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对猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构基因 (ORF1)和非编码区分别进行了克隆和测序 ,并对其基因特征作了分析。结果表明 ,CH_1a株ORF1全长 11882nt,其中ORF1a长 75 12nt、ORF1b长 4374nt。它们与VR2 332株的核苷酸同源性分别为 89%、92 % ;与LV株的核苷酸同源性分别为 5 4%、6 3.3%。ORF1编码两个聚合蛋白 ,其中ORF1a编码的聚合蛋白经裂解后产生 6个成熟的非结构蛋白 (Nsp1α、Nsp1β、Nsp2_5 ) ,以Nsp2的变异性最为显著 ,它与LV株的氨基酸同源性为 41%。ORF1b编码的聚合蛋白经裂解后 ,产生 4个成熟的非结构蛋白 (RdRpCP2_4) ,其中RdRp为病毒的复制酶 ,CP4表现出较大的变异性 ,与LV株的氨基酸同源性为 48%。在ORF1a_ORF1b的衔接区有保守的庚核苷酸滑动序列和拟节结构 ,它们是核糖体移码翻译所必需的结构。在基因组末端存在非编码区 ,其中 5’NCR长 190nt,比LV株 5’NCR短 31nt,其核苷酸同源性为 6 1%。 3’NCR长 15 1nt,比LV株 3’NCR长 37nt,保守性稍高 ,其与VR2 332株和LV株的核苷酸同源性分别为 95 .4%和 78.2 %。在 3’NCR末端有一个poly(A)尾巴 ,长 2 0nt。在Poly(A)尾上游有保守的八核苷酸序列 ,是复制酶识别并结合的区域。本研究进一步证实CH_1a株在基因型上属于北美洲型 相似文献
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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立 总被引:19,自引:0,他引:19
本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。经三氯-三氟乙烷处理后,作为ELISA试验的标准抗原,并建立了检测PRRSV抗体ELISA方法。该方法与IFA、IPMA和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测PRRSV抗体的方法。间接ELISA方法在敏感性上要优于IFA和IPMA》 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征重组核衣壳蛋白(N)-ELISA诊断方法的建立与应用 总被引:2,自引:0,他引:2
将猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株CH-la的核衣壳蛋白基因定向克隆到pBlueBacHisB转移载体PH启动子下游,与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒线性化DNA共转染Sf9细胞。获得能隐定表达核衣壳蛋白(N 蛋白)的重组杆状病毒。利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白作为抗原,包被聚苯乙烯微量反应板,建立了猪繁殖与呼吸综合征重组N蛋白-ELISA诊断方法。试验证明,该方法对其他8种猪疫病阳性血清均无交叉反应,对标准阳性样品的检出率为100%,具有敏感性高、特异性强的特点。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-la株非结构基因的分子克隆及其基因特征的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
对猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构基因(ORF1)和非编码区分别进行了克隆和测序,并对其基因特征作了分析。结果表明,CH-1a株ORF1全长11882nt,其中ORF1a长7512nt、ORF1b长4374nt。它们与VR2332株的核苷酸同源性分别为89%、92%;与LV株的核苷酸同源性分别为54%、63.3%。ORF1编码两个聚合蛋白,其中ORF1a编码的聚合蛋白经裂解后产生6个成熟的非结构蛋白(Nsp1α、Nsp1β、Nsp2-5),以Nsp2的变异性最为显著,它与LV株的氨基酸同源性为41%。ORF1b编码的聚合蛋白经裂解后,产生4个成熟的非结构蛋白(RdRp,CP2-4),其中RdRp为病毒的复制酶,CP4表现出较大的变异性,与LV株的氨基酸同源性为48%。在ORF1a-ORF1b的衔接区有保守的庚核苷酸滑动序列和拟节结构,它们是核糖体移码翻译所必需的结构。在基因组末端存在非编码区,其中5'NCR长190nt,比LV株5'NCR短31nt,其核苷酸同源性为61%。3'NCR长151nt,比LV株3'NCR长37nt,保守性稍高,其与VR2332株和LV株的核苷酸同源性分别为95.4%和78.2%。在3'NCR末端有一个poly(A)尾巴,长20nt。在Poly(A)尾上游有保守的八核苷酸序列,是复制酶识别并结合的区域。本研究进一步证实CH-1a株在基因型上属于北美洲型。 相似文献
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将PRRSVCH1a株N基因用EcoRI和PstI双酶切从重组质粒pUC18ORF7切下后,插入到原核表达载体pBV220的PR、PL启动子下游,得到重组表达质粒pBV220ORF7。转化了pBV220ORF7的大肠杆菌JM83经诱导培养后,用SDSPAGE和Westernblot检测表达产物。结果表明PRRSVCH1a株的N基因在原核载体上得到高效表达,表达产物占菌体总蛋白的153%。表达蛋白可望成为有价值的PRRS诊断抗原。 相似文献