EBV—LMP对人高分化鼻咽癌细胞株（CNE1）体外增殖能力的影响

目的：探讨ＥＢＶ－ＬＭＰ对人高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１增殖能力的影响。方法：以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照。用细胞体外增殖实验、细胞软琼脂克隆形成率测定、流式细胞仪测定各细胞周期和细胞ＰＣＮＡ的检测,观察细胞增殖能力的变化。结果：体外细胞增殖实验,Ａ比值实验组（２．８６±０．１２）显     

EBV-LMP对人高分化鼻咽癌细胞株(CNE1)体外增殖能力的影响

目的：探讨ＥＢＶ－ＬＭＰ对人高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１增殖能力的影响。方法：以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照。用细胞体外增殖实验、细胞软琼脂克隆形成率测定、流式细胞仪测定各细胞周期和细胞ＰＣＮＡ的检测,观察细胞增殖能力的变化。结果：体外细胞增殖实验,Ａ比值实验组（２．８６±０．１２）显著高于空白组（１．６２±０．０５）及阴性对照组（１．３８±０．０３）（Ｐ＜０．０１）;实验组细胞软琼脂克隆形成率（２５．２％）显著高于空白组（１１．２％）及阴性对照组（１３．４％）（Ｐ＜０．０１）;ＦＣＭ法测定细胞周期,实验组Ｓ期细胞（３４．９％）高于空白组（２６．２％）及阴性对照组（３０．８％）;ＰＣＮＡ免疫组化染色,实验组细胞ＰＣＮＡ阳性率（８４．６％）明显高于空白组（６１．１％）及阴性对照组（６７．２％）（Ｐ＜０．０１）。结论：ＥＢＶ－ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞体外增殖能力有明显的促进作用,提示ＬＭＰ在ＮＰＣ细胞演进过程中可能起重要作用     

电穿孔技术在EBV—LMP表达质粒转染人鼻咽癌细胞中的应用

目的：观察人鼻咽癌细胞用电穿孔技术进行体外基因转染所需的转染电击条件ＥＢＶ－ＬＭＰ基因的转染表达。方法：以人高分化鼻咽癌细胞株（ＥＮＥ１）为对象，用电穿孔基因转染技术，观察不同电压及电容条件电击癌细胞对基存活率的影响；将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞，以载体质粒转染及未经转染的ＣＮＥ１细胞为对照。结果：ＣＮＥ１癌细胞存活率与电容及电压值的大小成反比。ＣＮＥ１细胞转染较合适条件是电压值６     

Staurosporine 对人低分化鼻咽癌细胞系细胞周期和 DNA 倍体含量影响的动态观察

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡时,对细胞周期的选择性和对ＤＮＡ含量及细胞周期的动态影响。方法：以ＰＫＣ催化区抑制剂ＳＴ作用于ＣＮＥ－２Ｚ细胞不同时间后,收集细胞进行ＰＩ染色和流式细胞仪检测。结果：ＳＴ以２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ终浓度分别作用至３,６,１２,２４ｈ后,发现Ｇ２期百分比分别为３０．４３±７．１６、３０．８３±６．２５、４２．４３±３．９８和７１．８０±７．５５,均较对照组１２．０８±３．４９增高明显。比较差异有显著性（Ｐ＜０．０１）;而Ｇ１期在３,６,１２,２４ｈ分别为３４．７０±１．５６,３７．０３±６．４７,１６．６３±１．７７和１５．３０±５．４６,均较对照组６２．５６±６．５７明显降低,比较差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。亚二倍体峰百分比在１２、２４ｈ分别为３７．１０±７．２１和４３．７２±６．７３,均较对照组９．８１±１．７８显著增加（Ｐ＜０．０１）;而１２ｈ以前该峰增加不明显。结论：ＳＴ在终浓度为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞至１２ｈ后即可出现明显的ＤＮＡ含量降低的凋亡细胞,对Ｇ２期细胞敏感而使之逐渐阻滞,且存在     

EB病毒感染体外培养人胚鼻咽上皮细胞对c—myc和p53表达的 …

目的：观察体外培养人胚鼻咽上皮（ＨＥＮＥ）被ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染后，ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３表达的变化，以探讨ＥＢＶ和这些癌基因在鼻咽癌发生发展中可能起的作用，方法：体外培养的人胚鼻咽上皮用ＥＢＶ或ＥＢＶ加ＴＰＡ感染（简称Ｅ和ＥＴ组）分别用抗体补体免疫法（ＡＣＩＦ）和碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）检测ＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）及癌基因ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３的表达。结果：体外培养１０例人胚鼻咽上皮细胞     

用ELISA检测传染性囊病病毒诱导的细胞凋亡

用５株传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）分别感染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测,试验结果显示,接毒组与对照组细胞的ＤＮＡ在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测各组细胞中降解ＤＮＡ量,发现感染ＩＢＤＶ７ｈ后,接毒组细胞降解ＤＮＡ量比对照组明显增加,且各接毒组间降解ＤＮＡ量有一定的差异,试验结果表明：各株ＩＢＤＶ均诱导ＣＥＦ发生细胞     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２－ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

蛋白激酶C在鼻咽癌细胞生长中的作用

通过耗竭蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ），用ＰＫＣ抑制剂和激活剂等方法，观察ＰＫＣ在鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ生长中的作用。发现：随ＴＰＡ浓度增大，细胞ＰＫＣ含量降低，生长指数也逐渐减少；作用于ＰＫＣ蛋白催化区的ＰＫＣ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）与作用于调节区的抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）均抑制ＣＮＥ－２Ｚ细胞的生长，最低有效浓度分别为２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ与１０－５ｍｏｌ／Ｌ，随浓度增大而作用增强；ＰＫＣ刺激剂ＯＡＧ（０．１～１００μｇ／ｍｌ）单独作用时对ＣＮＥ－２Ｚ的生长无明显影响，但４μｇ／ｍｌ可基本阻断ＳＴ或ＳＳ最低有效浓度的抑制效应。提示：ＰＫＣ在鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ生长中起重要作用，阻断ＰＫＣ的作用将为鼻咽癌的防治提供新的途径。     

传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡,免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价,并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外,还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率;（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产     

蛋白激酶C抑制剂对CNE—2Z细胞周期的影响

目的：蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡时细胞周期的观察。方法：ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），终浓度分别为１×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ，诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞２４ｈ，用流式细胞仪（ＲＣＭ）分析。结果：诱导组细胞周期与对照组比较，ＳＴ使细胞Ｇ１和Ｓ期明显减少及Ｇ２期明显增加，（Ｐ〈０．０１），ＳＳ使     

蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：观察蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法测定两种药物分别处理CNE－1、CNE－2Z两株细胞的IC5值随作用时间的延长而减少（P＜0．01），两种药物处理CNE－1细胞24、48h的IC50值均明显低于CNE－2Z细胞（P＜0．01），蝙蝠葛碱处理两株细胞72h的IC50值差异显著（P＜0．05）。结论：蝙蝠葛碱和胡椒碱对CNE－1、CNE－2Z细胞株的生长增殖呈时间依赖性抑制，对CNE－1细胞株的增殖抑制作用明显强于CNE－2Z细胞株。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂系统在鼻咽癌细胞系及其两个克隆株中的表达和意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统3种主要成分(uPA、uPAR、PAI—1)在一鼻咽癌细胞系(CEN—2Z)及其它的两个克隆株(CNE—2Z—H5、CNE—2Z—H5—9)中的作用。方法：应用逆转录聚合酶反应(RT—PCR)方法检测uPA系统各因子在基因转录水平的表达。结果：uPA，uPARmRNA在CNE—2Z—H5—9中表达最高，在CNE—2Z中表达最低；PAI—1mRNA在CNE—2Z—H5—9中无表达，在CNE—2Z，CNE—2Z—H5有表达，但差异无显若性。结论：uPA、uPAR可能促进鼻咽癌细胞侵袭、转移，PAI—1可能起抑制作用。     

PDTC和顺铂对人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE-GL、CNE2Z的联合作用

目的观察PDTC和顺铂（DD）对人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE1-GL、CNE2Z的联合抑制效应。方法单独及联合应用PDTC和DDP处理后,采用MTT法测定CNE1、CNE1-GL、CNE2Z细胞的生长抑制效应。采用直线回归法求出中效浓度,利用中效原理计算联合用药指数。结果在实验剂量范围内,单独及联合应用PDTC和DDP的生长抑制效应具有剂量依赖性。对CNE1细胞,药物效应（抑制率）大于85%时,具有协同作用（CI〈l）;对CNE1-GL、CNE2Z细胞,两药合用具有拮抗作用。结论单独及联合应用PDTC和DDP对CNE1、CNE1-GL、CNE2Z具有生长抑制作用,两药联用对CNE1细胞具有协同作用。     

Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞的影响

目的：探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl-xL反义寡核苷酸进入CNE－2Z细胞的影响。方法：采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸转染CNE－2Z细胞，应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE－2Z增殖的影响；RT－PCR检测处理前后bcl-xL mRNA表达水平。结果：Lipofectin介导bcl-xl反义核酸可提高反义核酸对细胞的增殖抑制率；Lipofectin介导bcl-xL反义核酸可增强反义核酸下调bcl-xL mRNA表达水平的能力。结论：Lipofectin可促进反义核酸转染进入细胞。     

顺铂对鼻咽癌细胞株端粒酶活性和凋亡的影响

目的：研究抗癌药顺铂对5株鼻咽癌细胞端粒酶活性和凋亡的影响．以探讨端粒酶活性水平与鼻咽癌的关系及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制，为端粒酶可能成为一种很好的鼻咽癌治疗靶点提供实验依据。方法：用TRAP—ELISA的方法定量检测5株鼻咽癌细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平，观察细胞形态及生长状态．以流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果：5株鼻咽癌细胞端粒酶均呈阳性，其中LTRs—LMP细胞株端粒酶活性水平最高，高分化细胞株CNE—1端粒酶活性水平低于低分化细胞株CNE—2Z、HNE—2。经顺铂处理后5株鼻咽癌细胞端粒酶活性明显受抑制、细胞形态发生明显改变，出现细胞凋亡。结论：端粒酶的活化与鼻咽癌密切相关。临床常用化疗药物顺铂可能是通过在S期抑制端粒酶活性并诱导鼻咽癌细胞凋亡而发挥杭癌作用的。因此我们认为端粒酶可以作为鼻咽癌的一个治疗靶点。     

鼻咽癌细胞株CNE1转染EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)后对放射敏感性的影响

目的：研究EB病参LMP1对鼻咽癌高分化细胞株CNE1放射敏感性的影响。方法：用电转染技术将带有EB病毒LMP1基因的真核表达质粒导入鼻咽癌高分化细胞株CNEl，用免疫组化法及Western blot检测LMPl的表达；LMP1对CNEl细胞放射敏感性的影响采用^60钴治疗仪照射后集落形成实验进行观察。结果：CNE1细胞抹转染LMP1基因后LMPl蛋白呈阳性表达，对照放射敏感性比未转染株的细胞存活事低(P＜0．01)。结论：LMPl能增加鼻咽癌细胞的放射敏感性，这种作用可能与LMP1的促细胞转化，抑分化有关。     

bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达

目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。     

Immortalization of human T lymphocytes after transfection of Epstein-Barr virus DNA

Epstein-Barr virus (EBV), a ubiquitous human herpesvirus, has the ability to transform human B lymphocytes. No other cell type has been experimentally transformed by EBV, either by intact virions or naked viral DNA and subgenomic fragments. Two immortalized human T-lymphoblastoid cell lines have now been established by transfecting cord blood lymphocytes with purified B95-8 viral DNA enclosed in fusogenic Sendai virus envelopes (RSVE) and then exposing the cells to EBV from a P3HR-1 cell subclone. One of these lines, which has been fully characterized, is termed HBD-1. This line is positive for EBV DNA and expresses surface OKT11, OKT4, and Tac receptors, but not M-1, mu immunoglobulin chains, EBV receptors, or B-1 surface markers. The cells contain fully rearranged T-cell receptor genes and germline immunoglobulin genes. The karyotype of the cells is normal, they do not require interleukin-2 for growth, and do not contain human T-lymphotropic virus type I. However, the HBD-1 cells contain incomplete EBV genomes and express several EBV-determined antigens, including the early antigen type D, membrane antigens, but not EBV-determined nuclear antigen (EBNA). This association of the EBV genome with permanently growing hematopoietic cells of non B-cell lineage should prove useful in studies on the mechanism of EBV-mediated cell transformation.     

Epstein-Barr viral DNA: infectivity for human placental cells

Purified DNA of Epstein-Barr virus (EBV) is regularly infectious by means of the "calcium" method of transfection. Cultured human placental cells exposed to EBV DNA of two transforming strains, FF41 and B95, produce virus that is capable of converting normal B lymphocytes into established cell lines. After treatment with EBV (FF41) DNA and EBV (HR-1) DNA the placental cells display antigens associated with the productive viral cycle. The placental cells have not developed foci or other signs of morphologic transformation.     

鼻咽癌高淋巴道转移裸鼠移植瘤的细胞遗传学研究

研究鼻咽癌克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５高淋巴道转移裸鼠移植瘤离体培养细胞的细胞遗传学改变并探讨这种改变与肿瘤生物学特性之间的关系。方法染色体Ｇ显带后按人类细胞遗传学国际命名体制进行核型分析。