猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用

猪博卡病毒是最新发现的一种DNA病毒，于2009年首次在瑞典患仔猪断奶后多系统衰竭综合征的猪体内被鉴定。为了及时地评估其在我国的流行情况，本研究根据GenBank上递交的唯一一条猪博卡病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物，并首次建立了猪博卡病毒的PCR检测方法。该方法特异性强，敏感度高，重复性好，对2009年我国部分省市猪场的191份临床样品进行检测，结果75份为猪博卡病毒阳性，这表明我国猪群中猪博卡病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以作为猪博卡病毒在临床上的一种诊断技术。     

猪源牛病毒性腹泻病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。     

1株猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

从BVDV阳性仔猪病料中分离病毒,为开展猪源BVDV病原学研究奠定基础。将处理后BVDV阳性仔猪组织样品接种MDBK细胞,分离到1株猪源BVDV,命名为SD0803株。通过细胞培养、直接免疫荧光、5′-UTR与Npro PCR扩增、电镜观察、TCID50测定及对其分子进化特征加以分析。结果表明,该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变。在直接免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。PCR扩增分别获得5′-UTR与Npro预期大小DNA片段。电镜观察,病毒粒子略呈圆形,有囊膜,直径约50nm。病毒滴度为10-6.5 TCID50.0.2 mL-1。SD0803 5′-UTR、Npro序列进化分析显示,该分离株属于BVDV-1,与已知BVDV-1各亚型之间同源性较低,单独成一分支。结果表明,成功分离鉴定1株猪源BVDV SD0803,该毒株为非致病变型BVDV-1,极有可能为BVDV-1新的亚型。     

食蟹猴低钙血症的诊治

在家畜、家禽中,低钙血症多发生于仔猪、犊牛及幼禽,青幼年食蟹猴钙及维生素D缺乏而影响食蟹猴生长发育,引发食蟹猴肢体残疾甚至死亡的重要疾病之一[1].2009年8月～9月广东某猴场由于在自制饲料(松糕)中,饲料制作员在制作饲料时没有按照要求添加磷酸氢钙,导致饲养的0.7岁～3岁的100多头食蟹猴陆续出现不同程度的不愿走动、行走困难、跛行、后肢膝关节肿大、头皮下出现血肿等症状,但未见死亡. 1 发病情况 在一个月时间里,整个发病猴区出现了18例头皮下血肿病猴;后肢无力、后肢瘫痪、关节肿大的病猴85例.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5a/ORF5重叠区的分离

以两个不同基因型的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用SOE-PCR将I型PRRSV的ORF2～5a替换进II型PRRSV的相应区域,旨在将I型PRRSV的5a从ORF5中独立出来进而研究5a蛋白的功能,同时探讨两型PRRSV的结构蛋白结构与功能关系。研究结果表明,I型PRRSV的ORF2～5a序列能稳定存在于嵌合病毒基因组内,表达的相应蛋白能在II型PRRSV中发挥同样功能。本研究首次将PRRSV的ORF5a序列从ORF5中独立出来,为进一步研究5a蛋白的结构与功能提供了理论依据和基础材料。     

黑龙江省粮食生产对气候变化影响的脆弱性分析

将敏感性指数定义为气候产量与气候生产力之比、适应性指数定义为趋势产量与气候生产力之比、两者的比值定义为脆弱性指数，利用黑龙江省70个县（市）农业生产资料和21个气象台站1986-2000年的日气象资料，计算分析黑龙江省粮食生产对气候变化影响的脆弱性。结果显示，从多年平均来看，黑龙江省粮食生产的适应性指数整体都比较高，并且南部地区高于北部；大兴安岭山区和嫩江平原区的敏感性指数较高；脆弱性指数的空间布局与敏感性指数相似；从时间变化上来看，在研究时段内三个指数都有增加的趋势，但敏感性指数的增强幅度最大，脆弱性指数的增加幅度减小。研究结果对定量评价该省粮食生产对气候变化的响应程度具有重要意义，并且该方法简便可行，为此类研究提供一种新的思路和方法。     

仔猪水肿病病原菌的分离鉴定

从江苏淮安某猪场具有典型水肿病临床症状和剖检变化的发病猪组织分离的菌株中挑选5株大肠杆菌,分别命名为JS0001、JS0002、JS0003、JS0004和JS0005。通过培养特性、菌体形态、染色特性、生化鉴定及血清学试验等一系列方法对其进行系统鉴定,并对这5株细菌进行抗药性、溶血性、Vero细胞毒性和小白鼠致病性等试验。试验结果表明,JS0001、JS0002、JS0004和JS0005表现β型溶血,腹腔接种小白鼠,JS0001、JS0002、JS0003、JS0004对其具有较高致病性;5株细菌药敏特性基本一致：对痢特灵（FR）、头孢噻肟（CTX）、阿米卡星（AN）敏感,对头孢曲松（CRO）敏感性最高,而对阿莫西林(AMX)、多西环素(DO)等药物具有耐药性。JS0002、JS0004能够分泌Vero细胞毒素,确定为产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）。血清学试验结果表明,JS0002、JS0004的血清型为O₁₃₉,JS0001、JS0003为O₁₄₁。     

干燥介质及木材性质对板材常规干燥速率影响的扩散数学模型

简述了木材干燥水分扩散数学模型的研究背景,基于实验研究建立了木材常规干燥的扩散数学模型,模型中主要考虑了木材结合水与水蒸气的扩散机制.通过扩散数学模型的分析求解,可以解释板材的变异性(如板材厚度、含水率、板型等)及干燥介质状态参数对干燥过程的影响.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非编码区前导转录调控序列及其侧翼序列的结构与功能解析

为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的基因调控水平。将突变DNA克隆转染入BHK-21细胞后利用免疫荧光及RT-PCR试验来研究拯救后突变病毒的转录、翻译特性,及通过空斑形态学及病毒生长曲线分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV 5'UTR中该高级调控元件的顶端环结构为病毒复制所必需,其只可耐受2个核苷酸的突变;同时发现该调控元件中一保守的茎结构为病毒复制非必需。由此证实了PRRSV 5'UTR中调控病毒复制过程的必需高级结构,为进一步解析PRRSV复制调控元件奠定基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,该病毒自发现以来受到国内外学者的高度重视,对病毒结构蛋白的研究也正在逐步深入和完善.论文综述了近年来PRRSV结构蛋白的最新研究进展,特别对新发现的5a蛋白的结构与功能、决定病毒入侵的细胞受体及与其结合的病毒囊膜蛋白等问题进行深入分析,从而...