氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响。方法密度梯度离心法获取人脐静脉血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度氧化型低密度脂蛋白(分别为5、10及20mg/L)干预48h。MTT法检测氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测氧化型低密度脂蛋白对细胞凋亡率的影响,逆转录聚台酶链反应检测bcl-2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测bcl-2蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性抑制内皮祖细胞增殖,诱导内皮祖细胞凋亡(P<0.01);基础状态下内皮祖细胞表达bcl-2mRNA及蛋白,氧化型低密度脂蛋白处理能抑制其表达,并存在量效关系(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白通过下调bcl-2的表达诱导内皮祖细胞凋亡、抑制内皮祖细胞增殖,这可能影响血管内皮的修复及新生血管的形成。     

阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响

目的观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响。方法用50mg/L氧化型低密度脂蛋白与不同浓度的阿托伐他汀(0、0.312、1.25和5μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24h,以空白组作对照,用液体闪烁计数法检测细胞[3H]胆固醇流入情况,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,逆转录聚合酶链反应与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36mRNA和蛋白的表达。结果阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞胆固醇流入减少,对照组胆固醇流入为35.90%±2.36%,0、0.312、1.25和5μmol/L阿托伐他汀组胆固醇流入分别为47.10%±3.18%、41.20%±2.88%、35.10%±2.35%和28.30%±1.98%;阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,油红O染色可见氧化型低密度脂蛋白 阿托伐他汀组细胞内脂滴较氧化型低密度脂蛋白组明显减少,且脂滴颗粒体积变小;高效液相色谱分析发现,对照组细胞总胆固醇含量为78.24±11.35mg/g,0、0.312、1.25和5μmol/L阿托伐他汀组细胞总胆固醇含量分别为123.13±15.92mg/g、115.36±13.18mg/g、107.52±12.05mg/g和98.03±10.24mg/g。阿托伐他汀使氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36mRNA和蛋白的表达下调。结论阿托伐他汀引起氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36表达下调,并使脂质蓄积减少。     

白细胞介素10对巨噬细胞源泡沫细胞趋化因子表达的影响

目的探讨白细胞介素10对单核-巨噬细胞源性泡沫细胞转化过程中趋化因子表达的影响及其机制。方法以佛波醇酯诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞，在氧化型低密度脂蛋白作用下形成泡沫细胞，同时给予白细胞介素10干预，采用逆转录聚合酶链反应和凝胶阻滞试验研究单核细胞趋化蛋白1、巨噬细胞炎性蛋白5、白细胞介素8mRNA的表达变化及白细胞介素10对核因子KB活性的影响。结果在白细胞介素10作用下，泡沫细胞中单核细胞趋化蛋白1和巨噬细胞炎性蛋白5mRNA相对表达量均显著降低，且与作用时间成正相关，而白细胞介素8相对表达量变化不明显。同时白细胞介素10能显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的核因子KB活化。结论白细胞介素10选择性抑制单核-巨噬细胞源性泡沫细胞形成中趋化因子mRNA的表达与有效地抑制核因子KB活性密切相关。这对降低炎症反应。减少泡沫细胞形成，延缓动脉粥样斑块形成具有重要意义。     

山茱萸多糖对脑微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

采用氧化性低密度脂蛋白（ox LDL）刺激小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3，建立内皮细胞氧化损伤模型，通过瑞氏染色观察细胞形态变化，利用试剂盒检测细胞上清液中内皮细胞损伤相关的一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和内皮素-1（ET-1）变化，采用Western blot法检测与内皮细胞凋亡相关的Bax、Bcl-2、caspase3表达变化，系统分析山茱萸多糖对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3氧化损伤的保护作用。结果表明经过山茱萸多糖处理后的ox LDL刺激bEnd.3细胞形态逐渐恢复，细胞上清液中ET 1和MDA显著含量下降（P<0.01），NO和SOD含量上升（P<0.01）；凋亡抑制蛋白Bcl 2表达升高，促凋亡蛋白Bax和caspase3表达下降。说明山茱萸多糖能够在一定程度上保护ox LDL引发的内皮细胞氧化损伤。     

猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的克隆与表达

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是引起断奶后仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原.笔者用PCR方法扩增PCV2截短的ORF2基因并亚克隆至表达载体pGEX-6P-1,构建的重组表达质粒命名为pGEX-ORF2,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃经IPTG诱导4h.PCV2的cap蛋白以包涵体形式得到有效表达.经SDS-PAGE及Western blot分析表明表达的重组蛋白分子量约为46KD,重组蛋白具有良好的免疫学活性.     

青岛农业大学中韩食品生物技术研究所——新型功能食品的研究与开发

预防动脉粥样硬化功能食品的开发 近年来心血管疾病--尤其是动脉粥样硬化已经跃居疾病谱的前列,成为影响人们生活质量的主要问题.在动脉硬化病变的形成及发展过程中,氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)发挥着极其重要的作用.研究表明,氧化修饰低密度脂蛋白(Ox-LDL)与单核巨噬细胞的相互作用是粥样斑块中的泡沫细胞形成的重要机制,血液中Ox-LDL浓度升高是导致动脉粥样硬化的直接原因.     

猪细环病毒1型衣壳蛋白的原核表达及鉴定

为了制备猪细环病毒1型(TTSuV1)抗体,并为建立TTSuV1免疫学检测方法奠定基础。用PCR技术扩增TTSuV1衣壳蛋白(Cap)基因片段,与载体pET-32a定向连接,构建重组原核表达质粒pET-32a-Cap,转化入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导重组阳性菌表达,SDS-PAGE研究融合蛋白表达情况。对重组融合蛋白进行纯化、复性后,免疫BALB/c小鼠4次来制备鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体。分别以鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体和TTSuV1猪阳性血清为一抗,对重组融合蛋白进行免疫印迹检测。结果显示,成功表达了TTSuV1Cap截短体融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在,重组蛋白可与鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体及TTSuV1猪阳性血清发生特异性结合,表明表达的TTSuV1-Cap融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。     

低密度脂蛋白受体基因表达调控研究

低密度脂蛋白受体(LDLR)调节体内胆固醇的平衡是通过其启动区的固醇调节元件(SRE)感受体内胆固醇的变化,从而调控LDLR基因的表达来实现的。胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)、SREBP裂解蛋白(SCAP)参与这一调节。LDLR基因的表达还受到HMG-CoA还原酶抑制剂、激素、细胞生长因子等因素的影响。     

人组织激肽释放酶在Pichia pastoris酵母中的表达

通过将人组织激肽释放酶(hKLK1)原编码序列克隆入Pichia pastoris酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-KLK1.分别用Sal Ⅰ及Bgl Ⅱ酶切线性化后电转化酵母菌株GS115,经MD平板及含不同抗性浓度G418的YPD平板上培养筛选,获得抗3 mg/ml G418 Mut+型分泌表达hKLK1的重组酵母菌4株,抗1 mg/mlG418 Muts型分泌表达hKLK1的酵母菌3株.酶活性测定数据表明:高拷贝转化子重组蛋白表达量高于低拷贝转化子;Mut+型转化子重组蛋白表达量高于Muts型转化子;且当甲醇诱导体积分数为2%时,重组蛋白的表达量最高.进一步的Western-blotting分析证明,表达的重组hKLK1分子质量正确,能被特异的抗体识别.     

表达PCV2 Cap蛋白重组杆状病毒对小鼠的保护力试验

PCR扩增猪圆环病毒2型(PCV2)的衣壳蛋白(Capsid)基因,鉴定后克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastBac-Cap,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,经转座作用,蓝白菌落筛选得到含cap基因的重组穿梭载体Bacmid-Cap,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒reBacCap,PCR能够扩增出相应大小的片段,间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使reBac-Cap感染的Sf9昆虫细胞出现特异性绿色荧光,表明reBac-Cap在Sf9细胞中成功表达PCV2-Cap蛋白.动物试验表明该重组病毒对小鼠有一定的保护力.     

Immunoassay of plasma low-density lipoproteins

An immunoassay was developed for determining the concentration of the protein moiety of the low-density lipoproteins of human plasma. The concentration of this protein in the plasma was variable; it was higher than normal on the average in patients with familial hyperbetalipoproteinemia (type II) and endogenous hyperlipemia (type IV) and lower than normal in patients with fat-induced (type I) and mixed (type V) hyperlipemia. Patients with endogenous hyperlipemia were separable by the immunoassay into those with normal and those with supernormal low-density lipoprotein protein concentration.     

水稻种子成熟和萌发过程中脂氧合酶同工酶活性及其表达水平

水稻种子中有3种脂氧合酶（LOX）同工酶,分别为LOX-1、LOX-2、LOX-3。以本实验室筛选到的LOX-3缺失突变体北陆PL2和正常的水稻品种Koshihikari为材料,研究种子成熟及萌发过程中LOX活性的变化规律。结果显示,2个水稻品种在种子成熟中LOX活性变化规律不一致,Koshihikari开花后10～25d活性升高,以后趋于下降,而北陆PL2花后种子LOX活性基本没有变化;在种子萌发过程中两品种LOX活性变化规律基本一致,萌发初期活性迅速升高,浸水萌发后2d达到峰值,以后开始下降。同工酶分析、半定量RT-PCR结果都显示,在水稻成熟过程中,种子中LOX-3活性和表达水平都显著高于其他两种酶（LOX-1和LOX-2）;在种子萌发过程中,LOX-2活性和表达水平占优势,而LOX-1在种子成熟和萌发过程中都显示较低的活性和表达水平。这表明,水稻种子LOX-3可能与水稻的贮藏特性有关,LOX-2在水稻萌发过程中起主要作用,可能与水稻萌发期间储藏脂质的利用有关或者具有萌发信号的作用,而LOX-1的功能还有待进一步研究。     

红松仁蛋白对实验小鼠血脂代谢的影响

利用高脂饲料建立实验小鼠模型,然后灌胃不同剂量的红松仁蛋白,4周后检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量.结果表明,红松仁蛋白能明显降低肥胖小鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量,升高HDL-C的含量,红松仁蛋白对肥胖小鼠具有降血脂的作用.     

水稻脂质氧化酶同工酶种质储藏特性的研究

对水稻脂质氧化酶(LOX)同工酶缺失的单体及聚合体人工老化实验研究表明:不同LOX的缺失突变体之间,以LOX-1,LOX-2、LOX-3全缺的D1308、D1311的发芽率始终最高,老化指数最低;LOX-1缺失所造成的影响要大于LOX-2缺失和LOX-3缺失。LOX缺失的单体及聚合体具有较好的储藏特性,LOX的缺失对保持种子生活力和延缓稻谷陈化变质具有重要的作用。进一步的分析认为LOX-1的缺失阻断或延缓了LOX-2和LOX-3所启动的脂质过氧化反应,从而延缓了稻谷的陈化变质,减轻种子生活力的下降。LOX-1可能是控制稻谷陈化变质和种子衰老的关键基因。     

Coordinated nonvectorial folding in a newly synthesized multidomain protein

The low-density lipoprotein receptor (LDL-R) is a typical example of a multidomain protein, for which in vivo folding is assumed to occur vectorially from the amino terminus to the carboxyl terminus. Using a pulse-chase approach in intact cells, we found instead that newly synthesized LDL-R molecules folded by way of "collapsed" intermediates that contained non-native disulfide bonds between distant cysteines. The most amino-terminal domain acquired its native conformation late in folding instead of during synthesis. Thus, productive LDL-R folding in a cell is not vectorial but is mostly posttranslational, and involves transient long-range non-native disulfide bonds that are isomerized into native short-range cysteine pairs.     

一例外伤感染东北虎血液生理生化指标的测定

对阳泉市动物园一只受伤的圈养成年雄性东北虎血液生理生化指标进行了测定,共测定68个项目值,其中凝血酶原时间、国际标准化比率、纤维蛋白原、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白AI、载脂蛋白B、载脂A/载脂B、超敏C反应蛋白、抗链0、β2微球蛋白、胱抑素C、类风湿因子等数据为该试验首次报道;球蛋白、单核细胞等项目数值变化较大,与外伤感染关系密切。此次测定为诊断和治疗提供了依据,充实了东北虎血液学数据,同时为东北虎的研究和保护提供了资料和参考。     

LRP: role in vascular wall integrity and protection from atherosclerosis

Vascular smooth muscle cell (SMC) proliferation and migration are important events in the development of atherosclerosis. The low-density lipoprotein receptor-related protein (LRP1) mediates suppression of SMC migration induced by platelet-derived growth factor (PDGF). Here we show that LRP1 forms a complex with the PDGF receptor (PDGFR). Inactivation of LRP1 in vascular SMCs of mice causes PDGFR overexpression and abnormal activation of PDGFR signaling, resulting in disruption of the elastic layer, SMC proliferation, aneurysm formation, and marked susceptibility to cholesterol-induced atherosclerosis. The development of these abnormalities was reduced by treatment with Gleevec, an inhibitor of PDGF signaling. Thus, LRP1 has a pivotal role in protecting vascular wall integrity and preventing atherosclerosis by controlling PDGFR activation.     

Three-dimensional structure of the LDL receptor-binding domain of human apolipoprotein E

Human apolipoprotein E, a blood plasma protein, mediates the transport and uptake of cholesterol and lipid by way of its high affinity interaction with different cellular receptors, including the low-density lipoprotein (LDL) receptor. The three-dimensional structure of the LDL receptor-binding domain of apoE has been determined at 2.5 angstrom resolution by x-ray crystallography. The protein forms an unusually elongated (65 angstroms) four-helix bundle, with the helices apparently stabilized by a tightly packed hydrophobic core that includes leucine zipper-type interactions and by numerous salt bridges on the mostly charged surface. Basic amino acids important for LDL receptor binding are clustered into a surface patch on one long helix. This structure provides the basis for understanding the behavior of naturally occurring mutants that can lead to atherosclerosis.     

脂肪氧化酶同工酶对水稻种胚脂质代谢的影响

[目的]研究脂肪氧化酶同工酶对水稻种胚脂质代谢的影响。[方法]对LOX-1和LOX-2缺失品种皖鉴2090以及LOX-3缺失品种冲腿和正常品种汕优63的种子进行人工加速老化处理,研究不同脂肪氧化酶同工酶缺失水稻种子游离脂肪酸和脂质过氧化产物的变化。[结果]种子老化处理期间,皖鉴2090的游离脂肪酸含量低于冲腿和汕优63,其增加速率慢于冲腿和汕优63;多聚不饱和脂肪酸含量始终较高,其降低速率慢于冲腿与汕优63;丙二醛含量始终最低,其增加速率最慢。冲腿的游离脂肪酸增加速率、多聚不饱和脂肪酸降低速率均介于皖鉴2090和汕优63之间。[结论]LOX-1、LOX-2缺失可降低水稻种子脂质过氧化水平和过氧化速率,LOX-3缺失可减轻水稻种子脂质过氧化水平。     

银杏叶提取物对断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能的影响

【目的】研究银杏叶提取物（EGB）对断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能的影响。【方法】将160头25日龄的“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组4个重复,每重复10头。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2、3、4组分别饲喂在基础日粮中添加质量分数0.1%,0.2%和0.3% EGB的试验日粮。试验期为28 d,分别于第14和28天采集血样,测定断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能指标。【结果】与对照组相比,日粮中添加质量分数0.2%,0.3% EGB可显著降低断奶仔猪血清甘油三酯含量（P＜0.05）,显著提高血清球蛋白含量（P＜0.05）;添加质量分数0.1%,0.2% EGB,总体上可显著提高断奶仔猪血清总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性和总抗氧化能力（P＜0.05）,显著降低血清丙二醛和一氧化氮含量（P＜0.05）。另外,与对照组相比,日粮中添加EGB使断奶仔猪血清高密度脂蛋白胆固醇和总蛋白含量呈增加趋势,血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量呈降低趋势。【结论】断奶仔猪日粮中添加质量分数0.2% EGB效果最佳,此时EGB可降低断奶仔猪血脂含量,提高血清球蛋白水平和抗氧化能力。