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用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA。敏感性试验表明,这2对引物可以分别到检测10-5TCID50和10-4TCID50的病毒含量。利用该方法对重庆、四川某些猪场中临床上疑似为PRRS的20份送检组织样品进行检测,只有引物P1/P2能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物;其中有15份样品呈PRRSV阳性结果,阳性率为75%,说明送检的样品感染的PRRSV为美洲型。试验结果表明该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的,是临床上对PRRS进行快速诊断和分子流行病学调查的实用方法。 相似文献
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为构建猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列,应用RT—PCR从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)C14—2分离株和欧洲型弱毒疫苗株VP046扩增并克隆获得戋洲型重组质粒C14P9(基因号:AY775132)、PRRS—PS9(基因号:AY775134)、Ulb(基因号:AY775135)、Y11(基因号:AY775133)、Y12(基因号:AY775136)和欧洲型基因重组质粒E6和E8。PCR法制备的靶基因和探针纯化后,质量浓度分别为300~600mg/L和200-400mg/L。芯片杂交动力学研究表明,杂堑信号强度随靶基因和探针浓度的增加而增强,最佳靶基因质量浓度为200mg/L,探针适宜范围为3~3000μg/L,系统灵敏性为3μg/L。靶基因杂交特异性研究表明,除个别靶基因在某一温度下存在交叉反应和杂交信号弱外,大多数靶基因在40~56℃下杂交信号强。采用AY775133、AY775134、E6和E8靶基因构建PRRS诊断DNA微阵列在40℃下预杂交1h、48℃湿盒避光杂交6h后经洗涤和扫读分析,杂交信号强、斑点明显、特异性高,按SNR≥1.5为标准能够区分PRRSV蔓洲型和欧洲型。应用PRRS诊断DNA微阵列检测了AMERVAC-PRRS、PRRSV弱毒疫苗、C14—2株、SCU株和临床样本,能正确区分PRRSV基因型。研究结果表明构建的PRRS诊断DNA微阵列可用于PRRS临床诊断和基因分型。 相似文献
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1我国猪场刚地弓形体感染严重我国规模化猪场弓形体病流行严重。江涛(2007)在湖北调查规模化猪场弓形体病流行情况,发现猪场弓形体血清阳性率在9.5%~80%之间,平均为35.2%,个别猪场阳性高达80%,母猪阳性率 相似文献
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猪泌乳衰竭综合征流行病学调查 总被引:1,自引:0,他引:1
经对某规模化养场的猪泌乳衰竭综合征进行调查,A猪群发病率为5.96%,B猪群发病病率为44.29%,由泌乳衰竭引起仔猪死亡率分别为17.15%和43.48%,同时发现猪泌乳衰竭综合征的发病率与季节,品种有一定关系。 相似文献
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几种主要禽疫病诊断基因芯片的制备及初步应用 总被引:7,自引:2,他引:5
进行了几种主要禽疫病诊断基因芯片制备及其初步应用研究。试验分别设计和克隆鉴定了NDV、IBV、AIV和IBDV的靶基因重组质粒。以克隆的靶基因重组质粒为模板。分别进行PCR扩增制备靶基因并纯化,以基因芯片点样仪将制备的靶基因点制在氨基化的基片上,经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后,成功制备了NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片。试验应用CY3荧光标记制备的探针进行芯片的检验,结果表明制备的NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片质量好,可对NDV、IBV、AIV和IBDV进行诊断检测,具有检测灵敏性好,特异性高和芯片可重复检测的优点。试验对30个临床样品进行初步应用检测,结果表明该诊断基因芯片技术与RT—PCR检测技术检出率基本一致,并具有同步诊断检测多种疫病的优点。 相似文献