猪霍乱沙门氏菌LAMP检测方法的建立与应用

利用猪霍乱沙门氏菌lacZ基因设计特异性引物,通过优化各种反应条件,建立了检测猪霍乱沙门氏菌的环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。此方法特异性好,灵敏度高,将细菌DNA稀释到10-8仍可检出,是PCR方法的1000倍。本研究建立的LAMP方法操作简便、灵敏度高、特异性强,为临床检测猪霍乱沙门氏菌和预防人猪霍乱沙门氏菌病提供了技术保障。     

猪胃肠道微生物菌群的研究现状及调控技术进展

动物正常的消化吸收与其胃肠道内的微生物菌群有着直接的联系,而胃肠道微生物菌群与宿主胃肠道环境和宿主所处的外界环境密切相关,形成统一的整体.论文就猪胃肠道微生物菌群的组成和分布、胃肠道微生物菌群的作用、影响猪胃肠道微生物菌群的因素、动物胃肠道微生物菌群的研究手段及猪胃肠道微生物菌群的调控等五个方面进行综述,对进一步研究猪...     

稳定高效表达猪CD163的Marc-145细胞系的构建与鉴定

试验旨在构建一株高效表达猪CD163(pCD163)的Marc-145细胞系,为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的临床分离和疫苗生产奠定基础。根据GenBank中序列设计引物从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中扩增pCD163基因,将其插入真核表达载体pCI-neo构建真核表达质粒pCI-pCD163,将该重组质粒转染Marc-145细胞,通过G418筛选、单克隆化并扩大培养筛选获得表达pCD163的Marc-145细胞系,IFA、Western blotting鉴定其表达情况。IFA结果显示,构建的pCD163-Marc细胞系中荧光明显亮于普通Marc-145细胞;Western blotting结果显示,pCD163-Marc细胞系中CD163蛋白表达量约为对照Marc-145细胞中CD163蛋白表达量的8.7倍。且该细胞系可稳定传至20代,各代次之间表达量无差异。证明高效表达猪CD163的Marc-145细胞系构建成功。     

浅谈畜禽养殖业的环境污染及防治措施

当前,低碳经济逐步成为全球意识形态和国际主流价值观,并以其独特的优势和巨大的市场成为世界经济发展的特点,在此背景下,发展低碳畜禽养殖成为必然的趋势。随着畜禽养殖业的发展,环境污染问题逐渐成为大家关注的焦点。本文就我国近几年畜禽养殖业发展现状、造成环境污染的原因进行概述,并提出了应对目前畜禽养殖环境污染的防治措施。     

莱芜黑猪a1岩藻糖转移酶基因(FUT I)不同基因型对大肠杆菌F18抵抗力研究

为了研究不同猪种(山东省地方猪种莱芜黑猪和引进猪种大约克)和FUT I不同基因型仔猪对肠毒性大肠杆菌F18(ETEC F18)的抵抗能力和肠黏膜上皮细胞对ETEC F18 黏附能力的差异,在采用PCR-RFLP技术对莱芜黑猪和大约克FUT I基因型检测的基础上,选取易感性和抗性断奶仔猪,利用野生型ETEC F18标准株进行试验猪口服细菌攻毒试验和肠黏膜黏附试验.由于多方面原因,接受ETEC F18细菌攻毒的试验猪均未发病,无法判断试验猪对ETEC F18的抵抗能力.ETEC F18标准菌株能与所有FUT I敏感基因型仔猪的小肠黏膜上皮细胞黏附,而不能与抗性基因型仔猪小肠上皮黏膜细胞黏附,莱芜黑猪与大约克的肠黏膜上皮细胞与E.coli F18的黏附特性并无品种差异.但是养猪生产实践中,莱芜黑猪极少发生断奶仔猪水肿和腹泻病.所以除FUT I基因外,也许本地猪种有其他导致遗传抗性的突变或抗性基因.     

应用PCR-DGGE分析发酵床养殖仔猪消化道菌群多样性及其演替

利用PCR-DGGE技术研究了发酵床和水泥地养殖21d和42d仔猪消化道各段菌群多样性和相似性,结果表明,饲养全程中仔猪胃中菌群种类较少,经胃酸等抑制作用,回肠中菌群最少;之后,菌群迅速增殖,盲肠、结肠中菌群种类较多。相比于水泥地,发酵床提供了稳定而丰富的菌群和稳定的温湿度,能够持续增加消化道两端的胃和结肠中的菌群多样性,促进回肠菌群演替为稳定的盲肠菌群;全程保持较高比例的乳酸菌属,一定程度上抑制或减缓弯曲菌属、志贺菌属、埃希氏菌属生长增殖,有利于构建和维护仔猪消化道正常菌群,对于提高仔猪健康和生产性能是一种较为理想的养殖方式。     

猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

试验根据猪链球菌2型荚膜多糖（CPS）抗原设计CPS2J基因特异性引物,建立猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法的标准曲线为y=-3.073x+36.87,r=0.995,熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示,该方法可以检测出模板最低浓度为1.0×10¹拷贝/μL,是普通PCR的10倍;特异性试验显示,对猪链球菌2型具有良好的特异性,能够区分其他血清型猪链球菌和其他细菌;重复性试验变异系数为0.37%~0.63%,均低于2.5%。临床检测显示该方法的敏感性明显高于常规PCR方法和细菌分离的方法。以上结果表明,本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好,有利于对猪链球菌2型的快速检测。     

仔猪多发性关节炎病原菌的分离鉴定及耐药性研究

从山东地区32个猪场发生多发性关节炎的仔猪体内分离到15株病原菌。通过对分离菌株的形态染色、分离培养、生化试验及种特异性基因的PCR扩增等方法鉴定菌株,结果显示4株分离菌株为副猪嗜血杆菌,7株为猪链球菌,2株为化脓隐秘杆菌,1株为猪胸膜肺炎放线杆菌,1株为猪丹毒杆菌。15株分离菌均对昆明小鼠有较强的致病力,且对先锋霉素类抗生素高度敏感,大多数菌株还对青霉素类、头孢菌素Ⅲ类、氟喹诺酮类、万古霉素、壮观霉素等抗生素高度敏感。该试验表明山东地区猪场仔猪多发性关节炎的病原菌主要是副猪嗜血杆菌和猪链球菌,可交替使用上述敏感抗生素防治该病。     

猪链球菌2型分离鉴定及其对小鼠的致病性分析

为了解猪链球菌2型菌株对昆明小鼠的致病性,并建立其感染昆明小鼠模型,本试验分别取2头疑似患链球菌病的病死猪脑组织、血液分别涂布于含5%胎牛血清的TSA固体培养基中进行细菌分离;并对分离获得的细菌进行形态观察、PCR鉴定、药物敏感性试验、小鼠致病性试验及组织病理切片观察。结果显示,分离菌为革兰氏阳性短链球菌,经PCR鉴定为猪链球菌2型,命名为LY株;药敏试验证实LY株对青霉素、红霉素、氯霉素、苯唑西林、环丙沙星、诺氟沙星敏感,对四环素、多粘菌素B、克林霉素不敏感;LY株对小鼠致死剂量为2.2×10⁹ cfu/只;组织病理切片观察发现小鼠肺脏、脾脏及心肌均出现不同程度的病变。本研究明确了山东省猪链球2型毒株的毒力,为疫苗候选菌株的筛选提供了理论依据。     

SREBP-1c基因重组腺病毒的构建及其在犊牛原代肝细胞中的表达

将携带有化学合成的SREBP-1c基因的质粒先用Xba Ⅰ酶切,Klenow补平突出末端,纯化回收后再用Hind Ⅲ酶切,切胶回收目的基因片段;并将其克隆至用EcoR Ⅴ/HindⅢ酶切回收的pShuttle-EGFP-CMV(-)TEMP穿梭载体上.经酶切鉴定后,重组穿梭质粒和腺病毒pAdxsi质粒分别用I-Ceu Ⅰ+I-Sce Ⅰ双酶切处理,T4DNA连接酶连接,获得重组质粒pAdxsi-GFP-SREBP1c,酶切鉴定后经Pac Ⅰ酶切线性化转染HEK293细胞,经包装扩增后用TCID50测定病毒滴度.以重组腺病毒感染犊牛原代肝细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中SREBP1c mRNA和蛋白的表达量.结果显示,重组腺病毒酶切鉴定正确,滴度可达1.2×1010,腺病毒感染犊牛原代肝细胞中SREBP-1c mRNA和蛋白的表达显著升高.结果表明,本试验成功构建了SREBP-1c基因过表达重组腺病毒,且SREBP-1c在犊牛原代肝细胞中高度表达.