水泡性口炎病毒核酸疫苗对BALB/c小鼠免疫原性研究

成功构建了pIRES-G1500基因的重组核酸疫苗质粒,用核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,测定注射质粒的小鼠细胞免疫和体液免疫指标相关参数的变化,评价核酸疫苗在体内表达效果。     

非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72在大肠杆菌中的表达

利用PCR技术，从含非洲猪瘟（ASFV）P72基因的克隆质粒BBBBPr4中扩增出1．94kb的P72基因．将P72基因和表达栽体pET-30c（＋）分别用限制性核酸内切酶Fba Ⅰ／XHoⅠ和BamHⅠ／XHoⅠ进行双酶切，然后在T4DNA连接酶作用下，将P72基因定向克隆至栽体pET-30c（＋）中相应位点上，并转化至宿主菌BL21（DE3）中，得到了重组菌株BL21（DE3）（pET—ASFvP72）。经PCR鉴定，构建的重组菌株中合有P72基因。重组菌株BL21（DE3）（pET-ASFVP72）经IPTG诱导后，其表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明衣壳蛋白P72基因可以在受体菌中高效表达，达到了菌体总蛋白的34％，表达产物的分子量约为78Ku，并能被ASFV抗体所识别。     

表达CPB—ST融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜菌β－毒素和大肠埃希氏菌ＳＴ融合蛋白的基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３,ｐＥＣＢ－ＳＴ１）及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从ＩＰＴＧ诱导的工程菌株中提取的包涵体和经甲醛灭活的工艺菌株全菌体制备抗原免疫小白鼠,攻毒试验结果表明,免疫小白鼠能分别抵抗１ＭＬＤ的Ｂ型产气荚膜梭菌强毒株和产ＳＴ的大肠埃希氏菌工程菌株ＨＢ１０１（ｐＳＬＭ００４）的攻击。     

基因工程菌株BL21(DE3)(pECB-ST1)菌种的限定代次及保存条件试验

本文对基因工程菌株BL21(DE3)(pECB-ST1)菌种的限定代次及保存条件进行了详细研究.实验结果证实,基因工程菌株BL21(DE3)(pECB-ST1)基础种子体外传至10代,其效力、培养特性均不发生变化,表明基因工程菌株BL21(DE3)(pECB-ST1)是一株良好的疫苗生产菌株.基因工程菌株BL21(DE3)(pECB-ST1)甘油菌种和冻干菌种分别在-20℃保存2年和3年,菌种的数量未明显减少,说明在这两种条件下保存菌种是可行的.     

牛结核分枝杆菌临床分离株rpoB、KatG基因突变分析

为了解牛结核分枝杆菌临床分离菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)的分子耐药机制,本研究采用噬茵体生物扩增法对分离并鉴定的25株牛结核分枝杆茵进行药敏分析.筛选出9株耐利福平、异烟肼菌株.PCR扩增耐药株rpoB基因片段(213bp)和KatG基因片段(458bp)并测序.通过对耐药基因的测序分析,5株利福平耐药株rpoB基因在53l位(RNA聚合酶β-亚基编码基因起始密码子起,下同)、526位点、511位点发生突变,其中有3株rpoB基因531位点发生突变,1株rpoB基因526位点突变;1株rpoB基因在531位点和511位点发生了较为少见的联合突变;4株异烟肼耐药菌株,其中2株在315位点(KatG蛋白编码基因起始密码子起,下同)发生碱基突变,2株在463位点发生碱基突变.     

产肠毒素性大肠杆菌疫苗研究概况

产肠毒素性大肠杆菌（简称ETEC）是引起仔猪腹泻的主要病原之一。在家畜中,尤以初生幼畜特别易感。并引起生长发育迟缓,生产能力低下,甚至造成死亡。给畜牧业造成很大损失。ETEC肠毒素基因和菌毛蛋白（黏附素）基因对于ETEC的致病性起主要作用。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗为疫苗的研制提供了新的思路。本文概述并评价了各类产肠毒素性大肠杆菌疫苗．并简要介绍了产肠毒素性大肠杆菌疫苗最新的进展。     

外泌体在机体抗结核分枝杆菌感染中的作用及其应用

结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的严重危害人类健康的主要传染病之一,全球每年都会有数百万人死于结核病,但目前结核病的预防和治疗仍然未取得重大突破。外泌体(exosomes)是一种多种细胞均可分泌的囊泡结构,其内含有多种成分,它在细胞间的信息传递、机体免疫等生理过程中发挥着重要的作用。近年来的研究发现,外泌体与结核病的发生发展有密切的联系,外泌体与结核病的研究已经成为当前的研究热点之一,其在结核病的诊断和治疗中的潜在价值也越来越受到人们的关注。本文就外泌体在机体抗结核分枝杆菌感染中的作用及其应用的相关研究进展进行综述。     

雷帕霉素在卡介苗(BCG)感染小鼠RAW264.7细胞过程中对NO的调控作用

巨噬细胞产生的一氧化氮(nitric oxide,NO)在抵御及杀灭病原微生物过程中起重要作用。为了解哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染宿主巨噬细胞过程中对NO的调控作用,本研究在卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染体外培养的BALB/c小鼠(Mus musculus)巨噬细胞系RAW264.7过程中添加mTOR信号通路的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin),通过Griess、实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测NO及诱导性一氧化氮合成酶基因(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA及其蛋白的表达情况,同时以脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)处理的RAW264.7细胞作为参照。结果表明,与未经处理的空白对照组相比,BCG、LPS刺激6、12和24 h可以极显著增加RAW264.7细胞中NO的产生(P0.01),iNOS mRNA及其蛋白水平表达极显著增加(P0.01)。与未添加rapamycin组相比,BCG感染6和12 h时,10 nmol/L rapamycin可以极显著抑制RAW264.7细胞中NO的产生及iNOS的表达(P0.01),但24 h时rapamycin对产生NO的抑制作用不显著(P0.05),但同样可以极显著抑制iNOS的表达(P0.01);LPS刺激6和24 h时,10 nmol/Lrapamycin可以极显著抑制RAW264.7细胞中NO的产生(P0.01);12 h时,显著抑制NO的产生(P0.05);LPS刺激时,6 h时rapamycin对iNOS的表达的抑制作用不显著(P0.05),12和24 h时极显著抑制iNOS的表达(P0.01)。结果显示,rapamycin在MTB感染宿主巨噬细胞过程中对NO的产生有重要的调控作用,为揭示mTOR信号通路在结核病发生及发展过程中的作用提供重要的理论依据。     

苦豆草生物碱体外抑菌试验

苦豆草系豆科植物苦豆子Sophoraal-opecuroides L·的干燥地上部分,为西北地区常用中草药之一,宁夏地区俗称苦豆秧。在历代本草中,本品均未见收载,1977年始载于我国《药典》。近年来,西北中草药手册中常有收载。据《药典》记载:苦豆草,性味苦寒,有毒,能清肠、燥湿,用于急性菌痢、肠炎。《中药志》记载:苦豆根,味苦性寒,能清热解毒,燥湿杀虫,用于急性菌痢、肠炎、腹泻。《中药研究文献     

BCG感染巨噬细胞后内质网应激对细胞焦亡的调控作用

旨在探讨牛分枝杆菌疫苗株卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）感染人单核巨噬细胞THP-1细胞后内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）对细胞焦亡的调控作用及分子机制。在BCG单独感染THP-1细胞或与ERS抑制剂TUDCA共处理细胞后,采用qRT-PCR检测ERS标志性分子GRP78,细胞焦亡标志性分子GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达,采用Western blot检测GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3在蛋白水平的表达,采用ELISA检测IL-1β和IL-18的释放量,采用CCK-8检测细胞存活率。结果表明：在BCG单独感染THP-1细胞不同时间后,GRP78在mRNA水平和蛋白水平的表达均随感染时间延长而升高（P<0.01）,GSDMD蛋白表达在24 h达到最高,IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达呈时间依赖性（P<0.01）。在BCG单独感染或与TUDCA共同作用细胞24 h后,与未感染对照组相比,BCG感染组GRP78、GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA水平表达上调（P<0.05）,GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3蛋白水平表达上调（P<0.001）,IL-1β和IL-18的浓度增加（P<0.01）,细胞存活率下降（P<0.001）,而经TUDCA预处理的BCG感染组与BCG单独感染组相比,以上分子的表达下降,细胞存活率上升（P<0.01）。综上表明,在BCG感染THP-1细胞后,引起的ERS对细胞焦亡具有调控作用。