检测流感病毒的商业PCR试剂盒比对验证

利用8种不同流感病毒株及其核酸,结合自然感染组织样品与人工混合样,验证比较了8种商业PCR试剂盒的质量参数。结果表明,3号荧光PCR试剂盒漏检1株外,其他试剂盒均可以检测8种毒株,对其他类似病毒如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒和猪环状病毒核酸等无交叉反应,最高可检测到10-7稀释的目标核酸,重复性与再现性均为理想,在有效期内检测结果没有发生变化。     

犬瘟热RT-PCR快速诊断方法的建立

本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT-PCR方法,并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位,本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测,结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样品中CDV病毒滴度较高,并可在发病全程检测到,因此,它们可作为理想的受试样品。     

上海口岸进境动物产品后续监管的十年回顾及有关问题的探讨

１９８８年,根据全国口岸动检工作会议的精神,上海口岸开始对从事进境动物产品加工使用、中转仓储的单位试行了许可证制度,并制订了《进境动物产品加工使用、中转仓储许可证制度管理办法》和《进境动物产品加工使用、中转仓储单位兽医防疫卫生要求》,使进境动物产品生...     

仙台病毒核酸快速检测方法的建立和应用

仙台病毒(Sendai virus,SeV)是一种常见的可引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,感染迅速,并且隐性感染率高,一旦感染较难从鼠群中清除,从而影响动物健康。为满足对入境噬齿类实验动物和野生动物仙台病毒快速检测的需要,本研究针对SeV编码基质蛋白和融合糖蛋白基因的保守序列设计引物和荧光探针,建立了仙台病毒RT-PCR和Real-time RT-PCR检测方法。将建立的方法应用于仙台病毒感染鼠不同临床样品和组织培养物的检测,证实两种核酸检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适合应用于出入境口岸实验和野生噬齿类动物仙台病毒疫情的快速检测。     

裸鼠过度角化症牛棒状杆菌的分离鉴定

2010年8月一批进口入境的裸鼠在隔离期间发生了疑似国外文献报道的过度角化性皮炎,为了确诊该病及鉴定该病的病原,本研究从患病裸鼠皮肤组织分离到一株革兰氏阳性杆菌。细菌纯化后经Biolog自动生物鉴定仪系统初步鉴定为牛棒状杆菌(C.bovis);提取细菌基因组,PCR扩增16S rRNA基因,测序结果经比对与GenBank中的C.bovis同源性在99%以上;培养物感染裸鼠没有出现临床症状,但组织学检查显示,感染裸鼠表皮棘皮层增厚,表现出轻微的C.bovis感染特有的棘皮症。由此可以确认这次入境裸鼠暴发的疫病为过度角化症,病原为C.bovis。本研究首次报道了在我国实验动物设施暴发的裸鼠过度角化症,提示裸鼠感染C.bovis导致的过度角化症是实验动物质量监测中不可忽视的传染病。     

可视化2型猪链球菌LAMP检测方法的建立

由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了测试。通过在LAMP反应产物中加入显色液,提高了对检测结果肉眼判定的准确性,实现了结果判定可视化的目标,有助于在出入境口岸货物查验现场及猪场等一线实验室使用。     

4种有机溶剂对Vero细胞活力和弓形虫增殖的影响

本研究旨在筛选低细胞毒性和低弓形虫毒性的有机溶剂。Vero细胞在96孔板培养12 h后,将培养基更换为200μL分别含0、0.1%、0.3%、0.5%、1%、3%、5%、10%(V/V)的二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺、乙醇和甲醇的完全培养基,同时设立空白对照孔,继续培养12和24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法评价4种有机溶剂对Vero细胞增殖活力的影响,筛选出对宿主细胞毒性最小的有机溶剂并确定其安全浓度;弓形虫接种Vero细胞12 h后,弃上清后分别加入含有0、0.1%、0.3%、0.5%、1%、3%(V/V)的DMSO、二甲基甲酰胺、乙醇和甲醇的完全培养基120μL,接种36 h后判定各组溶剂对弓形虫增殖的影响,计数感染细胞数并计算相对感染率,筛选出对弓形虫增殖影响最小的有机溶剂及其安全浓度。结果显示,对于Vero细胞,DMSO、二甲基甲酰胺、甲醇和乙醇分别在其体积分数低于1%、0.1%、3%和1%时无明显毒性;对于弓形虫,DMSO、二甲基甲酰胺、甲醇和乙醇对弓形虫增殖的安全添加浓度分别为1%、0.1%、1%和0.1%。本研究表明,DMSO、甲醇对Vero细胞、弓形虫的毒性较小,可作为水溶性较差药物进行抗弓形虫筛选时优先选择的有机溶剂。     

犬瘟热RT-POR快速诊断方法的建立

本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT-PCR方法，并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位，本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测，结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样品中CDV病毒滴度较高，并可在发病全程检测到，因此，它们可作为理想的受试样品。     

Real-time RT-PCR和RT-PCR方法快速检测犬瘟热病毒

由犬瘟热病毒(CDV)引起的犬瘟热(CD),是犬的一种高度接触性、急性传染病[1].CDV感染范围广泛,自然宿主包括犬科动物(犬、狼、豺、狐等),鼬科动物(貂、臭鼬、黄鼠狼等),浣熊科动物(浣熊、小熊猫、大熊猫等),还可感染灵长类动物(如日本猕猴等),甚至有CDV感染人的病例.除病毒分离、病理包涵体检查、血清学检测、核酸探针、原位杂交等方法外,RT-PCR方法是目前检测CDV最常用的方法[1-3].