鹅星状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明：所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同种的鹅星状病毒混合感染。病原分离结果表明：鹅星状病毒FLX株的变异株病毒（命名为SCCD）可以在鹅胚上稳定增殖,并且能稳定致死10日龄鹅胚,致病力较鹅星状病毒FLX增强;新型鹅星状病毒株（命名为SDPD）不能在鹅胚和SPF鸡胚上稳定增殖。病毒的基因组测序结果表明：鹅星状病毒FLX株与鹅星状病毒FLX的变异株病毒SCCD株、新型鹅星状病毒SDPD株全基因组核苷酸相似性分别为89.7%、58.1%,ORF1b基因氨基酸相似性分别为98.4%、61.0%,ORF2基因氨基酸相似性分别为81.0%、42.5%。将新分离的鹅星状病毒株接种1日龄健康雏鹅,结果表明,鹅星状病毒SCCD株和鹅星状病毒SDPD株虽然能使雏鹅发生死亡,引起肝炎、肾肿胀和增重减少等变化,但雏鹅均无典型痛风（脏器尿酸盐沉积）表现,而两种鹅星状病毒株混合攻毒能使44%的雏鹅发生典型痛风,并与临床发病症状一致。因此,临床上引起雏鹅痛风的病原可能是两种鹅星状病毒,即新型鹅星状病毒和鹅星状病毒FLX的变异株病毒。     

H9N2亚型禽流感流行分析及疫苗毒株的筛选

本研究旨在筛选新型免疫原性好、广谱的优秀 H9亚型禽流感病毒疫苗株。通过 H9N2分子流行病学调查对分离得到的37株禽流感 H9N2亚型病毒进行 HA 基因分子遗传进化及其关键位点分析,利用交叉 HI 效价及鸡胚中和试验分析毒株间毒力及其相关性,制备疫苗用毒株进行免疫攻毒保护试验。结果显示,从37株病毒中选出12株病毒作为代表,分为3个分支,同分支之间交叉 HI 效价及中和效价最高。HI 试验及鸡胚中和试验均显示同分支毒株间的相关系数高。免疫攻毒保护试验显示同分支疫苗株安全性高。表明我国禽流感 H9N2亚型情况复杂,且疫苗保护效果与疫苗株的抗原匹配性密切相关,生产多种分支 H9疫苗株联合更有利于控制 H9型禽流感,     

猪气喘病蜂胶灭活疫苗的研制

猪气喘病（Mycoplasma pneumonia of swine MPS），亦称猪地方流行性肺炎（Swine enmotic pneumonia），是由猪肺炎支原体（Mycoplasnm hyopneumoniae Mhp）引起的一种接触性、慢性呼吸道传染病，以咳嗽、喘气、生长发育迟缓及饲料转化率低为特征。本病具有发病率高、死亡率低的特点。在同一猪场的发病率可达100％，特别是在集约化猪场，一旦发病，将造成严重的损失。     

IBV肾型地方分离株弱毒疫苗与同类冻干疫苗的免疫效力试验比较

本试验对人工致弱IBV肾型地方分离株(SF株)与相应进口弱毒疫苗和国产弱毒疫苗进行了免疫效力比较试验。结果表明SF株免疫后产生抗体的时间和抗体效价高低与其他疫苗相当甚至略高,对攻毒鸡的保护率均为100%。剖检实验鸡,采集肾脏样本做肾脏组织切片,观察发现接种致弱的SF株疫苗后,引起的肾脏组织病理变化比选用的2种国产疫苗病理变化轻微,而与进口疫苗引起的病理变化程度相当,属可逆性病变。     

2012年-2015年我国部分地区禽偏肺病毒的分子流行病学分析

为了调查鸡群中禽偏肺病毒（aMPV）的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行 RT-PCR 检测,随机选取9株 PCR 阳性产物对其 F 基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检出阳性样品142份,阳性检出率达50．7％;9个试验毒株之间 F 基因同源性为99．4％～100％,与 B 型 aMPV 代表株的同源性为97．7％～99．9％,而与 A 型、C型和 D 型 aMPV 代表株的同源性为71．9％～79．4％;由遗传进化树可见,这9株 aMPV 均属于 B 型分支。说明我国鸡群中目前存在 aMPV 感染,B 型毒株是优势流行基因型,从而为禽偏肺病毒疫苗的开发提供了流行病学资料。     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)由德国学者Tischer从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得。该病毒可长期持续感染PK-15却不表现细胞病变(CPE)。后来证实PK-15中存在的这种病毒来源于当初制备PK-15细胞的猪肾组织。该病毒基因组由一个单股圆环状的DNA链组成，是一种新发现的病毒，将其命名为圆环病毒。血清学调查发     

猪瘟兔化组织灭活疫苗的研制

猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的重要的急性、烈性传染病，它被国际兽疫局(OIE)列为A类传染病之一。每年我国都投入大量的人力、物力、财力进行猪瘟疫病的研究及控制工作，但近年来猪瘟仍有发生，且有增强的趋势。至今尚无特效的药物和治疗方法，疫苗预防仍是我国防治猪瘟的主要手段。我国目前市场上多为活疫苗，但因其免疫期短、离散性大等缺点，所以我们着手对猪瘟兔化弱毒灭活疫苗的研制工作，经过2年的努力，做了大量的实验，终于研制出猪瘟灭活疫苗，其安全性好、无副作用、易吸收、免疫力强、产生抗体快速、稳定而持久。     

猪瘟灭活疫苗抗体消长规律动态研究

本试验采用IHA试验方法,对经猪瘟灭活疫苗免疫的猪抗体产生的水平进行了监测,并对仔猪母源抗体的消长规律进行了研究.结果表明仔猪母源抗体水平与母猪抗体水平呈正相关,其首次免疫抗体增长幅度与母源抗体呈负相关,但其抗体水平与免疫次数呈正相关.主要免疫的抗体效价与免疫剂量呈正相关,而与首免日龄无关.攻毒结果表明:当IHA＜6log2时,仅能抗死亡;当IHA≥7log2时,可抗感染.     

禽流感H5亚型油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用禽流感H5N2亚型毒株接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，经甲醛灭活后与优质矿物油佐荆混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批，接种28日龄非免疫鸡100羽，4天后检测抗体，以后每隔1周或2周采血检测H5亚型HI抗体，并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明，免疫后4天即能检测出抗体，之后逐渐上升，至第5周抗体水平达到高峰且较稳定，然后缓慢下降，110天后抗体降至临界值以下。攻毒结果表明，能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。     

禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(LPAI-H5N2)株HA全基因克隆与序列分析

为进一步分析禽流感病毒(AIV)H5N2分离株血凝素(HA)基因的特性,参照已发表H5亚型禽流感HA基因序列设计了1对引物,采用RT-PCR技术,以禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(D96)RNA为模板,扩增了HA全基因并进行核苷酸同源性比较,氨基酸编码分析,绘制系统发育进化树。结果表明,扩增片段长1737个核苷酸,包含了完整的HA基因的开放阅读框架,与Genbank已发表的H5N1和H5N2分离株的HA基因序列比较,发现与国内H5N1分离株同源性较低,只有80%左右,而与H5N2各株序列具有很高的同源性,最高达97.5%,印证了AIV基因组8个片段间频繁的重组及AIV高变异性的特点。推导的氨基酸序列分析表明,HA蛋白裂解位点上游丢失了4个连续碱性氨基酸(R-R-R-K),裂解位点处氨基酸序列为E-T-R,仅包含一个碱性氨基酸(R-)残基,符合低致病性毒株的特征,证明为低致病性毒株。其HA推导后氨基酸序列与H5N1AIV的同源性接近90%,以其研究的疫苗,可以有效抵御我国流行的H5亚型AIV病毒的感染,同时因为是弱毒株,以其研制的疫苗具有更好的安全性,也更符合公共卫生学的要求。