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1.
猪流行性腹泻病毒(PEDV)是冠状病毒科甲型冠状病毒属的一种有囊膜的单股正链RNA病毒,对全世界养猪业造成了巨大的损失。PEDV与宿主之间的致病机制和免疫调节相互作用仍不清楚。有研究表明冠状病毒可以诱导细胞发生自噬,并且与病毒的复制有着密切的联系,病毒与细胞自噬之间的关系十分复杂,虽然病毒感染与细胞自噬之间的关系研究比较广泛,但细胞自噬在PEDV感染中的作用报道较少。研究PEDV与细胞自噬的相互作用可以加速对PEDV感染入侵机制的理解,为未来研究病毒治疗和抗病毒药物提供新的思路。 相似文献
2.
旨在制备鸡Toll样受体15(ChTLR15)的特异性单克隆抗体(mAb),并初步应用。利用PCR技术扩增ChTLR15第162-386位氨基酸,克隆于载体pET-30a中进行诱导表达,获得高纯度的重组ChTLR15(162-386 aa)蛋白。然后采用皮下多点注射方式将ChTLR15免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,常规获得针对ChTLR15蛋白的单克隆抗体。运用原核表达系统对ChTLR15基因进行截短表达,对单克隆抗体针对的ChTLR15抗原表位进行鉴定。利用6C7株单克隆抗体以激光共聚焦显微技术对鸡HD11细胞进行定位,同时,利用免疫组化技术确定ChTLR15在鸡部分组织中的分布情况。结果表明:成功构建重组质粒pET-30a-ChTLR15(162-386 aa),经IPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约26 ku的重组蛋白ChTLR15(162-386 aa)。方阵试验表明,最适血清稀释度为1:6 400,最适抗原包被浓度为0.35 μg·mL-1。采用有限稀释法进行4轮筛选,最终获得4株针对ChTLR15蛋白的单克隆抗体,将其以2G4、6C7、6D10、7C4进行命名。2G4与6C7的亚类为IgG2a,6D10与7C4的亚类为IgG1。Western blot结果显示,4株单抗均能与ChTLR15发生特异性反应,而不与其他受检蛋白反应。运用原核表达系统对ChTLR15(162-386 aa)进行截短表达,对ChTLR15单克隆抗体的抗原表位进行鉴定。结果显示,单抗2G4与7C4识别的抗原表位为230QLGTVLEF237,6C7与6D10识别的抗原表位为245EMDLLS250。细胞定位结果显示,ChTLR15蛋白位于细胞表面。免疫组化结果显示,健康对照鸡肝、脾、肺、肾均有微弱阳性染色,禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)感染鸡肝、脾、肺、肾阳性染色有所增强。本研究通过淋巴细胞杂交瘤技术成功获得4株抗ChTLR15蛋白的单克隆抗体,通过截短免疫原蛋白法对其识别的线性表位进行鉴定,可用于进一步研究ChTLR15的结构与功能,为后续信号通路、免疫机理、疫苗研发等相关领域的研究提供了有力工具。 相似文献
3.
禽大肠杆菌病的研究进展 总被引:9,自引:0,他引:9
大肠埃希氏杆菌是家禽最常见的病原菌之一,可引起家禽胚胎死亡、脐炎、败血症、肉芽肿、卵黄性腹膜炎和全眼球炎等一系列表现,给养禽业造成严重的经济损失。笔者在承担国家自然科学基金项目“禽病原性大肠杆菌外膜蛋白型与免疫保护关系的研究”和‘噙源性大肠杆菌分离株致病机理的研究”的基础上,近年来对该病的流行病学、病原的遗传相关性、免疫特性及免疫保护机理等进行了研究,现将部分内容介绍如下。一、流行病学研究有关禽大肠杆菌病流行病学的研究,国内已有不少报道。从这些报道看,我国分离到的禽源性大肠杆菌的血清型众多,且不… 相似文献
4.
某大型鸡场鸡大肠杆菌病流行病学调查 总被引:3,自引:1,他引:2
某大型鸡场的28个分场分离到的菌株,经生化检验为大肠杆菌的有87株,经O血清测定定型65株,4株自凝,18株未能定型,其中O78占20株,O1占14株,O2占5株,这些分离株中O78、O1、O2有39株占定型菌株的60.0%,因此可以认定O78、O1和O2为该大型鸡场的优势血清型,以不同场分离的菌株,以每分离株10^7菌落形成单位(CFU)细菌气管接种1日龄易感鸡,根据接种后7天内发生死亡和病变鸡的比例,确定出高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.36%、8.05%和4.59%。 相似文献
5.
实验性鸡大肠杆菌病病理学动态变化 总被引:8,自引:2,他引:6
用致病性大肠杆菌O18分离株和/或低致病性禽流感病毒(Mildly pathogenic avian influenza virus ,MPAIV)接种10-12日龄SPF鸡。在接种后1-96h进行临床症状与大体病理变化、组织学观察发现:大肠杆菌接种组、MPAIV接种组和健康接种组除扑杀鸡外未见鸡死亡,MPAIV与大肠杆菌混合接种组除扑杀鸡外死亡率为24%。混合接种组的病变比大肠杆菌接种组出现的时间早,恢复也慢,各脏器的病理变化更严重。MPAIV主要引起各实质器官的坏死,结果表明,大肠杆菌经气管内接种后试验鸡主要表现为呼吸道的炎症反应;MPAVI可使鸡大肠杆菌病严重化。 相似文献
6.
7.
8.
9.
江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查 总被引:2,自引:0,他引:2
应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看,以9~11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.12%。通过流行病学调查,表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测,结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。 相似文献
10.
猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫组化试验中的初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了具有免疫原性的融合蛋白。以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,共获得8株能够稳定分泌针对PCV3 Cap蛋白的MAb杂交瘤细胞株。Western blot与IFA试验结果显示,8株MAbs均能够与真核表达的重组Cap蛋白反应。选取3株杂交瘤细胞制备3株MAbs,小鼠腹水效价分别为1∶409 600、1∶204 800和1∶409 600。利用3株MAbs对自然感染PCV3临床病猪的腹股沟淋巴结进行IHC检测,结果显示3株MAbs的腹水均能够与感染PCV3的临床样品发生特异性的免疫反应。本研究制备的MAbs具有较好的特异性,为深入研究Cap蛋白的结构和PCV3快速诊断奠定了基础。 相似文献