高致病性猪蓝耳病的实验室诊断

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因RT-PCR检测方法和猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株试剂盒检测方法,对六盘水市钟山区某猪场发生的一起疑似高致病性猪蓝耳病进行实验室诊断,确诊为由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株引起的高致病性猪蓝耳病。     

猪流行性腹泻病毒分子特征、基因分型及流行现状

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是引起仔猪严重肠道疾病的病原之一,新生仔猪感染后常引起致死性水样腹泻、呕吐、出血性肠炎,死亡率高达100%,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。2010年,高致病性PEDV变异毒株的出现与流行造成猪流行性腹泻(PED)在全球的再次暴发,以经典毒株为抗原的流行性腹泻疫苗无法有效控制高致病性变异毒株的流行。文章综述了PEDV基因组结构与蛋白功能、基因分型与流行现状,以期为PEDV新型疫苗的研究提供参考。     

猪流行性腹泻新毒株的分离鉴定和致病性研究

为探明2011年我国猪群仔猪腹泻的病因,采用巢式RT-PCR方法对河南和辽宁省2个规模猪场采集43份出现腹泻的粪便进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和轮状病毒（PRoV）的检测,结果表明：43份腹泻样品均为PEDV,没有检测出TGEV和PRoV。对扩增的PEDV进行测序和分析显示,这些PEDV流行毒株均属于基因G2.3亚型,彼此之间的同源性高达99.2%～100%,与2011年韩国和2008年泰国流行的PEDV毒株同属于一个进化分支。将其中3份病料在Vero细胞传代后接种2日龄仔猪,结果发现接种后13～57h内仔猪全部死亡,接种仔猪呈现典型的腹泻症状和病理变化特征,提示了这些PEDV流行毒株具有较强的致病性。     

近期暴发仔猪流行性腹泻的探讨

2011年底,全国很多地区暴发猪流行性腹泻疫情,给我国的养猪业造成了巨大的损失.福建省福州、厦门、南平等地也发生多起仔猪流行性腹泻,经济损失巨大.采用RT-PCR检测证明是猪群感染了流行性腹泻病毒(PEDV),对扩增片段进行测序,结果表明检测到的流行性腹泻病毒的S基因发生了变异,是由流行性腹泻病毒变异株引起的.S基因序列分析发现该毒株与韩国毒株同源性高.猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典毒株与变异毒株共存.许多专家采用多种防控措施,获得很多经验,但都不理想.对于流行性腹泻病毒的防控,借鉴外国的经验,采用青岛易邦的流行性腹泻病毒变异株冻干活苗口服防疫效果明显,初生乳猪的发病率降低至5%,死亡率降低至2%.     

云南省某腹泻仔猪群猪流行性腹泻病毒核酸检测及其N基因序列分析

猪流行性腹泻是猪场新生仔猪腹泻的主要病原之一。为确定云南省曲靖市某猪场新生仔猪出现呕吐、腹泻和高死亡率的病因,采集病死仔猪肠道、肠系膜淋巴结、脾脏等组织病料,处理后提取病原核酸,通过RT-PCR进行导致仔猪腹泻的猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病原核酸检测。结果显示,仅PEDV核酸阳性,其他病原均为阴性。对检出的PEDV阳性样品N基因进行序列分析发现：阳性样品N基因与河北的T10-HB2018毒株核苷酸同源性最高,为99.7%;与疫苗株AJ1102和LW/L毒株核苷酸同源性为97.4%~97.5%,在同一个分支上,均属于基因II群;与经典毒株CV777株核苷酸同源性略低,为95.7%。结果表明,引起该仔猪群腹泻的主要病因为PEDV感染,流行毒株未发生变异,当前疫苗对其防控有效。依据分析结果,该场采取PEDV疫苗紧急免疫,使疫情得到有效控制。本研究对于指导该地区猪群腹泻病防控具有参考意义。     

猪蓝耳病弱毒疫苗免疫方法的效果对比试验

近来,由于蓝耳病毒株的变异,出现了高致病性猪蓝耳病。高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征（俗称蓝耳病）病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。仔猪发病率可达100％、死亡率可达50％以上,母猪流产率可达30％以上,育肥猪也可发病死亡是高致病性猪蓝耳病的特征。高致病性猪蓝耳病近2年来重创了我国的养猪业,     

高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析

将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明：该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为83.0%,氨基酸同源性为72.7%;与高致病性变异毒株NX和SD核苷酸同源性为95.5%,氨基酸同源性为90.9%,可见该毒来源于2006-2007年流行毒株,说明高致病性猪蓝耳病变异病毒已经在甘肃省存在。该毒株的成功分离为高致病性猪蓝耳病流行病学调查分析提供数据,也为预防控制该病积累了资料。Nsp2的特性分析为揭示高致病性猪蓝耳病PRRSV在甘肃省的流行特点提供参考。     

猪流行性腹泻病毒变异株XP2018的分离及S基因序列分析

本研究旨在从临床仔猪腹泻样品中分离猪流行性腹泻病毒(PEDV),并对其S基因进行测序分析.对腹泻仔猪小肠样品进行RT-PCR检测、病毒的分离培养、RT-PCR和间接免疫荧光鉴定、S基因测序及遗传演化分析.结果显示:仔猪腹泻由流行性腹泻病毒引起;在Vero细胞上成功分离流行性腹泻病毒,命名为XP2018,该毒株细胞病变明...     

高致病性猪蓝耳病防控知识

一、什么是高致病性猪蓝耳病？ 高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株引起的一种急性高致死性传染病．病毒致病力强．传播速度快．猪群发病率和死亡率高。母猪感染后发生流产、死胎、弱胎等，流产率可达30％以上。仔猪感染后表现为呼吸困难、败血症等症状．发病率可达100％，死亡率可达50％以上。     

一例猪流行性腹泻病毒变异株引起仔猪腹泻的诊断

2020年11月初,福建南平某猪场仔猪发病,临床症状以腹泻、呕吐等为主。为确定病因,采集发病仔猪小肠组织,提取核酸分别检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒和猪德塔冠状病毒等,结果仅检出猪流行性腹泻病毒,且通过对该毒株的S1基因进行扩增、测序与分析,发现该毒株与国内流行变异株对于序列同源性超过97.4%,但与疫苗株同源性相对较低,仅为92.2%,因此可判定该猪场流行的PEDV毒株为变异株。     

Diagnosis of a Large Number of Death Cases of Newborn Piglets and Isolation and Identification of HP-PRRSV

The assay was aimed to provide theoretical references for the prevention and control of newborn piglet epidemic diarrhea which was characteristic of high morbidity and mortality.An outbreak of newborn piglet epidemic featuring diarrhea,emesis and lassitude was reported in January 2013 in a large-scale pig farm in Yulin,Guangxi province.The morbidity and mortality in the epidemic were 80% and 80% to 100%,respectively.To identify the causes,ten samples of small intestines,spleens,lungs and lymph glands were collected for the bacterial isolation,PCR,virus isolation,determination of TCID₅₀,gene sequencing and analysis.The detection results showed that PEDV and PRRSV were positive while those of CSFV,PRV,TGEV and PRoV were negative.No pathogenic bacteria were isolated.Clone and sequence results of ORF7 and Nsp2 genes of the isolate indicated that the isolate was an American PRRSV,with ORF7 of 372 bp (123 amino acids) and Nsp2 of 2 850 bp (950 amino acids).There was a discontinuous deletion of 30 amino acids of Nsp2 gene at sites 481 and 532 to 560,which was consistent with Nsp2 of highly pathogenic PRRSV JXA1,so the isolate could be determined as a HP-PRRSV strain.48 h after Marc-145 cells being inoculated by pathological sample,the typical CPE of PRRSV appeared,and TCID₅₀ of PRRSV isolate was 10^-5.75/0.1 mL.The newborn piglet epidemic diarrhea was caused by PEDV infection and HP-PRRSV subsequent infection.     

新生仔猪大批死亡疫情诊断及HP-PRRSV的分离鉴定

本试验通过对高发病率、高死亡率的新生仔猪腹泻病例进行诊断与控制,以期为该病的防控提供参考和借鉴.2013年1月初广西玉林某规模猪场发生以2~3日龄仔猪腹泻、呕吐、精神不振为主的疫情,发病率80%,死亡率80%~100%.为确定此次疫病的病因,本研究从发病猪群中采集10 份病死猪小肠、脾脏、肺脏、淋巴结等组织进行细菌分离、PCR检测、病毒分离、病毒效价(TCID₅₀)测定、基因测序与分析.检测结果显示猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均为阳性,猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)均为阴性,未分离到致病菌.克隆测序分离株的ORF7和Nsp2全基因序列,结果显示分离株为美洲型PRRSV,ORF7基因全长为372 bp,编码123个氨基酸;Nsp2基因全长为2 850 bp,编码950个氨基酸,其中Nsp2基因在第481、532—560位发生了共30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV(HP-PRRSV) JXA1株Nsp2基因缺失特征一致,属于HP-PRRSV分离株.匀浆病料接种Marc-145 细胞,48 h开始出现 PRRSV 特征性病变,TCID₅₀为10^-5.75/0.1 mL.推测此次新生仔猪大批死亡主要是PEDV感染后继发高致病性猪繁殖与呼吸综合征所致.     

2016－2019年广西部分猪场仔猪病毒性腹泻的流行病学调查

本研究旨在了解引起仔猪腹泻的主要病毒性病原感染情况及流行特点,为有效防控广西仔猪腹泻提供科学依据。试验采用RT-PCR/PCR检测方法对2016年3月至2019年2月广西14个地级市366个规模猪场送检的914份仔猪腹泻病料样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪轮状病毒（PoRV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪Delta冠状病毒（PDCoV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪伪狂犬病病毒（PRV）检测,并分析其阳性率在不同年份、季节、地区之间的差异及病原混合感染情况。调查结果显示,PEDV、PDCoV、PRRSV、PoRV、PCV2、CSFV、PRV均存在不同程度的感染,其样品平均阳性率分别为59.74%、8.32%、7.77%、4.92%、3.72%、3.28%和2.08%,未检测出TGEV;PEDV已无明显季节性,一年四季均高发,即使在炎热的夏季,在感染猪群中也持续存在,PDCoV有明显的季节性,多发生在冬春寒冷季节;广西仔猪腹泻PEDV阳性率高,单一感染高达50.55%,仔猪腹泻混合感染情况也较多,其中以二重感染情况较为常见,同时也存在四重感染现象。结果表明,广西腹泻仔猪存在7种病毒性病原不同程度感染情况,其中以PEDV导致的仔猪病毒性腹泻尤为严重,新发PDCoV阳性率仅次于PEDV,需重视并加强对新发PDCoV的防控。     

2012―2013年猪繁殖与呼吸综合征病毒河南流行株的分离鉴定及分子流行病学调查

为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）流行毒株的遗传变异情况和发展趋势。通过RT-PCR方法,对2012―2013年采自河南省各地疑似病料进行PRRSV检测,并对阳性病料进行病毒分离鉴定及分子流行病学分析。结果显示：54份疑似病料中17份检测为阳性,阳性率为31.5%,并分离出3株PRRSV;通过完整的ORF5基因和部分NSP2基因序列遗传进化分析表明,河南地区流行毒株主要为美洲型PRRSV,且17份阳性样品中10份与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）高度同源、2份与经典PRRSV高度同源、另外5份与美洲流行毒株NADC30高度同源,该类毒株的NSP2基因在不同部位存在393个核苷酸缺失,国内尚未见相关报道。结果表明,2012―2013年河南地区PRRSV主要流行毒株为HP-PRRSV,同时出现了新的变异毒株,使河南地区乃至我国PRRSV变异种类更加多样化,提示加强PRRSV流行及变异的监测十分必要。     

猪流行性腹泻病毒SD201604株的分离鉴定及致病性研究

本研究旨在获得猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离株,并对其致病性进行研究。应用Vero细胞从山东某猪场腹泻病料中进行病毒分离,通过细胞病变、免疫荧光试验、电镜观察和RT-RCR进行鉴定,并对分离株的S基因序列进行分析;应用10^3.5 TCID₅₀/mL分离株口服接种3日龄仔猪并观察临床症状和病理变化;用不同滴度的分离株分别口服接种3日龄仔猪（3 mL/只）,统计各组仔猪的死亡率,确定最小致死量。结果显示,成功分离到1株PEDV,命名为PEDV SD201604株。该分离毒株能在Vero细胞上增殖,产生细胞病变,传代至F6代时病毒滴度可达10^3.5 TCID₅₀/mL,免疫荧光试验和RT-RCR检测均为PEDV阳性。电镜观察可见直径大小约为100 nm的病毒粒子,有明显的囊膜和纤突,具有PEDV病毒粒子典型的形态特征,确定分离株为PEDV。S基因序列分析显示,分离株为国内流行的PEDV变异株。动物回归试验结果显示,口服感染该分离株的5头3日龄仔猪全部出现典型的PED临床症状和病理变化,其中3头死亡。最小致死量试验结果表明,口服感染3 mL病毒含量为10^4.5 TCID₅₀/mL的分离株可使仔猪全部死亡。本试验结果可为PEDV的分离鉴定及生物学研究提供参考与借鉴。     

2018年广西重要猪源病毒性疫病流行病学调查

为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪圆环病毒3型（PCV3）,应用多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）。结果显示,所检测的694份组织样品中,CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV1、PCV2、PCV3的阳性率分别为11.10%、18.88%、7.20%、5.19%、2.45%、67.00%和5.76%;2种病原混合感染率为41.21%,3种病原混合感染率为4.32%,其中PRRSV和PCV2混合感染率最高。所检测的792份肠内容物及拭子腹泻样品中,PEDV、PDCoV、TGEV、PRoV的阳性率分别为9.72%、5.81%、1.77%和6.31%;2种病原混合感染率为5.30%,其中PEDV和PRoV混合感染率最高。结果表明,当前多种重要病毒性疫病仍在广西猪群发生和流行,并且多重感染普遍存在,应进一步加强监测和防控。     

Causes Analysis of Weaning Piglets Diarrhea

To understand the pathogenic causes of weaning diarrhea in Yunnan province,we collected 210 feces and 60 drinking water,a total of 270 samples in 30 farms with weaning diarrhea and analyzed the virus and pathogenic bacteria.The results of the study showed that drinking water was sever polluted by pathogenic Escherichia coli,40 strains of pathogenic Escherichia coli were detected in drinking water,the positive rate was 66.7%,and 100 strains in feces with positive rate of 47.6%;10 strains of pathogenic Salmonella were detected in drinking water,the positive rate was 16.7%,and 24 strains in feces with positive rate of 11.4%,and were sensitive to imipenem.PCR amplified positive rates of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV),porcine circovirous type 2 (PCV2),pseudorabies virus (PRV),classical swine fever virus (CSFV),porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and porcine rotavirus (PoRV) in feces were 5.2% to 13.0%,and they were not detected in drinking water.By analyzing the causes of diarrhea in Yunnan province in weaned piglets analysis,understanding the specific causes of diarrhea in weaned piglets,the results provided a more reasonable and more realistic theoretical basis and experimental reference for prevention and control of the disease from the cause.     

Impact of porcine group A rotavirus co-infection on porcine epidemic diarrhea virus pathogenicity in piglets

Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) and porcine group A rotavirus (PGAR) are the main causative agents of acute diarrhea in piglets. In South Korea, PGAR is prevalent in piglets naturally infected with PEDV. Piglets naturally co-infected with PEDV and PGAR appeared to have severe and prolonged diarrhea that was distinct from that commonly observed. The aim of this study was to determine the impact of PGAR co-infection on PEDV pathogenicity in piglets. Thirty-six colostrum-deprived, one-day old, Large White-Duroc crossbred pigs were randomly divided into four equal groups: PEDV, PEDV/PGAR, PGAR, and control groups. The piglets were euthanized at 1, 2, or 3 days post-inoculation (DPI) to measure the villous height:crypt depth (VH:CD) ratio and to collect fecal samples for RT-PCR and virus isolation. No significant differences in mean VH:CD ratio and clinical symptoms (diarrhea, vomiting, dehydration, and anorexia) were observed between the PEDV/PGAR-infected and PEDV-infected groups of piglets at 1, 2 and 3 DPI; however, at 2 and 3 DPI, PGAR was detected in all fecal samples by RT-PCR and virus isolation. These findings failed to detect any interaction between PEDV and porcine rotavirus in the small intestines of piglets, suggesting that concurrent infection of PGAR may not synergistically enhance intestinal villous atrophy of piglets with PEDV disease. We propose that the severe diarrhea exhibited in PEDV and PGAR co-infected piglets may be more associated with the immunity level of the host rather than to any synergistic effect of PGAR on PEDV enteritis.     

断奶仔猪腹泻病因分析

为了解云南省断奶仔猪腹泻的致病性原因,通过对30个发生断奶仔猪腹泻猪场的210份粪便、60份饮用水,总计270份样品,进行病毒及致病性细菌分析。研究结果表明,致病性大肠杆菌严重污染饮用水,致病性大肠杆菌在饮用水中检出40株,阳性率为66.7%,粪便中检出100株,阳性率47.6%;致病性沙门氏菌在饮用水中检出10株,阳性率为16.7%,粪便中检出24株,阳性率为11.4%,均对亚胺培南敏感。在粪便中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirous type 2,PCV2)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)及猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)的PCR扩增阳性率为5.2%~13.0%,在饮用水中未检出。通过对云南省断奶仔猪腹泻进行病因分析,了解断奶仔猪腹泻的具体原因,本试验结果为从病因入手防制该病提供更合理、更切合实际情况的理论依据与试验参考。