新型病毒抑制剂可减少猪的古典猪瘟感染

5-[（4-溴苯基）甲基]2-苯基-5H-咪唑并[4，5-c]吡啶（BPIP）在体外具有抗病毒活性。研究人员分析了BPIP能否减少古典猪瘟病毒（CSFV）在感染仔猪复制。给8头SPF猪连续饲喂15天（混在饲料中），每天75mg／kg。开始前1天用CSFV现地分离物感染。     

急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律的观察

为研究CSFV感染后在体外的传播途径、排毒规律,针对CSFV基因组设计了一对引物和一条探针,建立了一套CSFV荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并以质粒为标准品得到扩增标准曲线.对18个CSFV阳性质控样本检测全阳性,6个CSFV阴性质控样本检测全阴性,显示良好敏感性和特异性.应用此方法对石门株感染的16头60日龄长白猪和1头阴性对照猪的粪便、尿液、眼分泌物和唾液中病毒含量进行了动态测定,结果表明从感染后第1天到频死前第8天,粪便中均能检测出病毒;尿液和眼分泌物至少能从第3天,唾液从第4天开始检测出病毒,且病毒含量呈增加趋势.本研究对急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律进行了系统研究,为弄清CSFV感染病程、致病机理及临床诊断奠定了重要理论基础.     

用RT-PCR技术检测盐渍猪肠衣中猪瘟病毒的研究

参考GenBank中发表的猪瘟病毒（CSFV）序列，设计一对CSFV特异性PCR引物；从CSFV感染猪盐渍小肠中提取总RNA，经逆转录后进行PCR扩增，在盐渍小肠中成功扩增出与预期大小（168bp）一致的特异性条带，而正常猪和感染猪伪狂犬病病毒的猪小肠扩增结果均为阴性。用本方法对20例不同稀释浓度的盐渍猪肠衣样本进行检测，结果显示比经典抗原检测方法（抗原捕获ELISA法）具有更高的敏感性。实验表明，本RT—PCR技术能应用于盐渍猪肠衣的CSFV检测，为快速、准确检测盐渍猪肠衣中CSFV提供了一条新途径。     

多重荧光RT-PCR技术检测猪流感病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立

[目的] 建立能同时鉴测猪流感病毒（SIV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的多重荧光RT-PCR方法。[方法] 根据4种病原体的高度保守基因序列,设计相应引物和探针,并对引物和探针浓度进行优化,检测48例疑似样本。[结果] 建立了多重荧光RT-PCR方法,检测48例临床样本中,4种病毒均未感染的1例,SIV与JEV混合感染占2.1?%,CSFV与PRRSV混合感染为31.3?%。[结论] 多重荧光RT-PCR对四种病原体的检测准确性好,具有快速的特点。     

酵母表达典型猪瘟E2亚单位疫苗对致死量攻毒提供保护

典型猪瘟（CSF）由典型猪瘟病毒（CSFV）引起，是一个高度传染的猪病，给猪业生产造成巨大的经济损失。病毒衣壳糖蛋白E（ms）和E2是感染该病毒后诱导产生CSFV抗体的主要靶向目标。毕赤酵母表达E2蛋白（yE2）可产生免疫保护．对抗CSFV攻毒。     

广西猪瘟流行现状的调查分析

据对广西13个发病猪场（疫点）猪瘟（CSF）的流行病学调查分析，发现当地CSF流行以非典型为主，典型CSF同时存在，发病猪多在3月龄以下且病程较长。母猪存在隐性感染，部分表现为繁殖障碍，一些临床健康猪存在着带毒问题。此外，从凝似CSF病料中扩增出牛病毒性腹泻病毒（BVDV），表明广西猪群中存在着BVDV的感染。分子流行病学调查结果表明，猪瘟病毒（CSFV）广西流行株的基因型较复杂，分布2个基因群的4个亚群，其亲缘关系与2个传统毒株石门株（Shimen）和兔化弱毒株（HCLV）相距甚远，最高可达20.0%，说明广西CSFV流行株存在着遗传多样性。     

2019—2022年河池市屠宰猪群主要疫病监测分析

研究旨在了解河池市屠宰猪群主要疫病感染情况,于2019—2022年采集屠宰猪群组织混合样品,应用实时荧光定量RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、口蹄疫病毒（FMDV）、猪塞内卡病毒（SVA）,应用荧光PCR检测圆环病毒2型（PCV2）、圆环病毒3型（PCV3）、伪狂犬病毒（PRV）。结果显示,检测的1 745份样品中,除FMDV和PRV没有检出外,其余5种病原均有检出,样品总体阳性率由高到低依次为42.87%(PCV2)、11.63%(PCV3)、8.48%(PRRSV)、0.80%(CSFV)、0.80%(SVA);县区检出率依次为100.00%(PCV2)、100.00%(PRRSV)、90.91%(PCV3)、54.55%(CSFV)、27.27%(SVA);5种病原存在不同程度的混合感染。研究表明,圆环病毒病、猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟在河池市及其周边地区猪群中流行普遍,需进一步加强监测和做好防控措施。     

CSFV免疫状态下外周血T淋巴细胞亚群变化及对PRRS的免疫保护作用

建立CSFV疫苗免疫状态下猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染动物模型。测定CSFV抗体阻断率和PRRSV抗体S/P值,根据CSFV抗体阻断率和PRRSV感染情况分析猪外周血中T淋巴细胞亚群变化和对PRRS的保护促进作用。采用流式细胞术（FAC）检测猪外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8亚群的变化。结果,CSFV...     

猪瘟疫苗在猪圆环病毒2型阳性猪场的免疫效果观察

为了研究猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪瘟疫苗免疫效力的影响,对PCR证实为PCV-2阳性的试验猪进行猪瘟疫苗的免疫,分别在免疫后第1、3、7、14、21、28和63天对试验猪进行猪瘟病毒(CSFV)和PCV-2的抗体检测。检测结果表明PCV-2阳性猪在猪瘟疫苗免疫后均未能产生有效的CSFV抗体,从免疫猪的血液和内脏组织中也未能检测到CSFV核酸。虽然只能从1头PCV-2阳性猪的血清中检测到PCV-2抗体,但是却能从全部实验猪的淋巴结中检测到PCV-2的核酸。试验猪的病理组织学观察和白细胞计数也表明PCV-2阳性猪的淋巴结呈典型的PCV-2感染的病理变化,且白细胞数量显著低于健康猪。表明PCV-2的感染会对猪的免疫系统造成损害从而抑制猪瘟疫苗的免疫效果。     

血红素加氧酶1对猪瘟病毒复制的影响

本实验研究了猪血红素加氧酶1对猪瘟病毒(CSFV)在PK-15细胞中复制的影响,本研究应用siRNA干扰方法抑制PK-15细胞中血红素加氧酶1表达后再接种CSFV,细胞中CSFV基因组增殖与对照组相比显著下降;感染病毒细胞中和培养上清中CSFV滴度也显著降低。本实验首次报道了干扰细胞中HO-1表达对CSFV细胞中增殖的影响,提出了CSFV与血红素加氧酶1新的相互作用关系。     

单克隆抗体捕捉猪瘟病毒抗原ELISA方法的建立

分别用原核表达的猪瘟病毒（CSFV）主要抗原E2蛋白和猪瘟基因疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合与克隆筛选出5株稳定分泌CSFV抗体的杂交瘤细胞株1E2、1G7、3A2、3B7和4B6.间接免疫荧光和Western-blotting试验结果表明,5株单抗均与CSFV E2蛋白和全病毒抗原反应.将筛选的CSFV特异性单抗1E2、3B7和4B6纯化后等量混合后包被酶标板（捕捉抗体）,与兔抗CSFV IgG（检测抗体）联合应用,建立起CSFV抗原捕捉ELISA（AC-ELISA）方法.随后采用方阵滴定法确定了单抗与多抗的最适工作浓度及判定检测结果的OD450临界值.最后以建立的AC-ELISA检测CSFV细胞培养物、CSFV攻毒死亡猪的病料和临床猪瘟组织样品,结果表明,该方法敏感、特异、重复性好,与病毒分离和RT-PCR方法符合率分别为86.2%和90.3%.     

鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法,用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示：建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10⁰~10⁶拷贝·μL^-1模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL^-1;利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。     

单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立

以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。     

猪瘟诊断技术的应用进展

猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病,被世界动物卫生组织（OIE）列为A类动物疫病。近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化,影响了养猪业的发展。牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）与猪瘟病毒（CSFV）同属于瘟病毒槿,且与CSFV存在血清学交叉反应,对猪瘟的诊断造成了干扰。此外,猪瘟免化弱毒疫苗（HCLV）的大规模应用,也给CSFV野毒感染猪和疫苗感染猪的鉴别诊断带来较大困难。     

猪瘟诊断技术的应用进展

猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病,被世界动物卫生组织（OIE）列为A类动物疫病。近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化,影响了养猪业的发展。牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）与猪瘟病毒（CSFV）同属于瘟病毒槿,且与CSFV存在血清学交叉反应,对猪瘟的诊断造成了干扰。此外,猪瘟免化弱毒疫苗（HCLV）的大规模应用,也给CSFV野毒感染猪和疫苗感染猪的鉴别诊断带来较大困难。     

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒

根据猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)3种病原体的基因保守序列，分别设计了与CSFV的E2基因、PPV的VP2基因和PRV的gⅡ基因序列互补的3对引物。用这3对引物对人为混合的样品中的PPV和PRV的DNA模板及CSFV反转录后的cDNA模板进行多重PCR扩增和多重PCR反应奈件的优化，结果同时得到3务与试验设计相符的288bp(CSFV)、575bp(PPV)700bp(PRV)特异性条带；敏感性检测结果表明，该多重PCR可以检测到14．5ng／L的CSFV、27．1pg／L的PPV、31．4ng／L的PRV的核酸模板。     

2017-2019年山东省部分地区猪瘟流行病学调查

为掌握近年来山东地区猪瘟病毒（CSFV）的流行及其遗传变异情况，本研究对2017年1月-2019年12月从山东省济南市、泰安市、聊城市、青岛市等10个地区采集的1 687份疑似猪瘟感染猪病料运用反转录PCR方法进行了病毒核酸检测，将CSFV检测为阳性的样品进行E2基因和CSFV全基因扩增和测序，利用生物信息学软件DNAStar和Mega 7.0对CSFV的E2蛋白以及全基因序列进行遗传进化分析。另外，将这些地区采集的4 866份血清样本进行了抗体ELISA检测。结果显示，1 687份病料中病原检测有188份阳性，总阳性率为11.1%，其中2017-2019年病原检测阳性率分别为8.5%、13.1%、15.1%，抗原阳性率逐年上升且呈不稳定性，提示规模化猪场猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫存在一定的风险和压力；采集的4 866份血清样本中4 146份呈现抗体阳性（85.2%），统计得到2017-2019年抗体阳性率分别为84.3%、83.0%、92.3%，抗体阳性率呈现上升趋势，说明山东省规模化养殖场猪群猪瘟疫苗免疫保护的整体水平逐年提高；从阳性病料中扩增获得了5株CSFV全基因组序列和5株病毒E2基因序列，经过序列比对发现，5株临床分离毒株与2.1d亚型的CSFV全基因组序列同源性在97.5%~99.0%之间，表明5株分离毒株与2.1d亚型的CSFV亲缘性较近，分离毒株氨基酸位点的突变集中在102位（L→M）以及159位（K→R）氨基酸处。本研究分析了2017年1月-2019年12月山东部分地区猪群中CSFV毒株的流行与变异情况，为指导山东省CSFV预防与控制提供了有力的参考。     

时刻要警惕猪病毒性腹泻病

1猪的BVDV（猪病毒性腹泻）感染及其危害 国外专家在1973年从自然感染发病的猪体内分离到BVDV，从而首次在病原学上证实BVDV可自然感染猪。在1992年专家对英国发生的一起临床及病理学诊断为猪瘟的仔猪进行了血清血检查．结果证明发生这起“猪瘟”是由BVDV自然感染猪引起，而不是南猪瘟病毒引起，检查同窝其他仔猪及附近的牛。均为BVDV病毒血症．德国的专家在1994年多次观察到一种母猪不孕，仔猪生长迟缓。类似猪瘟的疾病．利用猪瘟病毒的特异性单抗证实所分离的病毒不是猪瘟病毒．将分离物人工感染猪可产生较高BVDV中和抗体．进而证实这种疾病由BVDV感染所致。1996年王新平等人通过实验在国内首次证实BVDV可自然感染猪并引起类似猪瘟的症状与病变．     

PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片构建研究

本研究旨在研制CSF-PRRS-PCV2诊断DNA芯片。根据各病毒序列选取靶标，制备相应探针，并构建DNA芯片。结果表明：该芯片能同时检测PRRS、CSF和PCV2感染，并能区分PRRSV欧洲型和美洲型毒株，芯片检测阳性判读标准为SNR≥1．5（信号总强度模式量化）或信号强度≥1000（信号中位值模式量化）。该芯片具有特异性高、灵敏度高和可重复利用的优点。应用PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片检测20份临床病料发现PRRSV、CSFV和PCV2单独感染分别为0、15％和5％，PRRSV与CSFV、PRRSV与PCV2、PRRSV、PCV2和CSFV混合感染分别为15％、35％和15％。     

多重PCR对猪病毒性繁殖障碍疾病的调查分析

为了解猪群中病毒性繁殖障碍疾病的流行状况,用多重PCR诊断方法,对太原市附近14个养猪场和门诊病例共1068份样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）的检测,其平均感染率分别为：PRRSV 32%、CSFV 40%、PPV 20%、PRV 12%、PCV-2 27%。其中混合感染2种病毒的猪群为39%,感染2种病毒的猪为24%。用RT-PCR试剂盒对山西省11个地市66个猪场及121个散养户的1572份血样进行了PRRSV和CSFV的检测,结果PRRSV感染率为33%,CSFV感染率为46%。用间接血凝试验对61个县38个乡136个村179户的1593份血样进行了猪瘟免疫抗体的检测,平均合格率为43.9%,从而为防控此类疫病的发生,制定综合防制措施提供试验数据。