关中地区温室越冬茬番茄黄化曲叶病毒病分子鉴定及流行规律

为了明确关中地区越冬茬番茄黄化曲叶病毒病发生和流行规律,通过分析该病发生与番茄品种、定植期及传播介体烟粉虱之间的关系,并采用PCR技术对田间病原进行分子鉴定。结果表明,番茄黄化曲叶病毒病在8月中下旬至11月上中旬开始侵染,翌年3月中下旬发生再侵染,秋季病情减轻;烟粉虱种群数量与病害发生程度呈线性正相关;不同番茄品种对番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的抗性差异显著,其中大番茄品种布鲁尼1288和DRW7728,小番茄品种千禧和美红对该病表现为免疫;分子检测结果表明,4个样品中均扩增出543 bp的特异片段,与NCBI数据库Gen Bank的TYLCV序列(登录号为GU084381、KC138544.1、KC138543.1和JX456642.1)的相似性达99%。研究表明,关中地区番茄病毒病为番茄黄化曲叶病毒病,番茄品种、定植期及烟粉虱发生动态是影响该病发生的主要因素。     

不同授粉方式对日光温室番茄生长及品质的影响

[目的]分析熊蜂在河西高海拔冷凉区日光温室番茄上的授粉行为及对营养品质的影响。[方法]以koppert熊蜂为材料,观察熊蜂日活动规律,确定其适宜活动的温室温湿度;比较分析生产中常用的熊蜂授粉、振荡器授粉和蘸花授粉3种授粉方式对日光温室番茄产量、品质及效益的影响。[结果]熊蜂授粉和震荡授粉对温室番茄的坐果和产量影响不明显,但可显著降低畸裂果率,提高果实可溶性固形物、可溶性糖、有机酸、V_C含量;熊蜂授粉较蘸花授粉减少生产投入52.4%,震荡授粉较蘸花授粉减少生产投入34.9%。[结论]在人工紧缺或条件适宜的地区,可推广使用熊蜂授粉和震荡授粉技术。     

番茄渣青贮过程中品质动态变化规律的研究

为研究番茄渣青贮过程中品质的动态变化规律,选用鲜番茄渣进行青贮,分别于发酵的第1、2、3、5、7、10、15、30、45和60d取样进行感官评定及pH、乳酸、挥发性脂肪酸和营养成分的测定。结果表明:在整个青贮过程中,番茄渣青贮饲料感官评定等级均达到优等;不同青贮时间,番茄渣青贮饲料pH差异不显著(P0.05),乳酸、乙酸、丁酸等质量分数差异显著(P0.05),粗蛋白(CP)和中性洗涤纤维(NDF)质量分数差异显著(P0.05);随着青贮发酵时间的延长,乳酸和乙酸质量分数呈现先上升后趋于稳定的趋势,丁酸质量分数整体表现下降的趋势;番茄渣经青贮后CP和NDF质量分数上升。可见,在本试验条件下,青贮可提高番茄渣的营养价值,改善番茄渣的饲用价值,解决番茄渣贮藏的难题。     

日光温室番茄褪绿病毒病的发生规律及其与Q型烟粉虱种群动态关系

为有效控制日光温室番茄褪绿病毒病,于2014—2015年通过RT-PCR检测方法研究了济南市日光温室番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)的发生规律、其与Q型烟粉虱Bemisia tabaci种群动态的关系及防虫网对该病毒病的防控效果。结果表明,春季日光温室番茄植株上Q型烟粉虱成虫数量呈增长趋势,5月下旬最高达到0.10头/叶,秋季日光温室番茄植株上Q型烟粉虱成虫数量9月上旬达最高7.42头/叶,后逐渐下降;日光温室Q型烟粉虱带毒率随着定植时间的延长而逐渐上升,之后维持相对稳定状态,即春季为20.00%~24.14%,秋季为30.00%~40.00%。日光温室ToCV发生与Q型烟粉虱成虫数量和带毒率密切相关,春季番茄最高发病率为12.00%;秋季番茄植株最高发病率为93.02%。番茄育苗和生长期用100目防虫网隔离可显著降低番茄植株带毒率。因此,秋季是日光温室ToCV防控关键期,覆盖防虫网阻隔烟粉虱可有效防治ToCV,推荐在日光温室使用。     

Vegetative compatibility of cotton-defoliating <Emphasis Type="Italic">Verticillium dahliae</Emphasis> in Israel and its pathogenicity to various crop plants

Verticillium dahliae isolates recovered from a new focus of severe Verticillium wilt of cotton in the northeast of Israel were tested for vegetative compatibility using nitrate non-utilizing (nit) mutants and identified as VCG1, which is a new record in Israel. Other cotton isolates of V. dahliae from the northern and southern parts of the country were assigned to VCG2B and VCG4B, respectively. VCG1 isolates induced severe leaf symptoms, stunting and defoliation of cotton cv. Acala SJ-2, and thus were characterized as the cotton-defoliating (D) pathotype, whereas isolates of VCG2B and VCG4B were confirmed as the earlier described defoliating-like (DL) and non-defoliating (ND) pathotypes, respectively. This is the first record of the D-pathotype in Israel. The host range of representative isolates of each VCG-associated pathotype was investigated using a number of cultivated plants. Overall, the D isolates were more virulent than DL isolates on all tested host plants, but the order of hosts (from highly susceptible to resistant) was the same: okra (Hibiscus esculentus local cultivar), cotton (Gossypium hirsutum cv. Acala SJ2), watermelon (Citrullus lanatus cv. Crimson Sweet), safflower (Carthamus tinctorius cv. PI 251264), sunflower (Helianthus annuum cv. 2053), eggplant (Solanum melongena cv. Black Beauty), and tomato (Lycopersicon esculentum cv. Rehovot 13). The pattern of virulence of ND isolates differed from that of D and DL isolates, so that the former were highly virulent on eggplant but mildly virulent on cotton. Tomato was resistant to all cotton V. dahliae isolates tested. RAPD and specific PCR assays confirmed that the D isolates from Israel were similar to those originating from other countries.     

番茄NAM基因的克隆与遗传转化

为了研究番茄NAM基因的功能,利用RT-PCR技术从番茄cDNA中分离了NAM(GenBank登录号:FJ435163.1)基因,该基因ORF全长1 053 bp,共编码351个氨基酸,N端含有NAC结构域.定量RT-PCR分析结果表明,该基因在番茄的根、茎、叶、花和果实中均有较强表达.为了进一步研究番茄NAM基因的功能,构建了NAM基因的超表达载体pLP100-35S-NAM,通过农杆菌介导法转化番茄,并获得抗性植株.经表型分析,转基因番茄植株矮小,生长受到抑制,叶片形态异常,表明NAM基因影响番茄顶端分生组织(SAM)的形成和叶片形态的发生.     

基于YUV颜色模型的番茄收获机器人图像分割方法

在研究番茄收获机器人对目标图像分割识别时,经常由于采集的图像受光照影响以及分割识别算法的计算复杂性而影响到识别的准确性和实时性.通过比较RGB、HSI、YUV等颜色模型的特点,从理论上分析了YUV颜色模型应用于收获机器人视觉系统的可行性,提出了一种基于YUV颜色模型的成熟番茄分割方法.同时综合实验及经验确定了成熟的红色番茄在RGB、HSI、YUV颜色模型中阈值范围,采用直接确定色差阈值的双阈值分割算法识别成熟番茄,并对3种颜色模型在不同的光照条件下的分割识别效果进行实验对比.实验结果证实,将基于YUV颜色模型成熟番茄分割方法应用于番茄收获机器人视觉识别系统,能很好地解决其鲁棒性和实时性问题.     

应用纳米磁珠实时荧光定量PCR方法检测番茄黄化曲叶病毒

In order to develop a rapid, sensitive and specific qPCR assay for detection and quantification of Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV), a pair of primers and TaqMan probe were designed according to the conserved sequence of known TYLCV isolates. Combining with MNP technique, a novel MNP-qPCR detection method was established and verified based on specificity, sensitivity and reproducibility tests. The results indicated that the Ct value of plotted standard curve showed good linear relationship(R² =0.9994)with the log of copy number of template. The established method showed a high specificity for TYLCV detection without crossing reaction with Tomato severe leaf curl virus and Tomato yellow leaf curl Sadinia virus, and was 10-fold more sensitive than routine PCR. Both coefficients of variation were less than 2%, indicating a good reproducibility. We have provided a novel method for detection of TYLCV in plant samples rapidly and quantitatively.     

南方番茄青枯病抗性评价

为了解国内番茄青枯病抗病资源遗传背景,采用田间种植法和接种法,2011—2012年对全国各地127个品种和208份材料进行青枯病抗性评价。结果表明：127个品种全部发病死亡,只有3个品种收到第1个红果,大果抗源较少,小果抗病材料较多,依据2年平均发病率进行抗性评价分级,小果H7997不发病,樱桃果T16不发病,T17、T8属抗病资源,T4、T6、T7、T381、T390发病较轻。     

基于微流控芯片电泳的番茄黄化曲叶病毒快速检测

【目的】探索微流控芯片电泳方法在PCR产物检测方面的效果,并建立针对番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）的微流控芯片电泳检测方法,弥补琼脂糖凝胶电泳方法在试剂消耗、所用时间、安全性方面的缺陷。【方法】通过对TYLCV的基因组进行分析后,在该基因组中相对稳定的位置设计引物,同时兼顾引用已被研究者研究过的引物,对这些选择的引物进行特异性、稳定性、灵敏度等方面的验证,筛选出用于后续试验的引物。选择DNA标准物φX174/BsuR I(Hae Ⅲ) marker,分别进行琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳,对二者在耗材、耗时和灵敏度方面进行比较,确定微流控芯片电泳在核酸检测方面的应用价值。利用筛选出的其中1对引物对番茄叶片的实际样品进行PCR扩增,随后通过微流控芯片电泳对其进行检测,以此探讨微流控芯片电泳在病毒检测方面的检测效果。【结果】共筛选出14对TYLCV备用引物,其中2对引自文献,12对为本文设计,每对引物均可满足微流控芯片检测要求。选择其中1对引物TYLCV-T作为随后的研究对象。利用琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳对DNA标准物检测,结果表明微流控芯片电泳在耗时方面不足琼脂糖凝胶电泳的1/10,约为13 min,试剂消耗为琼脂糖凝胶电泳的1/8,检测灵敏度方面至少比琼脂糖凝胶电泳高103倍,根据DNA标准物原液浓度计算可知,微流控芯片电泳至少可准确检测到浓度为5×10-6 μg?μL-1的核酸样品。利用微流控芯片电泳对TYLCV-T扩增的TYLCV PCR产物进行检测,将检测峰值图与DNA标准物的峰值图时间比较,就可判断出产物峰的大小范围。【结论】筛选出的关于TYLCV的备用引物可作为进一步研究微流控芯片技术在该病毒检测方面的基础;通过将琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳进行比较,确立了后者在核酸检测方面的应用价值;通过微流控芯片电泳对TYLCV PCR产物的检测,建立了基于微流控芯片电泳的TYLCV快速检测方法,为TYLCV的快速检测提供新的技术支持。