广西部分地区猪群PEDV N基因克隆及序列分析

【目的】了解广西区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染及病毒的遗传变异特点,为更好防控猪流行性腹泻提供科学依据。【方法】应用RT-PCR方法从2012-2016年广西地区25个猪场收集的PEDV病料中扩增出86株PEDV的N基因,并进行序列比对及遗传进化分析。【结果】86株PEDV的N基因核苷酸同源性为94.2%~100.0%,与参考毒株核苷酸同源性为94.1%~100.0%。N基因遗传进化分析显示广西的PEDV可分为2个群,Cluster2由韩国株DR13、日本株83P-5、中国株CH/S以及本研究的GP35-8、LC37-22、LC107-5、LC107-19和LC107-16毒株组成,其他81株毒株属于Cluster 3,包括中国株DX、LJB-03、Hu N、JS-2004-2;Cluster 1和Cluster 4则由其它参考毒株组成。【结论】PEDV是引起广西规模化猪场新生仔猪腹泻的主要病原,广西地区的PEDV流行毒株可分为2个群且其N基因仍然保守。     

广西不同年龄猪群中2型猪链球菌抗体水平调查分析

为调查规模化猪场不同年龄猪群中2型猪链球菌(S.suis 2)抗体水平,本研究采用以荚膜多糖为抗原的间接ELISA对来自广西地区母猪群、肥猪群、生长猪群共1 908份血清样品进行了S.suis 2抗体检测和分析。结果显示:成年猪群中抗S.suis 2的抗体水平普遍较高,种猪场母猪血清抗体阳性率可高达95%以上,不同地区屠宰场的育肥猪血清抗体阳性率在39.2%~97.5%。对不同日龄仔猪群抗体水平检测分析显示:14日龄~42日龄期间,抗体水平随仔猪日龄的增长而呈逐渐下降的趋势;而42日龄~130日龄期间,抗体水平随日龄的增长而呈逐渐上升的趋势。此外,经产母猪群抗体水平略高于后备母猪群,并且随胎次的增加,抗体的离散度缩小。以上结果表明S.suis 2抗体在仔猪生长阶段的空白期即42日龄时,仔猪群抗体水平最低。因此,在这个阶段和之前做好S.suis的预防和免疫工作对猪群链球菌病的防控至关重要。     

猪瘟病毒广西流行毒株E0基因的克隆与分析

应用RT-PCR方法对猪瘟病毒E0基因进行扩增、克隆及测序,用DNA Star分析软件对6株毒株与猪瘟兔化弱毒苗(HCLV)、石门(Shimen)株、Paderborn株、GXWZ02株的相应片段进行比较分析,构建了CSFV遗传进化树。序列分析表明,广西流行株与HCLV株、Shimen株、Paderborn株、GXWZ02株之间核苷酸的同源性分别为80.8%~81.5%、82.8%~83.3%、93.1%~94.2%、93.7%~94.2%,推导的氨基酸同源性分别为88.3%~89.7%、89.7%~91.1%、96.2%~97.7%、97.7%~99.1%;6株广西CSFV流行毒株与国内外已发表的14株病毒相应序列进行比较,构建遗传进化树,结果表明所比较的20株毒株分为2个基因群,广西流行毒株均属于基因群Ⅱ。本研究成功地对广西流行猪瘟病毒株的E0基因进行了测序分析,表明近年来广西流行毒株未发生较大的变异,但病毒株有远离疫苗株发展的趋势。     

广西猪瘟病毒E0和E2基因的克隆及序列分析

通过分析目前广西猪瘟病毒(CSFV)的E0和E2基因特征,为了解广西地区CSFV的分子流行病学、遗传变异及综合防控提供科学依据。试验采用RT-PCR方法,对阳性猪瘟样品进行CSFV的E0及E2基因的扩增,经克隆、测序后,利用DNAStar软件对序列进行比对分析,同时绘制系统遗传进化树。结果表明,从阳性猪瘟样品中成功扩增CSFV的E0及E2基因。序列比对分析发现,GX2毒株与参考毒株的E0基因核苷酸同源性在83.1%~94.1%,其推导氨基酸同源性在85.9%~99.6%;与参考毒株的E2基因核苷酸同源性为81.7%~93.7%,其推导氨基酸同源性为89.0%~97.0%;E0与E2基因均属于基因Ⅱ群。氨基酸变异位点分析表明,E0蛋白的RNase活性区域氨基酸基序位点没有发生变异;E2蛋白中15个位点上的半胱氨酸均未发生变异,但单抗识别位点S734R发生变异。遗传进化分析显示测定的GX2毒株与近年来广西CSFV流行毒株的变异趋势相似,与中国传统疫苗株HCLV、经典强毒株Shimen的同源性较低,亲缘关系较远,与广西近年来的流行毒株GXWZ02株的同源性较高,亲缘关系较近。     

在农业生产大跃进中的土化肥问题

在总路线的光辉照耀下,全国各地普遍展开积肥造肥运动,对农业增产起了极大的推动作用。     

猪链球菌9型钦州分离株cps9H基因序列分析

根据已发表的猪链球菌9型(SS9)荷兰5218分离株的基因核苷酸序列保守区域,设计一对特异性引物,以SS9钦州分离株抽提的DNA为模板,通过PCR方法扩增cps9H基因片段,并对其进行克隆、测序和分析。结果表明,4株SS9钦州分离株的cps9H目的基因长为389 bp,与已知的7个国内外SS9毒株cps9H基因片段的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,同源性分别为96.7%~100%和91.5%~100%。     

广西鹅γ干扰素基因的克隆与序列分析

为进一步研究鹅干扰素（IFN）的分子生物学特性及抗病毒作用机理,提取经刀豆素（ConA）刺激培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增获得鹅IFN-γ基因,将其克隆至pMD18-T载体并进行序列测定分析。结果表明,克隆获得的广西鹅IFN-γ基因与GenBank上已公布的鹅IFN-γ基因核苷酸序列的同源性均高于99.2%、氨基酸同源性均高于98.2%;与其他动物的IFN-γ基因核苷酸及氨基酸序列比较,亲缘关系越远,同源性越低。     

鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析

[目的]克隆鹅副粘病毒GX1株HN基因与F基因,并进行序列分析。[方法]根据Genbank已发表的鹅副粘病毒GPV-SF02株基因组核苷酸序列设计2对引物,对从广西发病鹅分离到的鹅副粘病毒毒GX1株的HN和F基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。[结果]该株副粘病毒株的HN基因和F基因核苷酸序列全长分别为1 716和1 662 bp,与GPV-SF02株的同源性均在97.3%左右,与LaSota株、F48E9株、JS株的同源性为80.3%~97.5%,与M iyadera株的同源性仅84.8%。[结论]分离株GX1株与禽Ⅰ型副粘病毒(A PMV-1)强毒株特征相符,属于A PMV-1基因Ⅶ型。     

广西猪伪狂犬病的流行情况和防治对策

猪伪狂犬病是由疱疹病毒引起以发热、奇痒、脑脊髓炎为特征的猪的急性传染病，新生仔猪表现为高热及神经症状；成年猪常隐性感染，而长期带毒；妊娠母猪以繁殖障碍为主。本病最早于１８１３年发生在美国，１９０２年首次由匈牙利学者Ａｕｊｅｓｚｋｙ进行描述和报道，此后...     

广西猪链球菌2型药物防治及疫苗保护试验

用广西猪链球菌2型强毒株GX01、GX02分别以菌量1.92×108CFU及2.80×109CFU接种猪链球菌2型商品疫苗免疫猪、北里霉素预防猪及对照猪进行药物防治及疫苗保护试验。结果对照猪72h内全部死亡,从死亡猪分离到的细菌应用建立的3重PCR检测方法检测及序列分离证实为GX01、GX02;而疫苗免疫猪、北里霉素预防猪攻毒15d后仍存活,经活体采扁桃体分离、检测,猪链球菌2型阴性。猪链球菌2型商品疫苗及北里霉素对广西猪链球菌2型强毒株具有很好的预防效果。