猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单抗AG1的生物学特性及夹心ELISA诊断方法的建立

用纯化的猪繁残呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-S1）病毒液作抗原，免疫BALB/C小鼠，获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株，命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明，AG1具有高度特异性。AG1可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应，对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价AG1属于IgG2b，腹水效价在1：10^-3-10^-5之间。AG1有100条染色体，琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b。Western bloting试验表明AG1是针对N蛋白抗原表位的特异性单抗。以AG1为捕捉抗原抗体和酶标抗体，建立了快速检测PRRSV抗原的单抗夹心ELISA法，该方法具有快速、灵敏、准确、广谱等特点。     

猪伪狂犬状病毒S1株的分离与鉴定

从上海事某猪场发效仔猪体内分离到1株病毒，该毒株能在鸡胚成纤维细胞，RK，Vero,BHK21,ST,PK15细胞上增殖并产生细胞病变，通过蚀斑克隆对其进行纯化，克隆毒株在BHK21细胞上的TCID50为50μL10^-6.68稀释液，该病毒能被伪狂犬病毒（PRV）阳性血清中和，接种细胞经PRV荧光抗体染色呈阳性反应，电镜观察可见直径110－180nm的典型疱疹病毒粒子，用该病毒接种兔仔猪均出现典型的伪狂犬病症状，表明该分离毒株为PRV。     

鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定

利用ＩＢＶ全长Ｓ１基因特异性引物,以纯化的３个标准株Ｍ４１、Ｈ５２、Ｔ和６个地方分离株（ＱＤ、ＺＺ、ＧＺ、ＧＪ、ＤＬ和ＹＣ）的基因组ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出预期大小约１．７３ｋｂｃＤＮＡ片段,经ＢＡＭＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切插入到质粒ｐＵＣ１８中,并在大肠杆菌ＪＭ８３中实现了克隆。对６个分离株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物进行ＨａｅⅢＲＦＬＰ分析,表明ＱＤ、ＴＪ属于Ｍ４１基因型,ＺＺ和ＧＺ与Ｔ基因     

南京市首例甲型H1N1(2009)流感病毒分离及其血凝素基因遗传变异分析

对南京市首例甲型H1N1(2009)病毒进行细胞分离,获得一株具有较高血凝活性的病毒,命名为A/Nanjing/1/2009。在全基因组测序的基础上,对分离株的血凝素基因(haemagglutinin,HA)的遗传特征进行了详细研究。分离株HA蛋白不具有多碱基HA裂解位点,具有低致病性流感病毒特点。与参考株A/California/04/2009相比,分离株A/Nanjing/1/2009HA蛋白的有5个氨基酸发生了突变,其中一个位于Ca抗原位点208位氨基酸(R→K),这一突变虽然还不会影响抗原性的改变,但预示了新甲型H1N1(2009)抗原漂移的启动。分离株有5个潜在糖基化位点,这与近年来古典猪H1N1和北美三源重配猪H1病毒完全一致,保留了古典猪H1病毒的特点。与禽H1病毒相比,分离株HA蛋白受体结合位点上的190(E→D)和225(G→D)位点发生突变,这可能成为新甲型H1N1(2009)在人际间传播的一个重要分子基础。此外,其它受体结合位点上相关氨基酸同时具有人和猪流感病毒的特点。本研究对南京市早期流行的甲型H1N1(2009)流感病毒的HA蛋白的分子遗传特征进行了详细研究,对进一步监测病原变异具有重要指导意义。     

猪细小病毒弱毒冻干疫苗的检测报告

猪细小病毒病是引起母猪繁殖障碍的主要病因之一 ,给养猪业造成严重的经济损失。我所研制成功的猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗已被全国各地的养猪场广泛应用 ,取得了良好的社会效益和经济效益。但是随着当今养猪业规模化和集约化的发展 ,仍十分需要猪细小病毒弱毒冻干疫苗 ,而且冻干疫苗拥有保存时间长、运输方便、生产工艺简单、免疫剂量小、成本相对比较低等优点 ,因此课题组又研制了猪细小病毒弱毒冻干疫苗 ,经过实验室的检测 ,取得了令人满意的结果。本文就检测试验结果报道如下 :1　材料和方法1 .1 　猪睾丸 (ＳＴ)传代细胞。ＳＴ细胞的…     

猪细小病毒病弱毒冻干疫苗预防猪细小病毒病

猪细小病毒 (ＰＰＶ)是引起母猪繁殖障碍的重要病因之一 ,可引起母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等 ,对养猪业造成严重的经济损失。 1 987年 ,我所研制成功的猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗 ,对于预防ＰＰＶ引起的母猪繁殖障碍起到了积极的作用 ,并于 1 994年荣获了国家级新兽药证书。当前养猪业正趋向规模化、集约化 ,根据综合防疫的需要 ,除了有猪细小病毒病灭活疫苗外 ,还十分需要有猪细小病毒病弱毒冻干疫苗 ,供用户选择应用 ,为此 ,我们又致力于弱毒疫苗的研究工作。将ＰＰＶ接种易感细胞 ,并连续传代 ,成功培育了一株安全性和免疫原性良…     

猪繁殖呼吸综合征弱毒疫苗应用性免疫试验

有关猪繁殖呼吸综合征 (ＰＲＲＳ)的防制是当前ＰＲＲＳ研究中的重要内容。我们研制的ＰＲＲＳ弱毒疫苗在实验室的安全试验和免疫试验基础上 ,进行了应用性免疫试验 ,以进一步证实本疫苗的实际应用价值。由于各个猪场的结构布局不同 ,饲养管理水平不一 ,猪群的免疫和健康状况参差不齐 ,不同猪场感染ＰＲＲＳ后引起的临床症状各不相同。本试验选择三个猪场进行应用性免疫试验。1　试验方案1 .1　 甲猪场在前一年年底到第二年初 ,母猪发生流产、死胎等繁殖障碍症状 ,诊断为ＰＲＲＳ。该场应用东北某所的灭活疫苗 ,使病情有所缓解 ,以后出现在 …     

猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)SA毒株的分离与鉴定

从仔猪内脏分离到一株猪繁殖呼吸综合征病毒（PRRSV）毒株，该毒株能在Marc－145细胞上增殖致细胞病变，该病变能被PRRSV美洲型阳性血清所抑制，不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制，经美洲型PRRSV荧光抗体染色呈阳性反应，电镜观察到直径55nm左右的病毒粒子，属RNA病毒，接种阴性仔猪未见临床症状异常，但血清学阳性。命名该分离毒为PRRSV－SA毒株。     

猪繁殖呼吸综合征病毒S3毒株的分离及其免疫特性研究

从某猪场仔猪体内分离到一株PPRSV毒株，该毒株能在Marc-145细胞上增殖产生致细胞病变，该病变能被PPRSV美洲型阳性血清所抑制，不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制，经美洲型PPRSV荧光抗体染色呈阳性反应，电镜观察到直径55－60nm的病毒粒子，接种阴性仔猪未见临床症状异常，但抗体检测阳性。命名该分离毒为PPRSV－S3毒株。在S3弱毒株分离鉴定的基础上，进一步在猪体上对其致病性和免疫力进行研究。S3毒株接种仔猪后，仔猪不表现任何症状，也不向外排毒。4－5周龄的仔猪接种S3株后可产生坚强的免疫力，免疫后4－6个月能抵抗强毒攻击。后备母猪配种前2－3周免疫接种S3株，怀孕90－95d攻强毒，未发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障碍现象。结果表明，S3是一株自然分离的弱毒株，且具有良好的安全性和免疫力。     

猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗研制及应用研究

猪细小病毒 (ＰＰＶ)能引起母猪尤其是初产母猪的繁殖障碍 ,主要表现为母猪受胎率降低、产活仔数减少、出现死胎和 (或 )木乃伊胎。到 2 0世纪 80年代ＰＰＶ在我国的流行已经相当广泛 ,给养猪业带来严重的经济损失。预防本病的唯一办法是应用疫苗。我所在ＰＰＶ分离和鉴定的基础上 ,一直致力于猪细小病毒病疫苗的研究 ,于 1 987年研究成功猪细小病毒ＡＥＩ灭活疫苗〔1〕,1 994年研究成功猪细小病毒病弱毒疫苗〔2 ,3〕。对于猪细小病毒ＡＥＩ灭活疫苗在经过不断的改造、完善及一系列试验后 ,现在研制的猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗具有免疫剂…