用裁截的E2重组蛋白作为抗原建立ELISA检测猪瘟病毒抗体

猪瘟 ( CSF)是猪的一种传染性致死性疫病 ,该病在家猪群和野猪群中流行传播 ,造成地方流行性感染。猪瘟病毒 ( CSFV)是黄病毒科瘟病毒属成员之一 ,本属中还有另 2种具有经济重要性的病毒 :边界病病毒 ( BDV)和牛病毒性腹泻病毒( BVDV)。瘟病毒属成员在结构上和抗原性上密切相关。 CSFV的基因组为长约 1 2 .3kb的正极性RNA,其编码为单一多蛋白 ,形成成熟的病毒蛋白。CSFV感染后 ,在猪体内产生抗结构蛋白 E2 、Erns及非结构蛋白 NS3抗体。囊膜糖蛋白 E2 是CSFV最具免疫原性的蛋白。为在无疫区进行CSF监测 ,或开展 CSF扑灭计划…     

猪瘟病毒流行株的分离鉴定

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种猪病毒性传染病，猪瘟兔化弱毒疫苗有效地控制了猪瘟在我国的急性发生和大流行。但是自80年代以来，我国开始出现了温和、非典型性猪瘟。究其原因，可能与CSFV出现了新的变异株等因素有关。尤其是亚临床感染猪，依靠常规方法很难确诊并剔除此类病猪，给CSF的防制工作带来新的困难。因此，有必要对现阶段猪瘟的流行情况进行调查，分离出流行的猪瘟病毒毒株，为猪瘟的防治奠定理论基础。     

猪瘟诊断技术的应用进展

猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病,被世界动物卫生组织（OIE）列为A类动物疫病。近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化,影响了养猪业的发展。牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）与猪瘟病毒（CSFV）同属于瘟病毒槿,且与CSFV存在血清学交叉反应,对猪瘟的诊断造成了干扰。此外,猪瘟免化弱毒疫苗（HCLV）的大规模应用,也给CSFV野毒感染猪和疫苗感染猪的鉴别诊断带来较大困难。     

猪瘟诊断技术的应用进展

猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病,被世界动物卫生组织（OIE）列为A类动物疫病。近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化,影响了养猪业的发展。牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）与猪瘟病毒（CSFV）同属于瘟病毒槿,且与CSFV存在血清学交叉反应,对猪瘟的诊断造成了干扰。此外,猪瘟免化弱毒疫苗（HCLV）的大规模应用,也给CSFV野毒感染猪和疫苗感染猪的鉴别诊断带来较大困难。     

猪瘟病毒黑龙江流行株E2基因序列分析

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种猪病毒性传染病,猪瘟兔化弱毒疫苗有效地控制了猪瘟在我国的急性发生和大流行。但是自20世纪80年代以来,我国开始出现了温和、非典型性猪瘟。究其原因,可能与CSFV出现了新的变异株等因素有关。尤其是亚临床感染猪,依靠常规方法很难确诊并剔除此类病猪,给CSF的防制工作带来新的困难。因此,有必要对养猪场现阶段猪瘟的流行情况进行调查,比较该毒株与疫苗株之间核苷酸序列上的差异,从而为猪瘟的防制提供理论依据。1材料1.1疑似猪瘟病料采自黑龙江省哈尔滨、齐齐哈尔、大庆、佳木斯、绥化、牡丹江、…     

我国猪瘟的流行病学现状分析

根据调查、收集的猪瘟（CSF）临床与流行病学资料，分析了全国16个省市自治区48个发病猪场（疫点）的流行状况，调查结果表明，我国的CSF流行在较大范围内以临床表现不典型的CSF为主，发病多见于3月龄以下的创一猪，发病率与死率普遍较高，流行规模以局部流行为主，同一猪场中育肥猪与种猪的发病率很低，但母猪多呈隐性感染，部分感染母猪表现出繁殖障碍，因此认为隐性感染母猪可能晨仔猪感染的重要传染源，在某些地区，仍然流行着高发病率和致死率的急性、典型CSF。所调查的猪群具有较高防疫注射密度但仍有CSF发生，可能表明猪群的免疫水平不高，调查结果对进一步了解我国CSF的流行现状具有重要的参考价值。     

我国猪瘟的流行病学现状分析

根据调查、收集的猪瘟（CSF）临床与流行病学资料，分析了全国16个省市自治区48个发病猪场（疫点）的流行状况。调查结果表明，我国的CSF流行在较大范围内以临床表现不典型的CSF为主，发病多见于5月龄以下的仔猪，发病率与死亡率普遍较高，流行规模以局部流行为主，同一猪场中育肥捂与种猪的发病率很低。但母猪多呈隐性感染，部分感染母猪表现出繁殖障碍，因此认为隐生感染母猪可能是仔猪感染的重要传染源。在某些地区．仍然流行着高发病率和致死率的急性、典型CSF。所调查的猪群具有较高防疫注射密度，但仍有CSF发生，可能表明猪群的免疫水平不高。调查结果对进一步了解我国CSF的流行现状具有重受的参考价值。     

猪瘟的分子生物学诊断

采用RT－PCR方法，从经临床和血清学初步诊断为猪瘟的病料中扩增了猪瘟病毒（CSFV）的E2基因某一片段；对扩增片段进行序列测定，通过DNAsis软件构建了系统发生树，确定了这一流行株（IPI株）在系统发生树中的位置。结果表明，从IPI株和石门株（Shimen)中均扩增出271bp目标片段，这一流行株与我国20世纪90年代以来流行的绝大多数CSF毒株同属于基因2群中的2.1基因亚群，与YN1、YN2、GX4、GZ1的关系较近，而与Shimen株、兔化弱毒株（HCLV）等我国传统的标准毒株相距较远。这一结果为猪瘟的诊断和检疫提供了一种特异、可靠的方法。     

猪瘟病毒广西流行毒株E0基因的克隆与分析

应用RT-PCR方法对猪瘟病毒E0基因进行扩增、克隆及测序,用DNA Star分析软件对6株毒株与猪瘟兔化弱毒苗(HCLV)、石门(Shimen)株、Paderborn株、GXWZ02株的相应片段进行比较分析,构建了CSFV遗传进化树。序列分析表明,广西流行株与HCLV株、Shimen株、Paderborn株、GXWZ02株之间核苷酸的同源性分别为80.8%~81.5%、82.8%~83.3%、93.1%~94.2%、93.7%~94.2%,推导的氨基酸同源性分别为88.3%~89.7%、89.7%~91.1%、96.2%~97.7%、97.7%~99.1%;6株广西CSFV流行毒株与国内外已发表的14株病毒相应序列进行比较,构建遗传进化树,结果表明所比较的20株毒株分为2个基因群,广西流行毒株均属于基因群Ⅱ。本研究成功地对广西流行猪瘟病毒株的E0基因进行了测序分析,表明近年来广西流行毒株未发生较大的变异,但病毒株有远离疫苗株发展的趋势。     

2012—2018年山东省部分地区猪瘟分子流行病学研究

为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒（CSFV）分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFV E2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,并构建了遗传发育进化树。结果显示：7株CSFV属1.1亚型,其中有3个毒株的E2基因与疫苗株E2基因几乎一致,提示这7个毒株可能来自疫苗毒或为类疫苗毒株;SDJZ-15株归属2.1b亚型,其 E2基因推导氨基酸仅A51（丙氨酸）突变为V51（缬氨酸）;其他51个毒株属2.1d亚型,与2型CSFV的 E2基因主要抗原区（28~90 aa）氨基酸序列相比发生了4处突变,总体保持稳定。研究结果表明,2.1亚群中的2.1d分支CSFV是山东省当前的优势流行毒株。     

酵母表达典型猪瘟E2亚单位疫苗对致死量攻毒提供保护

典型猪瘟（CSF）由典型猪瘟病毒（CSFV）引起，是一个高度传染的猪病，给猪业生产造成巨大的经济损失。病毒衣壳糖蛋白E（ms）和E2是感染该病毒后诱导产生CSFV抗体的主要靶向目标。毕赤酵母表达E2蛋白（yE2）可产生免疫保护．对抗CSFV攻毒。     

我国部分地区猪瘟病毒流行株的基因差异

采用 RT-PCR方法 ,从我国 1 0个省、市、自治区收集的 2 3个猪瘟病毒 ( CSFV)流行毒株中 ,扩增了CSFV E2基因中主要抗原位点编码区。对各扩增片段进行了序列测定 ,通过计算机分析构建了系统发生树 ,并确定了它们间的遗传相关性。结果表明 ,2 3个流行毒株中的 1 8株属基因 群 ,占 78.2 6%;另外 5个流行株与传统石门强毒、兔化弱毒株属基因 群 ,占 2 1 .74 %。两群间测序区的核酸同源性只有 78.90 %。此外 ,根据序列差异程度 ,将基因 群流行株分为 3个亚群 ,各基因群 CSFV在地域分布上未发现有明显的特征性。本研究初步揭示了我国较大范围内流行的 CSFV毒株与传统的石门强毒和疫苗用兔化弱毒在抗原基因上存在较大的差异 ,以及我国猪瘟病毒流行株在地域分布上的多样性     

2017-2019年山东省部分地区猪瘟流行病学调查

为掌握近年来山东地区猪瘟病毒（CSFV）的流行及其遗传变异情况，本研究对2017年1月-2019年12月从山东省济南市、泰安市、聊城市、青岛市等10个地区采集的1 687份疑似猪瘟感染猪病料运用反转录PCR方法进行了病毒核酸检测，将CSFV检测为阳性的样品进行E2基因和CSFV全基因扩增和测序，利用生物信息学软件DNAStar和Mega 7.0对CSFV的E2蛋白以及全基因序列进行遗传进化分析。另外，将这些地区采集的4 866份血清样本进行了抗体ELISA检测。结果显示，1 687份病料中病原检测有188份阳性，总阳性率为11.1%，其中2017-2019年病原检测阳性率分别为8.5%、13.1%、15.1%，抗原阳性率逐年上升且呈不稳定性，提示规模化猪场猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫存在一定的风险和压力；采集的4 866份血清样本中4 146份呈现抗体阳性（85.2%），统计得到2017-2019年抗体阳性率分别为84.3%、83.0%、92.3%，抗体阳性率呈现上升趋势，说明山东省规模化养殖场猪群猪瘟疫苗免疫保护的整体水平逐年提高；从阳性病料中扩增获得了5株CSFV全基因组序列和5株病毒E2基因序列，经过序列比对发现，5株临床分离毒株与2.1d亚型的CSFV全基因组序列同源性在97.5%~99.0%之间，表明5株分离毒株与2.1d亚型的CSFV亲缘性较近，分离毒株氨基酸位点的突变集中在102位（L→M）以及159位（K→R）氨基酸处。本研究分析了2017年1月-2019年12月山东部分地区猪群中CSFV毒株的流行与变异情况，为指导山东省CSFV预防与控制提供了有力的参考。     

我国部分省份猪流行性腹泻的流行病学监测

[目的]为摸清我国猪群流行性腹泻的感染状况,[方法]从2011年底到2014年3月,对云南、广西等29个省份开展了猪群腹泻疫情流行病学调查,采集、收集了发生腹泻症状的发病猪群样品（新鲜粪便、肠道组织等）,进行了猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）等多种病原检测。[结果]在7021个调查猪场中,出现腹泻的阳性猪场4060个（57.83%）。在收集的1383份腹泻样品中,利用RT-PCR方法检测到PEDV阳性样本686份（49.58%）,其中腹泻发病猪样品中PEDV的检出率为67.82%,675份组织样品共检测出PEDV阳性样本86份（12.75%）。[结论]这表明我国猪场PEDV的感染十分普遍。对S基因进行分子流行病学分析发现,我国PEDV流行毒株与已有PEDV毒株可以分为2个完全不同的进化分支G1和G2,G1以CV777和DR13等疫苗株和早期毒株为主,G2则以2011-2013年流行毒株为主,流行毒株之间的同源性为97.8%-100%,与疫苗株CV777之间的同源性为94.3%-94.5%。     

猪瘟野毒混合毒实验室感染的研究

本研究以本所近年来所分离的高、中、低三株不同毒力（HeNXH3.98、JL1.94和FJFQ1.99）的猪瘟野毒混合毒对敏感猪进行实验室感染试验，利用HCFA、RT－PCR及序列测定进行检测和分析，结果2头试验猪均在感染后2周发病死亡，表现典型的猪瘟临床症状；序列测定及分析结果表明感染后1周及2周2头实验感染猪所分离的病毒E2基因主要抗原编码区序列完全一致，核苷酸及氨基酸同源性均为1005；与感染毒株序列比较，2头试验感染猪所分离的病毒E2基因主要抗原编码区序列与JL1.94株序列完全一致，核苷酸及 在酸同源性均为100％，且基因分群在同一群；而与HeNXH3.98和FJFQ1.99株序列则有一定的差异，且不在同一基因群或基因亚群，说明在多个猪瘟病毒存在的情况下，敏感猪存在对猪间病毒的优势选择。本试验的条件下3株不同和的猪瘟野毒混合感染以中等毒力毒株JL1.94为优势毒株。     

猪瘟病毒广西地方流行株GX-3/98的致病性及其与兔化弱毒株的免疫相关性

从广西南宁某猪场分离1株病毒（GX-3/98）,通过RT-PCR扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2基因主要抗原编码区,与猪瘟石门系强毒株及兔化弱毒株核苷酸序列同源性分别为80.6%和81.1%,属于基因Ⅱ群,subgroup 2.1亚型。该毒株经本动物传3代,均不表现典型的猪瘟临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后,以此分离病毒攻毒,进行免疫保护相关试验,结果免疫组100%（2/2）获得保护,且在攻毒前、后扁桃体HCFA检测均为阴性。对照组（非免疫猪）攻毒后50%（1/2）死亡,另1头猪耐过。扁桃体HCFA检测,于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到猪死亡的第79天。本试验结果初步表明,我国现行使用的猪瘟兔化弱毒苗对目前猪瘟病毒流行毒株仍具有良好的保护力。GX-3/98流行株为1株毒力较低的猪瘟病毒,能够长时间散毒。     

竞争性ELISA检测猪瘟病毒抗原

猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起，主要侵袭家猪及野猪，引起高发病率、高死亡率的烈性传染病。由于其危害严重、流行分布广泛，成为国内外分子病毒学及兽医防疫研究的热点之一。CSFV属于黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestvirus）成员，与同属的牛病毒性腹泻病毒（Bovineviral diarrhea virus，BVDV）、羊边界病病毒（Borderdiseasevirus，BDV）、长颈鹿瘟病毒（Giraffepestvirus），在病毒结构、抗原性和遗传特性等方面密切相关。     

猪源牛病毒性腹泻病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。     

中国南方典型猪瘟病毒遗传多样性和猪瘟病毒毒株正选择分析

典型猪瘟病毒（CSFV）在世界范围内导致高度传染性疾病流行．给生猪产业造成巨大的经济损失。目前一直缺乏中国南方地区CSFV的准确的基因分型。这项研究对2008～2010年分离到的中国南方地区家猪不同毒株的E2基因进行分析（14株猪瘟病毒）。系统发育分析表明，     

猪瘟病毒LOM株的一个感染性的cDNA克隆的建立和特征

典型猪瘟病毒（CSFV）在猪群中具有高度传染性，给世界经济造成重大的影响。典型猪瘟病毒（CSFV）LOM株是1956年从日本分离的低毒力Miyagi株的致弱株毒。用RT—PCR获得了LOM株CSFV基因组的8个基因片段。