SPF大白猪和长白猪CIITA基因剪接突变体的鉴定分析及在不同组织中的表达模式

为了鉴定分析SPF大白猪和长白猪CIITA剪接突变体，研究其在猪不同组织中的表达模式。本研究以5周龄的8头SPF大白猪和7头SPF长白猪为研究对象，设计特异性引物对CIITA基因进行扩增、克隆和测序，对获得的序列分析其剪接突变体特征，利用在线软件对不同剪接突变体进行生物信息学分析，同时利用荧光定量PCR方法检测CIITA基因剪接突变体在2头SPF长白猪8种组织中的表达模式。结果显示，在SPF大白猪和长白猪CIITA基因CDS区存在3种不同的剪接突变体（CIITA-A、CIITA-B和CIITA-C），其CDS长分别为939、984和1 698 bp。CIITA-A和CIITA-B突变体由于Exon 11部分核苷酸缺失（40和199 bp）使终止密码子提前，从而致使编码CIITA蛋白的结构域受到了剪接的影响，缺失了末端富含亮氨酸的4个重复结构域，蛋白结构发生了明显的改变。进化树结果表明，针对CIITA，猪与绵羊和牛具有较近的亲缘关系，在不同猪品种中具有较高的保守性。同时，CIITA不同剪接突变体在猪8种组织中均有表达，且表达量趋于一致，均在脾或肺中表达量较高，其次是肾、脊髓、甲状腺、肝、胸腺，在心脏中表达最低。本研究从SPF大白猪和长白猪上共获得了3个CIITA剪接突变体，其中两个蛋白结构缺失了4个富含亮氨酸的重复结构域，且不同剪接突变体在猪不同组织中均有表达，表达量稍有差异，为后续CIITA基因在机体内的免疫调控功能研究奠定了理论基础。     

1.1kb、2.7kb、3.0kb鸡输卵管组织特异性启动子的克隆及细胞评价

鸡卵清蛋白基因启动子是指导外源基因高效特异性表达的理想调控区,利用卵清蛋白启动子驱动外源蛋白大量表达,需要包含组织特异性相关序列。本研究以海兰白鸡的基因组为模板,采用PCR扩增了1.1 kb、2.7 kb和3.0 kb的卵清蛋白启动子区,置换pcDNA6.2-GFP中CMV启动子序列,构建了真核表达载体pOV1.1 kb-GFP、pOV2.7 kb-GFP、pOV3.0 kb-GFP;转染原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞(CHO),PCR、RT-PCR证明重组载体能够整合到细胞基因组内,并进行转录;倒置荧光显微镜下观测到绿色荧光蛋白表达;启动子表达效率由高到低依次是CMV启动子、1.1 kb、2.7 kb、3.0 kb卵清蛋白启动子。研究结果为瞬时表达模型的建立和输卵管生物反应器的研究奠定基础。     

不同免疫程序新城疫抗体消长规律分析

新城疫一直是严重危害我国养禽业的重要疾病,疫苗免疫是预防该病的主要手段[1].新城疫的免疫主要以体液免疫应答为主,疫苗主要有弱毒疫苗和灭活疫苗两种,应用中通过优化两种疫苗的免疫程序获得高水平而且持久的抗体来减少新城疫对家禽的危害.     

禽类实验动物发展的影响因素及对策(二)——我国禽类实验动物发展存在的问题与对策

1 我国禽类实验动物发展中存在的问题 　　1.1 以SPF鸡为核心的禽类实验动物生产种源不足 　　SPF鸡为核心的禽类实验动物生产的核心是种源问题,我国实验动物科技工作者本着两条腿走路的原则,在引进SPF鸡种卵的同时,积极培育中国SPF鸡基础群,经过努力已有2家企业建立了中国SPF鸡基础群,但依然不能达到国内供种的能力,引种时,各SPF鸡场都是各自为政地从国外进口种卵.由于办理手续很繁琐,种卵到机场后往往不能按时提货,这就严重影响SPF鸡种卵的质量,而且种卵价格昂贵,每枚13～20美元不等,国外供种尚存在受国外疫情变化影响种源的风险.……     

蒲草垫料水浸出物、醇浸出物、醚浸出物的急性毒性试验及小鼠饥饿试验研究

小鼠在正常状况下仅有撕咬垫料行为，在饥饿状态下少量嚼食薄草垫料，但不引起小鼠中毒。急性毒性试验表明，蒲草的水浸出物，醇浸出物，醚浸出物的ＬＤ５０分别大于蒲草２２．４、１５．７、１９．６ｇ／ｋｇ体重，灌胃后小鼠行为、反应正常，无中毒症状。４日后处死剖检结果，脏器亦无病变。大鼠经皮肤涂抹浸出物（每次剂量分别相当于蒲草７６．０、５３．３、６６．７ｍｇ／ｃｍ２，重复３次）后，无全身中毒症状，涂抹部位无临床上肉眼可见病变。兔滴眼试验（每次剂量分别相当于蒲草１２８．５、９０．２、１１２．７ｍｇ／ｋｇ体重，重复３次）证明，眼无临床上肉眼可见病变。大鼠经口及兔经皮试验亦得到相同结果。说明蒲草垫料的三种浸出物对动物无毒害作用。     

探索黑龙江省实验动物发展中存在问题的解决方案

实验动物作为生物医学的基础与支撑条件，倍受各国政府与科学家的重视，美、英、法及日本等国投入大量人力、物力和资金，不断改进实验动物的设施，以求提供高质量的标准动物及良好的动物实验条件。在我国实验动物法制化管理也不断加强，实验动物法制化、产业化和规范化也自然提到了议事日程。黑龙江省是制药大省、强省，实验动物发展水平至关重要。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

水貂源致病性黏质沙雷氏菌的分离鉴定与遗传进化分析

为确定水貂黏质沙雷氏菌的耐药状况、致病性及其遗传特征,本研究从黑龙江省患病死亡水貂中分离得到3株细菌,根据其形态特征、培养特性、生化试验及16S rRNA序列测定对分离菌进行鉴定;随后用K-B法测试分离株对常见的24种抗菌药的敏感性,并进行了致病性试验和遗传进化分析。结果显示,分离菌为黏质沙雷氏菌,对多种常用抗菌药物具有高度耐药性;可引起试验组小鼠100%死亡;分离株与来自活性污泥与火山堆积物环境的菌株遗传亲缘性最近。表明黑龙江省水貂中存在黏质沙雷氏菌的感染,分离株耐药现象较严重并具有很强的致病性,同时提示该菌株可能来源于环境中。本试验从水貂中分离得到致病性黏质沙雷氏菌为首次报道,研究结果可作为该菌感染水貂导致相关疾病的检测、鉴别和预防依据。     

提高母牛繁殖率的方法

<正>抓好奶牛繁殖配种工作,提高母牛繁殖率,是奶牛场与养牛户十分重要的工作内容。笔者在生产实践中发现,母牛产犊后长期不发情的情况很多,发情正常但多次配种不孕的牛也很多;还有已配准妊娠     

正确认识“自家苗”

随着养殖多元化以及国内现有兽医生物制品种类的缺乏,国内也开始使用自家苗。现在自家苗有效这种思想,对兽医生物制品市场以及养殖业产生了一定的影响。现在国内所报道的自家苗,并不是规范的自家苗,仅仅现地分离病原体制备的灭活苗。自家苗（autogenous vaccine）本质上有两种,一种是自体疫苗,即收获感染自体的病原材料制备疫苗用于自体疾病的治疗,而另外一种即为现行的自家苗。现在一些发达国家的自家苗研究已经发展起来,自家苗开始广泛的使用。而我国在这方面有一定的差距。本文结合英国、