I型鸭肝炎病毒间接ELISA方法的建立

采用I型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心- 0.22 μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-I型病毒全病毒间接ELISA诊断方法.试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断鸭病毒性肝炎-I型病毒感染提供了一条方便的途径.     

斑马鱼端脑的微细形态与结构

为了深入了解斑马鱼端脑的微细形态和超微结构,采用光镜和电镜技术对斑马鱼端脑进行观察研究。斑马鱼端脑由左、右嗅球和左、右大脑半球构成。嗅球前方有一对嗅神经,后端伸出嗅茎与大脑半球联系。光镜下,嗅球组织结构从外向内依次为上皮层、神经纤维层、小细胞层和内部细胞层。大脑半球外部覆盖很薄的大脑皮,基部为纹状体,两者之间的腔隙为公共脑室。纹状体由神经核团和神经纤维构成。神经核团分布于纹状体周缘,主要有连前核、背嗅核、侧嗅核、视前核和脚内核等。神经纤维包括横行的前连合,纵行和斜行的中央嗅束和侧嗅束。电镜下,嗅球分层明显,可观察到僧帽细胞、神经胶质细胞和众多突触。大脑半球中可见神经胶质细胞、突触以及血脑屏障系统等。斑马鱼端脑形态结构与大多数硬骨鱼相似,但有个别核团存在差异。实验结果可为斑马鱼神经生物学模型的建立与应用提供有效的理论基础。     

禽腺病毒载体研究进展

人腺病毒载体被广泛地用作转基因工具。然而,人体内预先存在的针对人腺病毒的抗体影响了转基因的效率,阻碍了这些载体在临床上的应用。避免宿主免疫反应的途径之一是开发能将基因转导至人细胞的动物腺病毒载体,而禽腺病毒载体是目前动物腺病毒载体研究中较多的一种。禽腺病毒载体还可插入并表达病原的保护性抗原基因,用于疫苗研制。对禽腺病毒的分子生物学和载体疫苗的深入研究,将对禽类疫病预防起到重要作用。论文详细叙述了禽腺病毒的基因组结构特点以及禽腺病毒载体的研究现状,为研究者提供参考。     

种植季节对水稻碾米品质、食味蒸煮品质的影响

一、材料与方法供试材料有闽籼23、095、闽籼24、红青早1号、珍科早、闽籼25和119等7个早籼品种。供试材料按早晚两季播种，早季于1996年3月28日播种、5月4日插秧，7月底收成的种子晒干一份用于早季的品质鉴定、一份用于晚季8月1日播种、8月15日插秧。田间施肥、灌水等栽培管理与大田相同，均匀一致，小区面积2厘。成熟后，早晚季各个品种收获o．5止g于燥种子，贮藏3个月后按部颁标准“NY137－88米质鉴定方法”，对碾米品质（糙米率、精米率、整精米率），蒸煮品质一糊化温度、胶稠度、直链淀粉含量）6项指标进行品质测定。各样品重复2次。…     

套式 PCR方法在泰泽氏菌检测中的应用和验证

用泰泽氏菌 RJ株感染的大鼠肝组织匀浆腹腔注射 Scid小鼠和 BALB/c小鼠,提取注射后小鼠肝、肾、肺、脾的 DNA, PCR扩增,核酸杂交.根据泰泽氏菌的保守序列合成引物扩增泰泽氏菌的基因组 DNA,建立了泰泽氏菌的套式 PCR方法,并将此方法应用于 Scid小鼠和 BALB/c小鼠以及可疑样品的检测,其中 Scid小鼠的肝、肾组织和 BALB/c小鼠的肝组织及可疑组织得到特异性扩增带,其他动物样品和组织 DNA均为阴性结果.进一步对该 DNA片段进行核酸杂交,结果证实,凡 PCR套式扩增为阳性的,均有杂交带.因此,泰泽氏菌套式 PCR方法在实际检测中是切实可行,其具有敏感性和特异性高的优点.     

脑部特异表达SV40Tag转基因动物模型的建立

将猿猴病毒抗原蛋白(SV40Tag)片段克隆进脑部特异表达载体pMM279中,通过显微注射法制作转基因小鼠。采用PCR和Southern blotting检测目的基因整合,并通过RT-PCR检测目的基因的表达。结果表明:共出生29只仔鼠,经PCR检测出3只阳性,Southern blotting检测出2只阳性。RT-PCR检测到SV40Tag仅在前脑部皮层和海马表达。成功获得的脑部特异表达SV40Tag转基因小鼠模型,为SV40Tag的致病机制及脑肿瘤的治疗等研究提供工具。     

实验小鼠肠道寄生虫观察

本文对开放式设施内饲养的7个品系中351只实验小鼠的肠道寄生虫作了观察。共检出方种寄生虫;毛滴虫、鼠贾第虫、鼠六鞭虫、隐藏管状线虫、四翼无刺线虫和微小膜壳绦虫;其感染率为:毛滴虫100%、鼠贾第虫49.57%、鼠六鞭虫22.51%、隐藏管状线虫58.40%、四翼无刺线虫21.94%、微小膜壳绦虫21.37%。     

呼肠孤病毒3型S1基因在Sf9昆虫细胞中的表达

利用杆状病毒表达系统对呼肠孤病毒3型S1在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究Reo-3σ1蛋白功能及建立呼肠孤病毒3型血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法扩增全长为1 416bp的Reo-3S1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFastBacHTA-S1再转化到DH10Bac感受态细胞中,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-S1,用脂质体介导法转染昆虫细胞获得重组病毒rBS。免疫荧光法（IFA）和western-blotting检测结果表明,S1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约为50 kD的重组蛋白,且具有免疫原性。这是国内首次通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达出了具有免疫原性的Reo-3σ1蛋白,为进一步研究单克隆抗体的制备和血清学抗体水平检测研究奠定了基础。     

表达外源绿荧光蛋白的重组犬2型腺病毒的构建及其生物学特性分析

以pUC18载体为骨架质粒,犬2型腺病毒(canine adenovirus 2,CAV-2)Tomnto A26/61株为亲本毒株,以复制非必需区E3的侧翼序列为同源重组臂,对外源基因的插入靶点E3区进行了缺失,并在缺失位置插入hCMV IE启动子、多克隆位点,增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)、SV40早期转录poly-A信号,构建了E3区缺失的转移栽体pUC-△E3-EGFP.该载体与CAV-2亲本毒株共转染MDCK细胞,二者发生同源重组,经蚀斑筛选获得了表达EGFP的重组病毒rCAV-2△E3-EGFP.经鉴定重组病毒保持了亲本毒株的生物学性状并能够稳定表达外源基因,动物试验证实E3区的缺失对病毒的致病力无明显影响,为进一步开展CAV-2活载体疫苗研制及相关基础研究提供了技术平台.     

仙台病毒核蛋白的原核表达及鉴定

本研究从一株鼠仙台病毒（Sendai virus,SeV）中扩增获得核蛋白（nucleocapsid protein,NP）基因,将其克隆入pET32a（＋）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫荧光法和Western blot法检测,该表达产物原具有良好的免疫原性。将该产物纯化作为包被抗原,建立了一种检测SeV感染的间接ELISA方法。通过H1N1流感病毒、H9N2流感病毒、新城疫病毒阳性血清进行交叉试验表明：该间接ELISA方法有很好的特异性。这为实验动物仙台病毒抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。