人源H3N2亚型猪流感重组病毒的分离鉴定及全基因序列分析

本研究由疑似猪流感病料样品中分离一株病毒,通过HA、HI、电镜观察、生物学特性测定及全基因序列测定表明,分离病毒株为H3N2亚型人流感病毒和H1N1亚型古典猪流感病毒(SIV)的重组体,命名为A/Swine/Fujian/F2/07(H3N2).该分离株含有8个基因片段,共13 442 bp,与GenBank中登录的H3N2亚型人流感病毒、H1N1亚型古典SIV和H3N2亚型SIV进行比较分析显示:分离株的HA、NS、NA基因与H3N2亚型人流感病毒株的同源性分别为84.7 ％～98.1％、94.4 ％～99.5％和88.6 ％～97.6％;与H3N2亚型SIV的核苷酸同源性分别为87.7％～98.5％、82.5 ％～99.9％和87.6 ％～98.4％;M基因与H3N2亚型人流感病毒和SIV的同源性均在90.1％以下,而与H1N1亚型古典SIV的同源性在97.6％以上.基因型分析表明分离株的PB2、PBI、PA、HA、NP、NA和NS基因片段来源于1975年～1982年的人流感病毒,而M基因来源于H1N1亚型古典SIV,充分证明猪作为流感病毒“混合器”的作用.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫苗安全性和免疫原性测定

选用猪繁殖与呼吸综合征病毒福建分离株(PRRSV Fuzhou 01株)为制苗种毒。病毒经Marc 145细胞增殖、超速离心浓缩、甲醛灭活后,分别制成新型佐剂IMS1312灭活疫苗和油乳剂灭活疫苗,两种疫苗病毒含量约为108.0TCID50.mL-1。30头25日龄的PRRSV抗体阴性的断奶猪被随机分成5组,每组6头,用于检测疫苗的安全性和免疫原性。结果表明两种疫苗首次免疫断奶仔猪后14 d可以检测到抗体,二免14 d抗体水平达到高峰,一免180 d后抗体水平可以维持在1∶320。两种佐剂苗在4℃放置12个月均不分层,并对断奶仔猪具有良好的安全性和免疫原性。     

RT-PCR技术检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)

根据猪PRRSV的ORF7基因序列,设计并合成了1对引物,以PRRSV RNA为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测PRRSV的RT-PCR方法。应用该方法对病毒细胞培养物进行基因扩增,均获得了分子量为443bp的特异性目的片段,而对PCV2、PRV、CSFV及Marc-145细胞进行同条件检测,结果均为阴性;PRRSV扩增产物测序结果与文献报道的PRRSV其他毒株序列同源性达92%~98%。敏感性试验表明,该体系可检测到2.39TCID50的PRRSV;对2004~2005年送检的81份临床样品进行检测,阳性率为23.4%。上述研究结果表明,建立的RT-PCR特异性好、敏感性高,可用于猪繁殖与呼吸综合征的诊断和流行病学调查。     

鸭出血症血凝及血凝抑制试验的建立和应用

鸭出血症是由不同于鸭瘟病毒的鸭新型疱疹病毒引起的鸭的一种传染性疾病。根据该病毒可凝集Balh／c小鼠红细胞的特性，我们建立了鸭出血症血凝及血凝抑制试验，经试验表明该方法是一种快速、实用、特异性强的检测方法。     

单克隆抗体与免疫荧光染色技术

自从Kohla和Milstein于1975年首创杂交瘤技术以来,单克隆抗体已应用于免疫学、生理生化、药理学、组织学、肿瘤学、微生物学等不同的学科,其应用之广、发展之快,促使医学、生物学领域起着巨大的变革.单克隆抗体是利用细胞融合技术,在体外大量培养融合细胞,由融合细胞产生大量的抗体.由于单克隆抗体只识别某一特定的抗原决定簇,所以它具有特异性强、成分均一、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等优点而明显优于多克隆抗体.目前世界上己建立的单克隆抗体品种数以万计,其中数千种已经上市.     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用（摘要）

本文应用鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ—ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙烯胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６μｇ／ｍｌＩＢＤＶ蛋白。作者比较了ＬＰＡ、直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ试验的检出率高于ＡＧＰ。ＬＰＡ和ＤＦＡ试验结果的符合率为８６％。     

生物技术在国内禽病诊治中的应用

1 生物技术在禽病病原学研究上的应用1.1 单克隆抗体在病毒蛋白结构及功能检测中的应用单克隆抗体是针对单一抗原决定族的同质性抗体，所以，可以将其作为探针用于病毒的抗原表位的定位、抗原表位的数量及相互关系的研究。由于单克隆抗体与相应的抗原决定族相结合能抑制抗原的功能，因此，单克隆抗体也可以用于抗原性蛋白生物性功能的研究。如单克隆抗体用于NDV的HN蛋白抗原定位和F蛋白空间结构和抗原性的研究。1.2 单克隆抗体技术用于病毒变异分析及毒株分型单克隆抗体仅仅识别一个抗原位点，用抗病毒蛋白的单克隆抗体就可以检测出各种…     

福建省规模猪场伪狂犬病流行病学调查与分析

作者分别应用血清中和试验（SNT）和PCR方法,对福建省近3年来56个规模猪场收集的1470份血清和71个规模猪场采集的136份病料进行了猪伪狂犬病的血清学调查和病原检测。结果表明：在2005年、2006年和2007年,猪伪狂犬病病毒中和抗体合格率：母猪分别为91.5％、89.2%和94.8%;6周龄前猪群分别为75.3%、56.6%和75.5%;6周龄后猪群分别为38%、33.9%和30.7%;被检病料中猪伪狂犬病病毒野毒阳性检出率分别为12.5%、17.4%和16.0%。由此可见,猪伪狂犬病在福建省规模猪场仍未得到完全控制,应加强防控。     

鸡减蛋综合征和新城疫二联油佐剂灭活苗的制备及应用

将减蛋综合征(EDS-76)H株和新城疫(ND)La Sota弱毒株分别接种鸭胚和鸡胚,收获胚液(HA价分别达2~(15)和2~(11)以上),福尔马林灭活后配制成EDS-ND二联油佐剂灭活苗。经无菌与安全性检验,免疫效力测定和田间应用结果表明,该苗安全性良好,于蛋鸡开产前1个月左右皮下或肌肉注射0.5ml/羽,免疫后21天HI抗体效价均达1:2~(10)以上,免疫期达6个月以上。     

应用反向遗传技术研究流感病毒

反向遗传技术(reverse genetics,RG)是一种通过cDNA克隆来拯救RNA病毒基因组片段,进而复制出设计表型的病毒的现代生物基因工程手段,目前被广泛应用于流感病毒重配株的构建.回顾流感病毒反向遗传技术发展的历史,并介绍目前该技术在禽流感疫苗研发方面的实际应用,为禽流感的防治、流感病毒以及其他RNA病毒的研究提供新的思路.