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为调查部分省份牛结核病(bTB)的流行情况,我们在山东等14个省份34个历史上疫情较重的县共129个场户采集牛全血2 201份,采用CO2培养箱或蜡罐方法进行bTBγ-干扰素检测,结果显示样品的个体阳性率为6.4%,群阳性率为42.6%。饲养模式对bTB感染影响的统计显示较大规模场的个体阳性率(6.9%)和群阳性率(60%)均高于散养户(分别为5.7%和35.6%)。而牦牛样品的检测结果均为阴性。5个牛群的禽型PPD阳性统计结果显示牛型PPD阳性率越高,则禽型PPD阳性牛在牛型PPD阳性牛中的所占比率越低。在所有阳性牛群中,阳性率≥10%的牛群所占比例高达81.8%(45/55),bTB感染呈现出一个"群发性"的特征。 相似文献
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用提纯的OPPV细胞抗原免疫BALB/c小鼠脾脏与SP2/0小鼠骨髓细胞融合,融合率为70%,以ELISA双抗体夹心法进行检测,阳性率为20%,经过有限稀释法克隆出1A6、2B8、1G3、2G44株分泌抗OPPV抗原的单克隆体杂交瘤细胞株.选择抗体分泌滴度高的1A6细胞进行了较详细的研究,结果表明,其核内染色体数为96~110条,抗体属性为IgG1,轻链为K链,IFA试验表明产生的McAb对OPPV有特异性,细胞传30代并在液氮中保存半年后复苏仍能稳定地分泌抗OPPV McAb,细胞分泌抗体的ELISA滴度腹水为6.4×104,上清为640,McAb经硫基乙醇还原后在SDS-PAG上呈现2条区带,一条为重链部分,MW50000,另一条为轻链部分,MW为25000. 相似文献
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牛结核杆菌DNA疫苗的纯化工艺研究及质量鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。 相似文献
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在仔猪腹泻中,约有40%由肠毒素原性大肠杆菌引起。肠毒素原性大肠杆菌产生二种致病因子,即肠毒素(LT、ST)和纤毛粘着素(纤毛抗原)。与仔猪腹泻有关的大肠杆菌纤毛粘着素主要有 K_(88)、K_(99)和987P,F_(41)较少见,且往往与 K_(99)在同一菌株上表达。由于仔猪腹腹泻病因的复杂性,给该病的防治带来了一定的困难。我们在先 相似文献
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利用TB_PCR试剂盒对牛结核病的检测 总被引:5,自引:0,他引:5
应用聚合酶链式反应(PCR)技术制备的TB-PCR试剂盒对来自新疆6个牛场的238份血样、奶样、口腔分泌物标本中结核分枝杆菌进行检测,结果显示:TB-PCR试剂盒对40份奶样样本进行检测,7头为阳性,阳性检出率17.5%。TB-PCR试剂盒对178份血样标本的检测,23头牛为阳性,阳性检出率为12.92%。TB-PCR试剂盒对20份口腔分泌物标本中结核分歧杆菌检测结果均为阴性。本试验中共计检测6个牛场的238份不同标本的PCR阳性牛共计27头,阳性检出率为3.02%。将PCR和传统的PPD检测方法的结果比较显示PPD检出阳性率高于PCR,PPD检出阳性牛39头,检出阳性率6.7%。本试验对口腔分泌物标本的检测结果不理想。总之,TB-PCR试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点。为今后牛结核病的检测 相似文献
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采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究 总被引:3,自引:1,他引:2
5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后,用来自IS1081中的248bp荧光探针杂后后进行限制性酶切片长度多态性(RFLP)分型,5株牛分离株中4株具有相同杂交带型,剩余的1株在3.6kb处多了1条带。将248bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现:5株牛结核分枝杆菌分离株中有2株具有相同的PCR指印带型,剩余3株牛结核分枝相杆菌分离株则PCR指印带各不相同,上述结果显示出,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出,PCR指印带型中带数较少,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。 相似文献
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构建了含分枝杆菌抗原ESAT_6( 6kDa)分泌蛋白 (结构基因 )的真核表达载体pJW43 0 3 ,进行了酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,收集表达细胞或浓缩上清液 ,进行SDS_PAGE电泳 ,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹检测 ,证明上述重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白。重组表达质粒肌注免疫小鼠 ,首免后 2 1d,未检测到特异性抗体 ,二免和三免 2 1d后ESAT_6的特异性抗体平均效价分别为 1∶40 0和 1∶80 0。三免后 2 1dESAT_6的特异性细胞因子γ_干扰素的浓度为 1 2 .8± 0 .4ng/mL,而阴性对照空载体DNA组三免后只诱导产生 <0 .1ng/mL的γ_干扰素。三免后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了 90 %以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。 相似文献