猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单克隆抗体的制备及生物学特性研究

通过差速离心和蔗糖密度梯度了心法对猪繁殖与呼吸综合征病毒沪1（PRRSV－S1）株进行抗原纯化。免疫BAIB／c小鼠，取脾细胞与SP2／O融合，用间接ELISA和有限稀释法,获得2株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为AG、BD3。ELISA交叉试验和阻断试验表明，2株单抗具有高度特异性。AG1可与PRRSV－S1，欧洲株LV，美洲株VR－2332反应，而BD3与美洲株VR－2332反尖较弱，2株单抗对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是：1：256－1：5123，腹水效价分别在1：10^3－1：10^5之间。AG1和BD3各有100条染色体，琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b，BD2属于IgM。Western blot试验表明AG1和BD3是针对N蛋白抗原表位的特异性单抗。     

PRRSV-SA株在组织培养上增殖及某些生物学特性

猪繁殖呼吸综合征(PRRS)是病毒引起的一种猪的新的传染病,该病以引起母猪发热、厌食、流产、产木乃伊胎及弱仔,仔猪和育成猪出现呼吸道症状,导致高致死率为特征。该病1987年首先发现于美国,并以极快的速度向世界各地传播和蔓延。     

传染性支气管炎病毒中国地方分离株RFLP基因分型的研究

为初步确定我国不同地区流行的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的基因分型，对分离自国内８个不同地域疫区的ＩＢＶＱＤ、ＧＺ、ＺＺ、ＴＪ、ＤＬ、ＹＣ、ＪＳ１和ＪＳ２及参考株Ｍ４１、Ｈ５２和Ｔ的Ｓ１基因ＲＴ－ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ进行ＨａｅⅢ的ＲＦＬＰ分析。结果，ＱＤ与ＭＤ４１、Ｈ５２同属Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｅ基因型，ＧＺ、ＺＺ、ＹＣ与Ｔ的基因型相同，ＤＬ、ＪＳ１和ＪＳ２则表现为各自独立的基因型，而ＴＪ则为ＤＬ和Ｔ２种基因型毒株的混合感染，表明我国的广大地域内存在着Ｍａｓｓ基因型、Ｔ基因型和可能的变异株ＩＢＶ的流行。     

传染性支气管炎病毒类M_(41)地方分离株S_1基因克隆及高变区序列分析

传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离株ＱＤ经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出约１．７ｋｂＳ１糖蛋白基因ｃＤＮＡ，修饰后插入ｐＵＣ１８ＳｍａｌⅠ／ＥｃｏＲＩ位点构成质粒ｐＵＣＱＤＳ１。对克隆的Ｓ１基因５′端高变区序列测定显示，起始密码上游６０碱基和下游３８０碱基中与参考株Ｍ４１Ｓ１基因序列仅有１个碱基的差异，表明ＱＤ为一类Ｍ４１分离株。     

我国鸡传染性支气管炎病毒地方性流行毒株S1基因的RT-PCR扩增及其克隆与鉴定

采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,以ＩＢＶＳ１全基因特异性引物分别从我国华东（ＨＤ）、华北（ＨＢ）、华中（ＨＺ）、华南（ＨＮ）、西北（ＸＢ）及东北（ＤＢ）等地的ＩＢＶ流行株基因组中扩增出预期的１．７ｋｂ左右的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物的ＨａｅＩＩ酶切分析及其与英国ＩＢＶＳ１全基因核酸探针的分子杂交证实所获６个ＩＢＶ流行株的ＰＣＲ产物为ＩＢＶＳ１基因。将此６个毒株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物分别进行５’和３’端的ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄＩＩ酶切识别位点的分子修饰之后插入到克隆质粒ｐＵＣ１８的ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩ位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的分子克隆。Ｓ１基因的ＲＦＬＰ分析表明我国ＩＢＶ已有分子水平的变异。     

传染性支气管炎病毒我国地方分离株病原性和基因分型的比较研究

对来自国内部分地区的６个分离株及３个参考株,以蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ法提取其基因组ＲＮＡ,经反转录－聚合酶链式反应扩增了预期的１．７ｋｂ纤糖蛋白Ｓ１基因ｃＤＮＡ。     

新型嵌合抗菌肽 SB 基因的合成

根据天然抗菌肽B的结构特点，选用植物偏爱密码子，设计相应编码区，加接大麦α-淀粉酶信号肽序列，并对碱基序列作如下调整：（1）将编码区中Met替换成Val；（2）N端增加三个氨基酸；（3）用Gly残基替代C端的酰胺。利用三个寡聚核苷酸单链互为引物与模板，PCR扩增技术合成全长207bp的新型抗菌肽基因，克隆于pGEM-Teasy载体上，经DNA序列分析证实，合成的SB嵌合基因碱基序列符合设计要求。     

IBV地方分离株致病原性和血清学分型的比较

将６株分离自国内不同地方的ＩＢＶ流行株分别感梁ＳＰＦ鸡，对气管和肾桩进行系统病理观察，发现６株ＩＢＶ在至于致病原性和组织嗜性上存在显著差异，其中ＱＤ可引起严重的呼吸道损伤，并伴有相对较轻的肾脏损伤，其余５株对肾脏损伤较为严重地呼吸道损伤相对温和。用气管环组织培养交叉中和实验（ＳＮ）和ＳＡＳ软件对６株分离毒进行血清学分型研究，结果显示ＱＤ株属于Ｍ型，ＺＺ、ＧＺ属于Ｔ型，而ＴＪ、ＤＬ和ＹＣ株是不同于Ｍ     

猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)S毒株接种本动物的回归试验

猪繁殖呼吸综合征 (ＰＲＲＳ)是由ＰＲＲＳＶ引起的传染病。 1 997年我们从上海郊县发病猪场的死胎和死仔中分离到ＰＲＲＳＶＳ1毒株 ,经鉴定属美洲型毒株〔1〕。ＰＲＲＳＶ对母猪和仔猪易感 ,感染后在临床症状方面可分二大类 ,一类是母猪表现为繁殖障碍 ;另一类是仔猪和育成猪表现出呼吸道症状。本试验将ＰＲＲＳＶ上海分离株接种易感仔猪 ,以复制出ＰＲＲＳ病症 ,从而进一步确证分离到的Ｓ1毒株属ＰＲＲＳＶ。1　材料和方法1 .1　试验用仔猪 ,从上海远郊一个ＰＲＲＳ阴性猪场购买 ,隔离饲养 ,经检测抗体阴性 ,作为本试验用猪。1 .2　病毒 …     

伪狂犬病病毒上海株gE基因克隆及其含GFP基因质粒载体的构建

根据已发表的伪狂犬病病毒（PRV）gE基因序列设计1对引物，用PCR法扩增了PRV上海株（PRV-SH）的gE基因，并克隆入pUC18中。利用gE基因中限制性酶切位点，把绿色荧光蛋白（GFP）的基因表达盒插入gE基因中，构建了含GFP的载体pUCgE-GFP。