不同提取方法提取辣椒及其制品中DNA效果研究

采用CTAB法、SDS法、吸附柱法对辣椒及其制品中的基因组DNA进行提取,分别通过核酸蛋白测定仪、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光PCR扩增检测。结果表明,CTAB法、SDS法、吸附柱法均能从鲜辣椒、干辣椒、油辣椒、辣椒酱中抽提得到DNA,从核酸蛋白测定仪检测得到的DNA提取物OD260/OD280值可看出,CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较吸附柱法的低;DNA样品的琼脂糖凝胶电泳发现,各样品均无大范围明显拖尾,说明DNA提取完整度较好;实时荧光PCR检测分析3种提取方法的不同样品基因组DNA均出现PCR扩增曲线。经试验比较确定,提取方法的效率由高到低依次为吸附柱法>SDS法>CTAB法。可见,吸附柱法最适用于辣椒及其制品中核酸提取。     

微波消解原子吸收标准加入法测定底泥中镉的方法研究

底泥是水产养殖环境中（如池塘）底部有机、无机碎屑和土壤的混合物,成分较复杂,为准确测定底泥中镉的含量,比较研究了原子吸收标准加入法和浓度法的测定结果。结果表明：标准加入法与浓度法相比回收率好、精密度高,适合底泥样品的大批量检测。     

水与食品中诺如病毒检测技术研究

采用Trizol法、硅胶柱法、磁珠法分别提取病毒核酸,通过实时荧光PCR检测比较效果,选择最优提取方法;采用MCE-PEG富集法(混合硝酸纤维素膜第1次富集和聚乙二醇沉淀第2次富集)对水中诺如病毒进行富集;对生蚝肠腺、鳃组织进行前处理后,用磁珠法提取病毒核酸,通过实时荧光PCR检测。结果表明,硅胶柱法提取核酸效果较好;MCE-PEG法富集水中诺如病毒有效;实时荧光PCR技术能检测出染毒贝类中的诺如病毒。     

药用野生稻基因组DNA提取方法比较

以药用野生稻为试验材料，分别选用传统的CTAB提取法、CTAB改良方法、碱裂解法、磁珠法、吸附柱法、尿素提取法及酶消化法7种方法提取水稻叶片组织DNA,7种方法分别标记为A～G。通过比较这些方法提取出DNA的浓度和纯度，分析这些方法的优劣势。7种方法均能获得较好的基因组，按获得DNA浓度表现为A>B>F>C>G>E>D,纯度表现为D>E>C>G>B>F>A。综合考量DNA的纯度、浓度、提取时间、成本、安全无毒等方面因素，若对基因组的质量要求不高，只是做简单的检测且考虑成本问题，可以选择CTAB提取法、CTAB改良方法和尿素提取法；若需要高纯度基因组，可以选择磁珠法、吸附柱法、碱裂解法；若考虑安全无毒、快速提取及成本可控，可以选择磁珠法、吸附柱法；若样品稀有，可以选用CTAB提取法和CTAB改良法。     

DNA不同提取方法对养殖池塘底泥细菌多样性PCR-DGGE检测的影响

应用PCR-DGGE技术研究了养殖池塘底泥中细菌DNA 5种提取方法对细菌多样性检测的影响。结果显示:(1)DNA粗提液中腐殖酸与蛋白的纯度无正相关;(2)5种方法提取的DNA粗提液经过纯化后进行PCR均取得良好结果;(3)采用复合破壁方法提取养殖池塘底泥细菌DNA有利于显示细菌多样性;(4)DNA提取方法是影响池塘底泥细菌多样性PCR-DGGE结果的关键因素,与DNA的产量、纯度关系甚微;(5)5种方法相似性高达0.79,在对养殖池塘底泥细菌多样性进行粗略分析时均可使用;(6)本试验中,基于改进的Martin-Laurent法是用于养殖池塘底泥细菌多样性PCR-DGGE研究的较好的总DNA提取方法。     

鱼糜制品中基因组DNA提取方法的比较

将分别采用普通酚-氯仿抽提法和试剂盒(柱吸附法)提取DNA的两种方法加以比较,以确定最适提取鱼糜制品DNA的方法.将鱼肉和鱼糜制品作为原料,用两种方法提取基因组DNA,利用分光光度计测定其A260与A280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置;并用线粒体16S rRNA基因PCR扩增产物鉴定所提取的基因组DNA.     

鹿角DNA提取方法研究

收集63支鹿角,利用酚-氯仿法、改良酚-氯仿法、DNeasy~? BloodTissue Kit (50)、QIAamp~? DNA Investigator Kit (50)提取鹿角DNA,通过观察琼脂糖凝胶电泳结果,确定提取鹿角DNA的取样部位和提取方法。结果表明,鹿角中部DNA含量高于基部,更适合用于鹿角DNA提取工作;酚-氯仿法优于改良酚-氯仿法,DNeasy~? BloodTissue Kit (50)提取效果优于其他方法。进行鹿角DNA提取时,建议在鹿角中部取样,用DNeasy~? BloodTissue Kit (50)提取DNA。     

二种池塘底泥总氮含量的简易测定法

本实验创立了二种水产养殖池塘底泥总氮含量简易测定法,分别称为总氨法和硝酸盐法.通过与使用LECO公司的全自动CHN分析仪（Dumas仪器法）进行12个池塘底泥样品的测定结果比对,以及对所建立的回归方程经显著性检验,结果表明这两种方法均与Dumas仪器法之间存在线性相关,并回归极显著.二种土壤总氮含量的简易测定法,均实现了简化检测步骤、减少检测工作量、节省检测时间及降低成本,能满足许多水产技术推广站及养殖场等普通的实验室开展池塘底泥总氮含量的检测要求.     

5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果

[目的]研究5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果。[方法]以甘蔗种茎中获得的蔗汁为材料,采用2种植物基因组提取试剂盒柱式法和磁珠法、SDS法、CTAB法及简化提取法5种方法提取DNA,对比所提取的DNA浓度、纯度及后续PCR扩增的影响。[结果]以SDS法提取获得的蔗汁DNA浓度最高,平均可达377.50 ng/m L。而柱式法的试剂盒,提取的DNA浓度最低,PCR检测没有能够获得特异的目标条带,不适合用于蔗汁DNA的直接提取。虽然简化法提取的DNA浓度较低,但是能够满足PCR扩增的要求,由于不涉及氯仿等有害物质,操作简单,适用于对DNA质量要求不高时的快速提取。[结论]SDS法最适合用于蔗汁中DNA的提取。     

3种DNA提取方法对养殖池塘不同生境菌群PCR-DGGE分析的影响

比较3种DNA提取方法(溶菌酶法、CTAB法及珠磨法)对养殖池塘几种生境(底泥、饲料、草鱼肠道内容物及肠道壁)菌群PCR-DGGE分析的影响。结果表明,以3种提取方法获得的DNA为模板均能进行16S rDNA V3区特异性片段扩增;但不同DNA提取方法对池塘不同生境菌群DGGE指纹图谱存在显著影响。DGGE指纹图谱显示草鱼肠道内容物菌群(溶菌酶法)与肠道壁菌群(溶菌酶法)存在较高一致性,底泥菌群(CTAB法)及饲料菌群(溶菌酶法)与鱼体肠道菌群(包括内容物菌群和肠道壁菌群)则存在明显差异,但肠道菌群与底泥菌群的相似度相对更高。研究提示采用微生物分子生态学工具对养殖池塘不同生境进行菌群结构分析时,需提前优化DNA提取方法;在以投饲为主的养殖鱼塘中,草鱼肠道菌群更多源自于池塘底泥。     

籽鹅血液基因组DNA提取方法的比较研究

针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的基因组DNA提取方法,并为其他家禽提供参考.新方法利用简便经济的操作将蛋白质和核酸分离,去除杂质、沉淀核酸,与传统酚-氯仿法相比,具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,尤其适用于大量样品的DNA提取.     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较研究

实验用优化煮沸法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,DNA的OD260/OD280达1.77±0.06,证明所提DNA质量较好,用于PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿法相比,优化煮沸法避免了用氯仿、酚等剧毒试剂,且节约了时间和成本,是一种较好的提取基因组DNA的方法。     

不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹 DNA提取效果的比较研究

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量.结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃＞肌肉＞刚毛＞血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求.综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用.     

菖蒲芋螺不同大小基因组DNA片段的分离制备

使用常规酚/氯仿抽提法(CTAB法)、离心柱法和磁珠吸附法,分别从菖蒲芋螺毒腺、肌肉及肝胰脏中提取基因组DNA,利用普通琼脂糖凝胶电泳与脉冲场电泳(PFGE)对基因组DNA片段进行分离,并检测提取DNA的大小和分布范围,同时,对脉冲场电泳条件进行了优化。结果表明,3种方法均可提取基因组DNA,其中CTAB法和离心柱法提取的毒腺DNA纯度高,产率大,可用于后续实验,而磁珠法产率适中且纯度不高,但离心柱法的DNA片段较小,大多在9 kb以下,而CTAB法提取的DNA片段较大,获得的20 kb以上的大片段量较多,更适合于大片段基因组文库的构建。3种芋螺组织中,肝胰脏产率最高但片段弥散有降解,毒腺DNA片段较大且集中,产率也较高,而肌肉的DNA片段产率最低且片段较小。因此,用CTAB法提取菖蒲芋螺毒腺的DNA更适合构建大片段基因组DNA文库。筛选高质量的菖蒲芋螺的DNA,利用优化的脉冲场电泳条件进行分离回收,获得了不同大小片段的DNA,为后续菖蒲芋螺不同载体系统的基因组文库构建奠定了基础。     

藏酋猴毛干DNA的3种提取方法

为寻求一种从藏酋猴毛干中提取总DNA的有效方法,从一藏酋猴个体背部剪取数量不等的毛干样品(不含毛囊),经蛋白酶K消化后,分别采用高盐沉淀抽提法、酚氯仿抽提法、纳米磁珠抽提法分离获得用于PCR扩增的模板DNA,通过紫外分光光度计测定OD值并计算出质量浓度,同时进行琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测,分析3种方法提取藏酋猴毛干DNA的质量差异。每处理设置10个重复。结果表明,纳米磁珠法提取藏酋猴毛干中DNA是一种快捷、简便、经济、高效、安全的有效方法;进行毛发取样时以5～10根较为合适。     

八眉猪基因组DNA提取方法比较

动物遗传育种的研究以及基因工程等分子水平的操作均需从生物体中提取基因组DNA。提取的DNA质量会影响后续实验结果的可靠性,提取方法是影响DNA质量的一个重要因素。本实验采用酚-氯仿抽提法与DNA提取试剂盒法在相同温度条件下(4℃)提取猪耳组织DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明:用酚-氯仿抽提法所提取的DNA经凝胶数字成像系统分析显示其条带更宽更亮,说明含量较高,浓度更大,但点样孔有少许污染,蛋白质未除干净;而用新兴的试剂盒所提取的DNA虽然浓度不是很高,但无污染,可直接用于PCR以及酶切等后续实验。     

一种简单高效稳定的高质量第X期鸡胚盘DNA提取方法的建立

为了建立快速高效稳定的高质量鸡胚盘DNA提取方法,试验通过收集第X期鸡胚胎,应用酚氯仿抽提法、微量组织DNA提取试剂盒法和优化的硅胶膜吸附法分别提取鸡胚DNA,所提DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳初步检测,并经PCR进一步分析检验,对不同方法提取DNA的稳定性和质量进行评价。结果表明:微量组织DNA提取试剂盒法提取的基因组DNA比用酚氯仿抽提法提取DNA的方法具有更高的稳定性和更好的质量,而微量组织DNA提取试剂盒法与本试验建立的优化的硅胶膜吸附法提取的基因组DNA稳定性和质量相近,但本试验建立优化的硅胶膜吸附法,无需蛋白酶K消化胚盘组织,因而优化了步骤降低了成本。试验建立了一个简单高效稳定的高质量低成本的第X期鸡胚盘DNA提取方法,为后续的相关研究建立了一个有效的鸡受精蛋胚盘DNA提取方法。     

鞣制皮张DNA的提取

采用5种方法从鞣制的野猫(Felissilvestris)皮和漠猫(F.bieti)皮中提取DNA,用Cytb基因的通用引物进行PCR扩增,并对扩增结果进行测序,以检验提取效果。结果显示,鞣制皮张中的DNA含量少,高度降解,且含有大量的酶抑制物。用酚-氯仿法可以得到DNA,但需要采用DNAIQTM系统(Promega)的磁珠纯化策略进一步彻底纯化才能达到最佳扩增效果。此外,PCR引物设计时应尽量缩短扩增片段长度以便提高扩增成功率。     

几种提取乌苏里貉毛囊核酸方法的比较(英文)

[目的]该研究旨在探讨提取乌苏里貉毛囊核酸的可靠方法。[方法]本实验分别利用改进的有机酚法,chelex-100法,PCR缓冲液法和试剂盒法,从乌苏里貉毛发中提取核酸DNA,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析,并且对四种方法进行比较。[结果]经分光光度计测定和凝胶电泳检测,本实验研究结果表明chelex-100提取的核酸有蛋白质等杂质,PCR缓冲液法提取核酸浓度低有机酚法和试剂盒法提取的DNA浓度高,且没有杂带。[结论]本研究为进一步探索高效,简便的提取乌苏里貉毛囊核酸DNA提供了有力的科学理论基础。     

PCR仪法从林麝毛发中提取基因组DNA

采用PCR仪法从林麝(Moschus berezovskii)毛发中提取基因组DNA,并与酚/氯仿法进行比较.结果表明,采用PCR仪法提取所得的DNA浓度高、纯度好.以提取所得的DNA为模板扩增林麝雄性激素受体基因外显子1,获得的PCR产物务带清晰、位置正确.PCR仅法与酚/氯仿法相比操作简单,提取所得的DNA质量较高,值得推广.