79.11%。HZ-801可以较好分离纯化金丝桃素,纯化工艺具有较大实践性及参考价值。     

中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶的纯化及部分性质研究

以中华蜜蜂的工蜂成体为提酶材料,经正丁醇提取、硫酸铵分级沉淀,0.1 5%NaCl溶液透析,得粗酶液.用Sephadex G-150葡聚糖层析柱纯化粗酶,获得提纯的碱性磷酸酶,提纯倍数为16.79,比活力达到135.85 U/mg.以对硝基苯磷酸二钠(PNPP)为底物,测定提纯后的碱性磷酸酶的理化性质.结果表明:该酶的最适温度为45℃,最适pH值为8.6,米氏常数(Km值)为0.97×10-3mol/L.甲醛、甲醇、乙醇和乙二醇对碱性磷酸酶均有抑制作用.     

桑枝多糖的提取与纯化的试验研究

通过正交设计,用一般提取法对桑枝皮中多糖提取条件进行优化,并分别结合微波法提取、超声波提取法和酶解提取法,比较提取效果。将粗提液进行纯化,并比较乙醇沉淀法和大孔吸附树脂的纯化效果。结果：一般提取法中最适的提取条件组合为提取时间100min、溶液—材料比20倍、pH5,同时结合生物酶提取法可将提取率提高18．57％;用AB-8型大孔吸附树脂纯化,可获得纯度84．57％的多糖。     

3种方法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清的比较

本试验分别用蛋白G亲和层析法、饱和硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清,发现蛋白G亲和层析法纯化得到的抗体纯度最高,回收率较低,抗体活性未变,操作简便,但成本较高,适合实验室研究及小量样品的纯化;饱和硫酸铵法纯化得到的抗体纯度较蛋白G亲和层析法低一些,抗体活性不变,可通过多次盐析来提高抗体纯度,多作为蛋白G亲和层析法纯化前的初步纯化;辛酸-硫酸铵法纯化得到的抗体纯度不及前两种方法,回收率较高,抗体活性亦无改变,纯化时对pH的精确性和辛酸的浓度要求较高,多用于样品的粗提和单抗的纯化。     

野桑蚕多酚氧化酶分离纯化的试验初报

多酚氧化酶是昆虫初生新表皮硬化过程中的关键性酶。为有利于研究野桑蚕(Bombyxmandarina)多酚氧化酶的功能与性质,探讨了野桑蚕多酚氧化酶的分离纯化方法。以野桑蚕5龄幼虫为材料,用磷酸盐缓冲液浸提多酚氧化酶粗提液,再经40%饱和度硫酸铵沉淀、透析及Sephadex G-100凝胶过滤进一步分离纯化,得到了部分纯化的多酚氧化酶,其酶纯化倍数为57.14倍±0.19倍,酶得率为10.17%±0.18%,酶比活力为(10 166.67±66.16)U/mg。采用该试验方法可有效分离纯化野桑蚕多酚氧化酶。     

发酵黑蒜粗多糖成分提取及小鼠降血糖研究

黑蒜具有抗氧化、降血糖、降血脂、增强免疫力等功效,逐步进入人们的视野。粗多糖是黑蒜中的有效活性物质之一,试验以黑蒜为原料,经过热水浸提、旋转蒸发浓缩、离心、Sevage法除蛋白、沉淀洗涤、干燥等分离纯化过程,获得黑蒜粗多糖,其黑蒜粗多糖的提取率为8.14%;用苯酚-硫酸法测其粗多糖的纯度为43.0%;通过对四氧嘧啶诱发的高血糖小鼠进行黑蒜粗多糖溶液灌胃,14 d后通过测定小鼠血糖值验证黑蒜粗多糖的降血糖效果。结果表明:黑蒜粗多糖对四氧嘧啶诱发的高血糖有降低作用,且高剂量黑蒜粗多糖的降血糖作用效果显著,对正常小鼠的血糖值无影响。     

间接ELISA检测新型鸭瘟病毒抗体

以50%饱和度的硫酸铵粗提病毒,再经Sephadex G-200过柱层析纯化了新型鸭瘟病毒,以此作为包被抗原,并用自制油苗免疫雏鸭,获得了高效价的血清抗体,又经过各种条件优化,建立了检测血清抗体的间接ELISA方法.经对不同发病日龄和免疫油苗后雏鸭的血清检测,证明该检测方法有很高的敏感性、特异性和重复性,可作为快速诊断该病的一种可靠方法.     

鸡SIgA的提取鉴定及其抗体制备

实验采用饱和硫酸铵法从健康肉鸡胆囊收集的胆汁中粗提二聚体SIgA,继而透析粗提产物除盐,然后进行纤维素DEAE-52离子交换层析,使用紫外分光光度计测定收集液的蛋白浓度,对层析产物浓缩使其浓度≥2.0 mg/m l,最后使用SDS-PAGE进行鉴定,从电泳所得图像中可以看到清晰的两个条带,一个条带分子量在67~70 ku之间为重链,另一个条带在26~28 ku之间为轻链。进一步将纯化的鸡SIgA抗体免疫健康兔,制备得到兔抗鸡SIgA抗体。     

猪生殖—呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋？…

本研究主要对猪生殖－呼吸道综合征国内分离毒株进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇（ＰＥＧ－６０００）沉淀和差速离心法粗提了经Ｍａｒｃ－１４５细胞系增殖的猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了ＰＲＲＳＶ,经免疫电镜观察化病毒,发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为４２－７８ｎｍ的病毒粒子周围。经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ测定纯化病毒的滴度可达１：１６００以上,并利     

1株黄曲霉颉颃菌的鉴定及其抑菌活性成分分析

【目的】 筛选黄曲霉颉颃菌,探究其最佳培养条件及有效抗菌成分,为实际生产中应用生物防治方法抑制黄曲霉污染提供新的理论依据。【方法】 通过平板对峙法及分子生物学鉴定方法对待测菌株进行筛选鉴定。以抑菌率作为衡量标准,判断所得黄曲霉颉颃菌的最佳培养温度、培养时间、接种量、转速、pH及装液量。通过硫酸铵沉淀法从颉颃菌无菌发酵上清液中提取蛋白,观测粗提物对黄曲霉菌丝生长的影响。通过离子交换色谱和凝胶过滤色谱进一步纯化粗提蛋白,并进行质谱测序及序列对比分析,筛选鉴定颉颃菌产生的有效抑菌成分。【结果】 筛选到1株解淀粉芽孢杆菌B10(菌种保藏号CCTCCNO:M2018353)。最佳培养条件为温度40 ℃,培养时间36 h,接种量3%,转速120 r/min,pH 6.0,装液量30 mL,最大抑菌率可达46.56%。其粗提蛋白能有效抑制黄曲霉生长,破坏菌丝正常形态,并从中筛选出几丁质结合蛋白、壳聚糖酶、葡聚糖酶等8种可能的有效抑菌成分。【结论】 本试验分离鉴定出1株抑制黄曲霉正常生长发育的解淀粉芽孢杆菌B10,其产生的多种蛋白成分对黄曲霉有显著抑菌活性。     

牛结核杆菌DNA疫苗的纯化工艺研究及质量鉴定

为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。