猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性检测

猪大肠杆菌病,如仔猪的黄、白痢、水肿病,是由致病性大肠杆菌引起的一种猪的急性传染病,是引起仔猪死亡的重要原因之一,对养猪业造成了较大的威胁和重大的经济损失。大肠杆菌病疫情发生后,临床上常用抗生素进行治疗,尽管疫情能得到一定程度的控制,但细菌的耐药性日益严重,特别是多重耐药性问题突出。     

番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

参考已发表的番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, mDRV)的S4序列，自行设计1对扩增σC基因的引物，对mDRV ZJ99株的RNA抽提物进行RT-PCR扩增，成功地获得了843 bp特异性的扩增片段(GenBank: AY619690)。将PCR产物克隆测序，BLASTn比较结果显示, mDRV ZJ99株σC基因与福建MW9710株对应基因的同源性为98％，与法国89026和89330株对应基因的同源性分别为92％和93%； BLASTp比较结果显示, ZJ99株编码的σC蛋白与MW9710、89026和89330株相应蛋白分别具有94％、89％、 89％同一性(identity)和95％、92％、93％相似性(similarity)。进一步将σC基因亚克隆至原核表达载体pET28a， 转化大肠杆菌(Escherichia coli )BL21(DE3)，IPTG诱导阳性重组子，SDS-PAGE电泳检测发现, σC蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达，目的蛋白的表达量可达到细菌总蛋白的22.9％。     

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

副猪嗜血杆菌是猪革氏病的病原菌,属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属. 副猪嗜血杆菌主要感染小猪,特别是4～6周龄的断奶仔猪,临床多表现为急性败血症,或者转为慢性,表现为跛行、食欲减退等.     

银杏叶提取物对断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能的影响

【目的】研究银杏叶提取物（EGB）对断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能的影响。【方法】将160头25日龄的“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组4个重复,每重复10头。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2、3、4组分别饲喂在基础日粮中添加质量分数0.1%,0.2%和0.3% EGB的试验日粮。试验期为28 d,分别于第14和28天采集血样,测定断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能指标。【结果】与对照组相比,日粮中添加质量分数0.2%,0.3% EGB可显著降低断奶仔猪血清甘油三酯含量（P＜0.05）,显著提高血清球蛋白含量（P＜0.05）;添加质量分数0.1%,0.2% EGB,总体上可显著提高断奶仔猪血清总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性和总抗氧化能力（P＜0.05）,显著降低血清丙二醛和一氧化氮含量（P＜0.05）。另外,与对照组相比,日粮中添加EGB使断奶仔猪血清高密度脂蛋白胆固醇和总蛋白含量呈增加趋势,血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量呈降低趋势。【结论】断奶仔猪日粮中添加质量分数0.2% EGB效果最佳,此时EGB可降低断奶仔猪血脂含量,提高血清球蛋白水平和抗氧化能力。     

三种检测猪弓形虫病ELISA试剂盒的比较分析

为了比较国内弓形虫抗体检测试剂盒的质量差异,购买三种国产的弓形虫IgG抗体检测试剂盒,采用酶联免疫吸附试验对80份猪血清样本进行平行检测。结果表明:A、B、C三种弓形虫IgG抗体试剂盒检测的阳性率分别为87.5%、77.5%、83.8%;试剂盒A和B的符合率为87.5%,试剂盒A和C的符合率为93.8%,试剂盒B和C的符合率为88.8%;通过Kappa一致性检验,A和B、A和C、B和C试剂盒的Kappa系数分别为0.57,0.75,0.64,其中试剂盒A和B检测结果一致性强度为中度,试剂盒A和C与试剂盒B和C检测结果一致性强度都为高度。说明在这三种试剂盒中A和C检测效果较为一致,B试剂盒检测效果相对于A和C检测效果较差,但三种试剂盒的检测结果差异不显著(P0.05),三种国产试剂盒在对弓形虫IgG抗体的检测上没有很大差别。     

银杏叶提取物对断奶仔猪免疫功能的调节作用

【目的】研究银杏叶提取物(EGB)对断奶仔猪免疫功能的调节作用。【方法】将160头25日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组4个重复,每重复10头。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2、3、4组分别饲喂基础日粮中添加质量分数0.1%,0.2%或0.3%EGB的试验日粮。试验期为28d,分别于第14和28天采集血样,测定断奶仔猪的免疫功能指标。【结果】与对照组相比,日粮中添加质量分数0.2%或0.3%EGB可显著提高断奶仔猪血液红细胞数、淋巴细胞数、血红蛋白质量浓度和淋巴细胞百分率(P<0.05),促进血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和补体C3、C4的生成以及细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌(P<0.05)。【结论】日粮中添加质量分数0.2%或0.3%EGB可增强断奶仔猪的免疫功能。     

应用特异PCR方法诊断2例猪弓形虫病

[目的]应用特异PCR方法诊断猪弓形虫病。[方法]分别以弓形虫核糖体DNA第一内部转录间隔区(ITS1)序列和529 bp重复序列为目的片段,扩增2例疑似猪弓形虫病的病料肺门淋巴结DNA,对疑似猪弓形虫病的病料进行PCR诊断。[结果]2对引物均能分别扩增出2例肺门淋巴结中弓形虫DNA的特异条带。[结论]基于2种扩增片段的PCR方法均具有较高的特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。     

鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白的原核表达

根据已发表的鹅圆环病毒GoCV-yk1株的序列,设计引物扩增出全长核衣壳蛋白基因（Cap）,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21（DE3）进行融合表达,经SDS-PAGE电泳检测未见到目的蛋白条带。应用生物信息学分析确定Cap蛋白的核定位信号区域,新设计一对引物扩增出不包含核定位信号序列编码区的核衣壳蛋白基因,将截短Cap基因克隆入pET-28a进行融合表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,截短Cap蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为27.6ku,表达产物以包涵体形式存在,其表达量可以达菌体总蛋白的18.3%。截短Cap蛋白的高效表达为鹅圆环病毒ELISA检测方法的建立和进一步开展GoCV致病性及其免疫机制的探索奠定了基础。     

基于外膜蛋白Omp16的副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测副猪嗜血杆菌(H.parasuis)抗体方法,本研究以H.parasuis外膜蛋白Omp16为包被抗原建立了检测H.parasuis的间接ELISA方法。反应条件经优化为:抗原包被浓度为1μg/m L,血清稀释度为1:80;血清与抗原最佳作用时间为40 min,二抗稀释10 000倍,与一抗孵育30 min;TMB作用时间为30 min。利用该ELISA方法检测H.parasuis、胸膜肺炎放线杆菌、大肠杆菌和猪链球菌2型等血清,除H.parasuis为阳性外其余均为阴性,表明其特异性强。该ELISA方法可检测到最高稀释度为1∶512的阳性血清,敏感性高。重复性试验显示,其批内和批间的重复试验变异系数(CV)分别在3.62%~8.97%和4.3%~9.50%。该ELISA检测方法与进口ELISA试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率分别为87.8%,90.7%和88.6%。本研究建立的间接ELISA方法,为H.parasuis血清流行病学调查及疫苗免疫评价等提供了重要手段。     

番鸭"新鸭疫"病原中呼肠孤病毒的初步确证

1999年底以来,在浙江省的青壮年番鸭中新爆发了主要表现为食欲下降、咳嗽、流涕、喙和蹼发绀、拉稀、死亡率很高的烈性传染病,病理剖解主要表现为肝脏肿大、质脆,个别病例有不规则的坏死斑;脾肿大、有的病例坏死呈花斑;胰有多量、点状的坏死灶;肠道黏膜常有环状出血灶等。据当地百姓的俗称,笔者暂时把这种疾病定名为番鸭“新鸭疫”。