重组Gallinacin-3的克隆及在大肠杆菌中的表达

防御素是昆虫、植物和动物体内抗感染及激发特异性抗感染免疫的重要抗菌肽。Gallinacin-3（gal-3）可能是鸡体内最重要的β-防御素，但它的功能还未得到研究证实。本试验从鸡黏膜表皮组织中克隆了gal-3编码基因，并在大肠杆菌中成功表达了gal-3与谷胱甘肽转硫酶（GST）融合蛋白。经IPTG诱导后，融合蛋白的产量占细菌总蛋白的33．6％左右，主要以包涵体形式存在。用亲合层析技术从大肠杆菌裂解液中纯化出可溶性重组蛋白，并用酶切除目标蛋白的融合伴侣。抑菌试验发现，重组gal-3-GST融合蛋白在未去除融合伴侣时，就与游离的gal-3有着相同的抑菌活性，对沙门氏肠炎杆菌和志贺氏痢疾杆菌的最小杀菌浓度在20μg／mL（相当于约4μg／mL纯gal-3）左右，与其他物种β-防御素的活性相当。     

鸡β-防御素在大肠杆菌中的高效表达及复性

鸡β-防御素(gallinacin-3,Gal3)是鸡体内重要的防御因子,本试验研究了鸡Gal3融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的规律,并探索了重组蛋白质的复性工艺.结果表明,加入诱导剂后1h,开始有可检出量的重组蛋白质表达,2h的表达水平已接近最大量;化学诱导剂IPTG 0.2～1.2mol/L对重组蛋白的产量没有明显影响.经Lablmage软件分析,融合蛋白的产量可达菌体总蛋白的35%以上,且主要以包涵体形式存在.将所获包涵体用8mol/L尿素溶解后,分步稀释于含有氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽的复性系统中,重组蛋白得到完全复性.12mg/L复性的重组鸡Gal3能抑制肠炎沙门氏菌的生长,24mg/L能抑制肠致病型大肠杆菌的生长.     

PRRSV特异性肽对CSF、PRRS免疫猪IFN-Y、IL-10分泌的影晌

应用PRRSV-GP5特异性肽刺激CSF、PRRS免疫猪外周血淋巴细胞,采用EI。IsA方法测定不同时间点淋巴细胞分泌IFN-7及IL-10的水平,分析PRRSv_GP5特异性肽刺激后,淋巴细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,CSFV高抗PRRSV低抗体组于PRRSV免疫14d,肽刺激组中IFN-7水平显著高于对照组（P〈0．05）;其他组均差异不显著（P〉0．05）。PRRSV免疫14d,细胞培养24,72h后加PRRSV—GP5肽刺激,各组中试验组与对照组相比IL-10水平明显降低（P〈0．01）;PRRSV免疫28d,各组中肽刺激组与空白组相比,IL-10水平均无显著性差异（P〉0．05）。结果表明,PRRSV-GP5肽在PRRSV免疫早期可以促进IFN-7的分泌,并抑制IL-10的产生,但在免疫后期对淋巴细胞分泌的调节作用还需进-步研究。     

干扰素在小鼠锥虫病中作用的研究

干扰素在小鼠锥虫病中作用的研究赵建增，刘子，许进香，田还成（军事兽医研究所）干扰素是一类重要的免疫因子，现在巳确信它们除了阻止病毒在组织内蔓延扩散外，还有许多种免疫调节作用。不过某些类型的干扰素也具有免疫病理作用。有许多资料说明干扰素在布氏锥虫、枯氏...     

伊氏锥虫感染引起家兔的免疫抑制反应的研究

本文系统地观察和分析了家兔感染伊氏锥虫后外周血液淋巴细胞的动态变化。结果表明，家兔在受感梁后的第二周，淋巴细胞的转化率就明显降低（Ｐ＜０．０５），直到感染四周时，细胞内的ｃＡＭＰ水平才出现明显的升高（Ｐ＜０．０１）。二者的水平一直维持至动物死亡。此结果提示感染兔发生了持续的免疫抑制，免疫抑制的形成与疫病的发生有直接相关性。文中对免疫抑制的形成机理进行了探讨。并指出阻止免抑制的发生，是提高动物免疫的     

CSFV免疫状态下外周血T淋巴细胞亚群变化及对PRRS的免疫保护作用

建立CSFV疫苗免疫状态下猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染动物模型。测定CSFV抗体阻断率和PRRSV抗体S/P值,根据CSFV抗体阻断率和PRRSV感染情况分析猪外周血中T淋巴细胞亚群变化和对PRRS的保护促进作用。采用流式细胞术（FAC）检测猪外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8亚群的变化。结果,CSFV...     

猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒株后血清细胞因子的变化特征

为了解Nsp2Δ1882-2241缺失后弱化的高致病性PRRSV（TJM株）对宿主免疫学应答的刺激机理,本研究分析了免疫猪血清中的细胞因子及变化规律。将14头4周龄易感仔猪随机分为3组：第1组接种PRRSV TJM-F92株,为免疫组;第2组接种高致病性PRRSV TJ-F5毒株,为攻毒组;第3组不接种疫苗及病毒,为对照组。接种后28d,用TJ-F5毒株攻击试验猪,于不同时间点采集血样,用ELISA法测定血清中的PRRSV抗体、IL-2、IL-10、IL-12p40、TNF-α、IFN-α和IFN-β水平。结果显示：（1）与对照组和攻毒组相比,免疫组猪IL-12p40水平持续上调,于免疫后28d受PRRSV强毒攻击后,其水平开始缓慢降低,但仍高于攻毒后的对照组。（2）免疫组IL-2水平在接种疫苗后的前21d内无明显升高且低于攻毒组,在受到强毒攻击后其IL-2水平却有明显升高。（3）免疫组IL-10水平与对照组无明显差别,并在免疫14d后一直显著低于攻毒组（P〈0.01）。（4）免疫组接种疫苗后的前21d内,TNF-α水平保持稳定,28d明显上调。攻毒组TNF-α水平0～28d一直低于对照组,且在21d达到最低（P〈0.01）。免疫组在28d受强毒攻击后,其TNF-α水平下降且在攻毒7d时最为明显（P〈0.01）,此后恢复到正常水平。（5）免疫组免疫后28d时IFN-α水平升高,在受到强毒攻击后再次显著降低（P〈0.01）。免疫组IFN-β水平一直低于对照组和攻毒组,不因强毒攻击而变化。以上结果提示,IL-12上调在PRRSV免疫保护中起明显作用;另外,上调TNF-α及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。     

猪瘟免疫猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后免疫应答及T细胞表型变化特征

选择17头28日龄的CSFV和PRRSV抗体均为阴性的仔猪,于试验的第1天和第14天分别对其进行猪瘟耐热保护剂活疫苗（兔源）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征Nsp2A1882—2241弱毒疫苗免疫。在免疫后的第28、42天采集外周血液,分析特异性抗体表达量和外周血T淋巴细胞表型的变化,评估猪瘟免疫对猪繁殖与呼吸综合征免疫的影响。结果显示,在CSF免疫后第28、42天,CSFV高抗组中的CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋、CD4^＋CD8^＋和CD4-CD8数目均比CSFV低抗组高,CD3^＋和CD8^＋细胞数量比CSFV低抗组低;PRRS高抗组中,CD4CD8-细胞含量高于PRRS低抗组;在CSF免疫后第28天,CSFV抗体产生较高（阳性比率为73．33％）,PRRSV抗体产生较低（阳性比率仅为6．67％）。在CSF免疫后的第42天,CSF高抗组中PRRSV抗体阳性比率较CSF低抗组高8．33％。结果表明,CSFV特异性抗体产生高时能增加PRRSV特异性细胞免疫应答,增加CD4^＋细胞、CD4^＋CD8^＋细胞数量,提高机体免疫水平。CD3＋和CD4CD8-细胞应答作用值得重视。     

规模化猪场常见疾病流行病学调查

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、伪狂犬病(PR).猪瘟(CSF)和猪圆环病毒病(PCVD)是4种威胁我国养猪业的重大传染病,但到目前为止还缺乏完善的防治手段.为了掌握这4种疾病的流行特点,本研究采用ELISA、免疫荧光等方法对2006年1月至2007年4月期间8个省市向本中心送检的6 918份病料及血清进行检测.此外,所有结果均用PCR/RT-PCR法进行验证,以保证结果的客观性和准确性.这4种病毒在所调查的养殖场均有很高的感染率.其中,PRRS、PR、CSF、PCVD的感染率分别43%、31%.7%和29%.在所检测的78个养猪场中,有53%的养猪场发生上述2种或多种病毒的合并感染.其中,CSF与PRRS、PR和PCVD双重感染的发生率分别为7.69%.7.69%和1.28%;PR与PRRS和PCVD双重感染发生率分别为19.23%和2.56%;PRRs和PCVD双重感染发生率为3.84%;PCVD-PRRS-PR,PCVD-CSF-PRRS及PR-PRRS-CSF三重混合感染率分别为5.13%.1.28%和2.56%;PR-PRRS-CSF-PCVD四重感染发生率为1,28%.无论是按季节还是按区域比较,PRRS的发病率最高,CSF的发病率最低.以上数据说明这4种疾病确实是当前养猪业丞待解决的问题,需要定期监测以便采取相应防治措施.     

猪细小病毒在PK15细胞中增殖规律的研究

猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同,如不能掌握其规律,将难以生产出优质的疫苗。对PPV（长春株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究,在PK15细胞系中重点比较了不同的病毒接种方法、病毒接种量和病毒收获时间等因素对病毒产量的影响。研究结果显示：本毒株在PK15和ST两种细胞系上的病变特征不同,但生长规模相似。在PK15细胞上按2％接种量、分步接种、80h时收获病毒,最终得到的病毒滴度（TCID50）最高。提示这是一种比较好的生产方案。然而,进一步的大规模培养试验是有必要的。