氯嘧磺隆降解菌筛选及基于16S rDNA序列的系统学分析

氯嘧磺隆是长残留除草剂,污染土壤后影响土壤肥力和后茬作物生长。筛选氯嘧磺隆降解菌21株,纯培养条件下,7 d对初始浓度50 mg/L氯嘧磺隆的降解达到0.75%~80.77%。对筛选到的氯嘧磺隆降解菌进行了16S rDNA基因扩增、序列测定和系统学分析,结果显示,所选菌株在系统发育地位上分别属于肠杆菌、短杆菌、柠檬酸杆菌、志贺氏菌、寡养单胞菌、无色杆菌、假单胞菌等7个属。     

K88 ad ETEC菌毛蛋白亚基基因faeC的克隆、表达及多克隆抗体的制备

为研究毒素源性大肠杆菌(ETEC)菌毛蛋白分子装配机理，从K88 ad ETEC中PCR扩增出K88菌毛蛋白小亚基基因片段facC，然后将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a( )中，获得重组质粒pET30C，并将该质粒转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中；重组菌株经IPTG诱导后，经过SDS-PAGE分析表明该菌株可以表达FaeC蛋白(16.9kDa)，且重组蛋白主要以包涵体形式存在，约占菌体蛋白的30％。用分离纯化的重组FaeC蛋白免疫小鼠，获得FaeC的鼠抗血清，经免疫学分析表明，利用此重组蛋白制备的抗血清与FaeC重组蛋白及K88 ad ETEC的菌毛蛋白都能发生特异性抗原-抗体反应。     

利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究(英文)

[目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。     

利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究

[目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位与产气荚膜梭菌β1、β2毒素融合基因的构建及表达

为了构建含大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与产气荚膜梭菌β1、β2毒素融合基因的表达菌株,试验将亚克隆LTB基因融合到β2-β1毒素基因的上游,构建了pET30a-LTB-β2-β1原核表达载体,经IPTG诱导表达,对其表达产物进行SDS-PAGE检测和Western-blot分析。结果表明:重组菌株可以表达LTB-β2-β1融合蛋白,且该融合蛋白可以被相应的抗体识别。     

牛分枝杆菌溶血磷脂酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

为研究牛分枝杆菌(M.bovis)溶血磷脂酶基因在致病机理中的作用,本研究构建了表达M.bovis的溶血酶(LIP)基因的重组质粒pET30a-LIP,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹实验表明,原核表达的蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,具特异的免疫反应性。     

Vc对黑色素癌细胞A375生长抑制作用的研究

[目的]探讨Vc对黑色素癌细胞A375的生长抑制作用。[方法]利用MTT法分析不同剂量组的Vc对A375增殖的影响,并通过荧光染色和荧光显微镜观察A375细胞的形态学变化,用流式细胞术检测Vc对各组A375的细胞周期变化。[结果]流式方法测定的结果显示,Vc对黑色素癌细胞A375的增殖具有抑制作用;Vc能以浓度依赖和时间依赖方式阻滞黑色素癌细胞A375细胞于G0/G1期,抑制其生长并诱导凋亡。[结论]Vc对黑色素癌细胞的生长有明显抑制作用。     

奶牛结核分支杆菌临床分离株耐药性表型检测

结核分支杆菌标准药敏试验是用L-J或Middlebrook7H10培养基进行直接或间接药敏试验,但出现结果需6～8周.BACTECTB-460放射性液体培养基检测法[1]、MTT法[2]、流式细胞仪测定[3]被用来检测结核杆菌的耐药性,但由于设备和试剂限制了方法的推广.     

C型产气荚膜梭菌病单价和二价混合灭活苗与三价灭活苗免疫效力比较

为了比较C型产气荚膜梭菌病单价和二价混合灭活苗与三价灭活苗的免疫效力,试验制备了单价和二价混合灭活苗与三价灭活苗,并接种奶牛及ICR小鼠,分别进行静脉采血,观察抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物的情况.结果表明:制备的抗血清可以中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2的剂量为1LD100,ICR小鼠血清毒...     

幼畜腹泻双价基因工程苗对牛和羊的攻毒保护试验

用幼畜腹泻双价基因工程苗以两种剂量（正常免疫剂量和１／２免疫剂量）分别免疫接种怀孕母牛和怀孕母羊，待其分娩并保证其所产幼畜（犊牛，羔羊）采食初乳后，经口灌服致幼畜腹泻的强毒活菌，结果，正常免疫剂量组，犊牛腹泻发病率为１４．３％，死亡率为零；羔羊腹泻发病率为１５．８％，死亡率为２．７％，１／２免疫剂量组，犊牛腹泻发病率为３０．７％，羔羊腹泻发病率为２４．４％，死亡率为１２．２％，未接种疫苗的对照组，