捻转血矛线虫雌、雄成虫galectin基因的克隆、鉴定及序列分析

根据GenBank中发表的捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)雌、雄混合虫体的半乳糖结合凝集素(galectin)基因序列设计1对引物，分别以山羊捻转血矛线虫雌、雄成虫的总RNA为模板，采用RT-PCR技术，均扩增出约880bp的产物。将其分别克隆入pMD18-T载体，经双酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测定，表明扩增片段为捻转血矛线虫galectin cDNA。经核苷酸序列、氨基酸序列和抗原性比较分析发现，雌、雄成虫的galectin基因存在一定差异，在开放阅读框内二者有3个核苷酸的差异，2个氨基酸的差异。与已发表的其它galectin相比，雌、雄成虫的galectin与Hco-ga1-3b的同源性最高。二级结构及蛋白质特性预测分析发现，雌、雄成虫的galectin均具有α螺旋、β折叠和β转角，雌虫的galectin蛋白比雄虫的分别多出一个α螺旋和β折叠区。二者的亲水性存在一定差异，但抗原性几乎无差异，且抗原表位比较集中。如同其它galectin一样，在雌、雄成虫的galectin蛋白的N末端不存在信号肽序列。     

断奶后多系统衰竭综合征病猪中存在沙门氏菌和猪繁殖与呼吸系统综合征病毒共感染

调查了曾经暴发沙门氏菌病的四个猪场的14头病猪,发现在这些猪的肿胀淋巴结中出现带有淋巴细胞排空的肉芽肿性炎症。应用免疫标记和PCR方法在病变部位检测到猪圆环病毒2(PCV2)抗原和PCV2DNA。此外,在这些病猪的肺脏中检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分离到猪霍乱沙门氏菌。在9头沙门氏菌感染猪中,有5头为沙门氏菌、PMWS与PRRSV并发感染,其数量(55.6%)远远高于沙门氏菌与PMWS感染猪(22.2%)或沙门氏菌与PRRSV感染猪(22.2%)。     

11株鸡新城疫病毒强毒株的分子特性

选取2002～2007年从上海市分离鉴定的11株鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）强毒株,克隆其融合蛋白（Fusion,F）基因片段,测序后登录GenBank,序列号分别为NDV 022433（EU258661）、022435（EU258662）、0210149（EU258653）、0210154（EU258654）、0210227（EU258656）、0210252（EU258658）、03024（EU258637）、04011（EU258639）、05013（EU258640）、07011（EU258642）和07023（EU258643）。序列分析结果显示：上述分离株的F基因扩增片段为1 654 bp,编码551个氨基酸,其核苷酸序列同源性为94.6%～100%,推导的F蛋白氨基酸序列同源性为93.0%～100%;各分离株F蛋白裂解位点序列均为112R-R-Q-K-R-F117,为基因Ⅶ型NDV强毒株。系统发育分析表明：这11株NDV分离株之间的遗传距离较近,而与传统疫苗株B1、La Sota、V4和F48E9的遗传距离较远。此外,这11株NDV强毒株均具有大多数鹅源NDV毒株特有的973和1 249 nt RsaⅠ位点。     

微卫星标记在近交系及封闭群小鼠遗传质量检测中的初步应用

利用建立的小鼠微卫星检测方法,对来源于2个单位的近交系BALB/c小鼠和封闭群ICR小鼠进行了遗传分析,结果发现A单位BALB/c小鼠发生了遗传污染,有部分小鼠在部分微卫星位点发生了变异,而B单位BALB/c小鼠在所有的检测位点上的结果都与预期的BALB/c小鼠位点一致;对ICR 小鼠分析结果发现A单位ICR小鼠在22个位点的平均杂合度为0.379,平均多态信息量为0.308,属中度多态,B单位ICR小鼠的平均杂合度为0.287,平均多态信息量为0.227,属低度多态.结果表明微卫星标记可用于检测近交系小鼠的遗传质量,也可用于分析封闭群小鼠的遗传多态性,为一种有潜力的实验动物遗传学检测标记.     

仙台病毒核酸快速检测方法的建立和应用

仙台病毒(Sendai virus,SeV)是一种常见的可引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,感染迅速,并且隐性感染率高,一旦感染较难从鼠群中清除,从而影响动物健康。为满足对入境噬齿类实验动物和野生动物仙台病毒快速检测的需要,本研究针对SeV编码基质蛋白和融合糖蛋白基因的保守序列设计引物和荧光探针,建立了仙台病毒RT-PCR和Real-time RT-PCR检测方法。将建立的方法应用于仙台病毒感染鼠不同临床样品和组织培养物的检测,证实两种核酸检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适合应用于出入境口岸实验和野生噬齿类动物仙台病毒疫情的快速检测。     

半乳糖结合凝集素的结构与功能

凝集素是自然界广泛存在的一大类糖结合蛋白 ,半乳糖结合凝集素 ( galectin)是凝集素家族中的一员 ,存在于多种生物、多种组织内 ,且进化保守 ,发挥着广泛的功能 ,参与细胞粘附、凋亡及免疫反应等多种生物学过程。目前 ,国内外对凝集素的研究日益增多 ,文章以哺乳动物的 galectin为重点 ,综述了 galectin的结构特性、配体、分泌方式和生物学功能等各方面的研究现状 ,为进一步了解和研究 galectin提供了参考     

犬白细胞介素-2 基因(IL-2 )的克隆与表达

根据GenBank上发表的犬(Canis familiaris)IL-2基因序列，设计了1对引物。采用RT-PCR技术，以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞为材料，从总RNA中扩增出犬IL-2基因。琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为550bp。分离纯化片段，克隆入pMD18-T载体，经酶切鉴定，测序结果显示，克隆的犬IL-2基因与GenBank上发表的序列一致，生物软件分析结果表明该序列与牛、羊和鹿的亲源性更近。构建表达质粒pET28-CaIL-2，转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21，IPTG诱导表达，SDS—PAGE电泳显示21．8kD左右的表达条带。MTT比色法测定活性结果表明：表达的重组犬IL-2蛋白具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性。     

可视化2型猪链球菌LAMP检测方法的建立

由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了测试。通过在LAMP反应产物中加入显色液,提高了对检测结果肉眼判定的准确性,实现了结果判定可视化的目标,有助于在出入境口岸货物查验现场及猪场等一线实验室使用。     

猪肺炎支原体的诊断

猪肺炎支原体可引发猪地方性肺炎,仍然是导致养猪业疫病的重要病原体之一.这种复杂的小型微生物可定殖在猪呼吸道的纤毛细胞中,使其几乎不暴露于免疫系统下.证实猪肺炎支原体的存在、并确定其在呼吸道疾病和肺炎中的作用,对兽医行业仍然具有挑战性.虽然猪肺炎支原体的培养仍然是时其作出鉴定的黄金标准,但血清学方法、聚合酶链反应和检测组织中猪肺炎支原体的各种不同方法仍是实验室常用的检测技术.由于猪肺炎支原体在由并发的细菌和病毒感染引发的严重肺炎中所起的作用日益增加,了解猪肺炎支原体的发病机制和现有的诊断方法对开发有效的干预措施以及在猪群水平上控制猪群呼吸道疾病非常关键.     

沙门菌多重PCR检测方法的建立及其应用

为鉴定临床上常见的3种沙门菌血清型,针对特异性基因invA(沙门菌属)、sdfl(肠炎沙门菌)、Stm4495(鼠伤寒沙门菌)和SPUL-2693(鸡白痢沙门菌)设计引物,利用标准菌株通过优化体系成功建立了沙门菌的四重PCR检测方法.结果 显示:该方法特异性好,敏感性高(检测下限:基因组为500 pg/mL,菌液为10...