上海地区实验用兔线粒体DNA-RFLP分析

提取3个品种实验用兔肝组织中的线粒体DNA,并用ApaI等21种限制性内切酶进行消化。分析上海地区实验用兔mtDNA的多态性。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳检测,共检出8种不同的限制性单倍型,少数个体出现的差异,可能来源于几个位点发生偶然突变,但不同兔群的限制性无规律性。结果表明上海地区实验用兔群体mtDNA的遗传多样性贫乏,遗传结构单一,提示所研究的兔种可能有共同祖先,或人工饲养繁殖出现血缘杂交现象。     

微卫星标记在近交系及封闭群小鼠遗传质量检测中的初步应用

利用建立的小鼠微卫星检测方法,对来源于2个单位的近交系BALB/c小鼠和封闭群ICR小鼠进行了遗传分析,结果发现A单位BALB/c小鼠发生了遗传污染,有部分小鼠在部分微卫星位点发生了变异,而B单位BALB/c小鼠在所有的检测位点上的结果都与预期的BALB/c小鼠位点一致;对ICR 小鼠分析结果发现A单位ICR小鼠在22个位点的平均杂合度为0.379,平均多态信息量为0.308,属中度多态,B单位ICR小鼠的平均杂合度为0.287,平均多态信息量为0.227,属低度多态.结果表明微卫星标记可用于检测近交系小鼠的遗传质量,也可用于分析封闭群小鼠的遗传多态性,为一种有潜力的实验动物遗传学检测标记.     

肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用

根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。     

套式PCR方法在泰泽氏菌检测中的应用和验证

用泰泽氏菌RJ株感染的大鼠肝组织匀浆腹腔注射Scid小鼠和BALB／c小鼠，提取注射后小鼠肝、肾、肺、脾的DNA，PCR扩增，核酸杂交。根据泰泽氏菌的保守序列合成引物扩增泰泽氏菌的基因组DNA，建立了泰泽氏菌的套式PCR方法。并将此方法应用于Scid小鼠和BALB／c小鼠以及可疑样品的检测，其中Scid小鼠的肝、肾组织和BALB／c小鼠的肝组织及可疑组织得到特异性扩增带，其他动物样品和组织DNA均为阴性结果。进一步对该DNA片段进行核酸杂交，结果证实，凡PCR套式扩增为阳性的，均有杂交带。因此，泰泽氏菌套式PCR方法在实际检测中是切实可行，其具有敏感性和特异性高的优点。     

荧光原位杂交(FISH)技术在转基因小鼠检测中的应用

制备转基因小鼠特有的DIG标记探针，应用染色体荧光原位杂交（FISH）技术，对转基因小鼠外周血细胞的遗传性状进行分析，检测其合子类型，以挑选纯合子小鼠用于保种。结果杂合型小鼠61％的细胞有一个荧光信号，而纯合型小鼠约24％的细胞有两个荧光信号，48％的细胞有一个荧光信号，野生型小鼠无荧光信号。因此染色体荧光原位杂交技术可作为检测转基因小鼠遗传特性的一种方法。     

近交系小鼠微卫星位点遗传检测方法的建立

笔者设计了 3 4对特异性引物 ,以 PCR方法对部分近交系小鼠基因组微卫星多态性进行了检测和分析 ,在所有 3 4条引物扩增带中 ,有 2 5个微卫星位点的长度在不同品系小鼠中存在差异 ,不同品系小鼠之间微卫星长度多态性差异在3 8.3 %～ 5 8.8%之间。微卫星多态性分析是一种快速、经济的遗传监测近交系动物的方法 ,微卫星位点提供了检测近交系小鼠遗传特性的又一种新的方法     

伪狂犬病病毒沪株gE基因序列测定与比较分析

建立了伪狂犬病病毒的PCR检测方法,并将沪株伪狂犬病病毒的gE基因扩增片段进行测序和比较分析.根据伪狂犬病病毒gE和gB基因序列设计两对引物,以伪狂犬病病毒SH株DNA和单纯疱疹病毒Ⅰ型为模板,产物连接到pMD18-T Vector.重组质粒测序后与闽A株序列比较,同源性为98%,与Genebank中已登录的伪狂犬病病毒gE基因序列进行blast比较,同源性在97%以上.gE基因序列比较保守,在疫苗应用及分子诊断方面均有较大的价值.     

几株鸽新城疫病毒的核酸和蛋白质多态性分析

以La Sota毒株和分离到的4株分别来源于信鸽、肉鸽和鸡的新城疫毒株为研究对象，设计了3对引物用反转录－聚合酶链反应（RT－PCR）对它们的融合蛋白基因（F）进行分段扩增，并且采用SDS－PAGE进行结构蛋白分析。两者的综合结果显示毒株之间存在着差异关系，具有显著的多态性；来源于肉鸽的毒株与La Sota株最为接近，而来源于鸡的强毒株与La Sota株差异最显著；来源不同的2株信鸽之间有程度较轻的差异，肉鸽和信鸽的毒株之间差异较为明显，鸽新城疫和鸡新城疫之间的差异关系较为复杂。表明新城疫病毒存在高度变异性。     

一株猪副粘病毒的分子鉴定

以 1株从发病猪中分离到的副粘病毒( MP01株)为研究对象,用反转录-聚合酶链式反应( RT- PCR)对它的 F基因进行分段扩增、定向克隆到 pUC119质粒载体,然后测定它们的核苷酸序列,并推导出相应的氨基酸序列. MP01株的 F基因全长 1 662 bp,编码 553个氨基酸,它们的裂解位点的氨基酸序列为 112G- K- Q- G- R- L117,是 NDV弱毒株特有的序列结构.序列分析结果表明,它与国内标准毒株 F48E9的核苷酸同源率为 90%,氨基酸的同源率为 93%;它与弱毒株 La Sota的核苷酸同源率为 91%,氨基酸同源率为 94%.