山羊痘病毒TK基因的克隆与序列分析

设计特异性引物并应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y、B株TK基因序列片段,将其克隆至pMD 18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-TK.再将该重组质粒转化DH5α感受态细胞进行培养,对通过PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定.TK基因核苷酸和氨基酸同源性分析表明,4株测序毒株TK基因与参考毒株的同源性均为96.6%～100%,说明羊痘病毒TK基因具有高度的保守性.     

山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立

为建立山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)的SYBR Green Ⅰ荧光PCR万法,根据GPV的反向末端重复序列(Inverted Terminal Repeat,ITR)的核苷酸序列设计引物.以此引物和山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板,建立燕优化SYBR Green Ⅰ模式荧光PCR检测GPV的TTR基因的方法,并与普通PCR万法进行敏感性比较.结果表明,此次建立的检测GPV的SYBR Green Ⅰ荧光PCR方法能检测出7×102拷贝数的DNA模板,此法比文献报道的普通PCR法更敏感、准确、快速.     

贵州省猪萎缩性鼻炎的调查与防制研究

猪萎缩性鼻炎(AR)又称猪传染性萎缩性鼻炎(IAR),是由支气管败血波氏杆菌(Bronchiseptica ,Bb)或/和产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida ,Pm)引起的猪的一种慢性接触性呼吸道传染病,其临床特征为鼻塞、打喷嚏、流鼻血、咳嗽、呼吸不畅、颜面变形或鼻梁歪斜等.     

羊源产气荚膜梭菌贵州分离株多重PCR分型研究

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens,CP）又名魏氏梭菌（Clostridium welchii）,广泛分布于土壤、污水、饲料、食物、人畜粪便及肠道中,属典型的条件致病菌,能引起人类气性坏疽及多种动物的肠毒血症和坏死性肠炎。产气荚膜梭菌具有较强的致病力,这是由于该菌能产生15种以上外毒素及侵袭性酶类,但不同分离株间所产生外毒素的水平不尽一致,根据其产生的4种主要致死．f生毒素（即α、β、ε和ι）的差异可将产气荚膜梭菌分为A～E5种血清型。     

山羊痘病毒ITR基因片段的克隆与序列分析

应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y和B株ITR基因片段,插入pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组载体经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上8株羊痘病毒相应序列进行同源性分析。结果经PCR扩增,4株病毒均可得到一条均一的DNA片段,该片段可被内切酶AluⅠ特异酶切,而且该PCR的DNA模板最小检出量为24.40pg。经测序,该基因片段长度为289bp;序列比较发现,4株病毒ITR片段与GenBank上2株山羊痘病毒的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100%,与3株绵羊痘病毒分别为98.2%和96.5%,与3株牛疙瘩皮肤病病毒为98.2%～99.3%和96.5%～97.7%。这表明ITR基因片段在羊痘病毒属中较为保守,可以针对ITR基因建立羊痘病毒的PCR检测方法。     

猪繁殖障碍疫病的三重PCR法鉴别诊断

为建立一种简便、快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）3种病原的多重PCR方法，针对PRRSVN基因、PPVVP2基因及PRVgp50基因分别合成了1对特异性引物，通过PCR均扩增出分子长377bp、445bp和217bp的DNA条带，与预期扩增片段相符。以3对引物同时对PRRSV、PPV和PRV疫苗株进行多重PCR扩增及反应条件的优化，同时扩增出3条特异性条带。利用所建立的多重PCR方法，对贵州省11个养猪场的40份疑似病料进行检测，结果显示，PRRSV、PPV和PRV的阳性检出率分别为62．5％、17．5％和0％。     

辣椒制品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定

阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,在一定条件下可引起人和动物致病。为了加强对食品中有害细菌的监管力度,在对1份辣椒制品实施大肠杆菌常规项目检验的过程中分离出可疑菌株,经分离培养、革兰氏染色、API 20E和全自动VITKE 2生化反应鉴定及实时荧光PCR检测,确定该可疑菌株为阪崎肠杆菌。表明,辣椒制品存在阪崎肠杆菌的污染风险。     

不同提取方法提取辣椒及其制品中DNA效果研究

采用CTAB法、SDS法、吸附柱法对辣椒及其制品中的基因组DNA进行提取,分别通过核酸蛋白测定仪、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光PCR扩增检测。结果表明,CTAB法、SDS法、吸附柱法均能从鲜辣椒、干辣椒、油辣椒、辣椒酱中抽提得到DNA,从核酸蛋白测定仪检测得到的DNA提取物OD260/OD280值可看出,CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较吸附柱法的低;DNA样品的琼脂糖凝胶电泳发现,各样品均无大范围明显拖尾,说明DNA提取完整度较好;实时荧光PCR检测分析3种提取方法的不同样品基因组DNA均出现PCR扩增曲线。经试验比较确定,提取方法的效率由高到低依次为吸附柱法>SDS法>CTAB法。可见,吸附柱法最适用于辣椒及其制品中核酸提取。     

产气荚膜梭菌肠毒素基因原核表达载体的构建

以含C型产气荚膜梭菌分离株(CP2)肠毒素基因的克隆载体pMD18-T-cpe为材料,根据产气荚膜梭菌开放阅读框设计合成一对特异性引物,采用PCR技术对其进行扩增,经BamHI和EcoRI双酶切后,从胶上回收目的基因,与经过相同两种内切酶处理的原核表达栽体pET32a连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞后,提取质粒进行PCR和BamHI/EcoRI双酶切鉴定后测序.结果表明,肠毒素基因已成功地克隆到原核表达栽体上(重组质粒命名为pET32a-cpe),从而构建了产气荚膜梭菌肠毒素基因的原核表达质粒.     

贵阳市鸡群中禽流感不同亚型抗体的检测与分析

禽流感是由A型流感病毒引起禽类的一种烈性传染病，被世界动物卫生组织及国家农业部列为一类或A类动物疫病。根据A型流感病毒的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的差异，可将A型流感病毒分为不同的亚型。禽流感病毒属于A型，不同毒株的致病性存在差异，根据其对禽类致病力的不同，又可划分为高致病性毒株、低致病性毒株和非致病性毒株。