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31.
牛肺泡巨噬细胞微小RNA的克隆与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
MicroRNA(miRNA)是一类长19~26个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA,其异常表达将会导致生理的异常和疾病的产生.为了研究miRNAs在牛肺泡巨噬细胞抗菌机制中的作用,构建了牛肺泡巨噬细胞miRNA cDNA文库,从438个克隆中筛选出22个miRNAs,其中有19个miRNAs在牛的miRBase数据库中没有发现,但是有8个miRNAs与人和(或)鼠中的序列完全同源,因此,将它们命名为Bta-miR-141、Bta-miR-187、Bta-miR-191、Bta-miR-448、Bta-miR-589、Bta-miR-873、Bta-miR-463和Bta-miR-562;另外有11个miRNAs在所有miR-Base数据库中都没有发现,有待进一步研究.这些数据为研究miRNAs调控牛肺泡巨噬细胞抗菌机制奠定了基础. 相似文献
32.
本研究建立1种双重PCR技术,用于区分鉴定结核与非结核分枝杆菌.在最佳扩增反应条件下.检测引物P1、P2和P3、P4扩增结核分枝杆菌的特异性及敏感性,并对19株结核分枝杆菌和9株非结核分枝杆菌临床分离株进行扩增鉴定.结果表明,引物P1、P2能扩增所试13株结核和非结核分枝杆菌,P3、P4仅扩增结核分枝杆菌复合群菌种,两对引物同时扩增3种非分枝杆菌均为阴性.两对引物双重PCR检测结核分枝杆菌DNA的敏感性分别为100pg/μl和10pg/μl.检测28株临床分离株,结核分枝杆菌可扩增出368bp和225bp 2条带,非结核分枝杆菌仅扩增出一条361bp~383bp带.因此,该双重PCR技术的建立为结核及非结核分枝杆菌的快速鉴定提供了1个可供选择的手段. 相似文献
33.
白藜芦醇对黑色素癌细胞A375生长的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨自藜芦醇对黑色素癌细胞A375的体外生长的影响和作用机制.利用MTT法分析25、50、100、150和200μmol/L 5个浓度的白藜芦醇对A375细胞增殖的影响,并通过Hoschest染色和荧光显微镜观察A375细胞的形态学变化,流式细胞仪检测各浓度白藜芦醇对A375细胞的细胞周期影响作用.结果表明,白藜芦醇对黑色素癌细胞A375增殖的抑制作用明显,且白藜芦醇对A375细胞在G1期和S期的阻滞作用具有一定的浓度依赖和时间依赖效应,抑制其生长并诱导凋亡,在荧光染色观察到A375细胞出现典型的凋亡细胞形态特征.这表明白藜芦醇对黑色素癌细胞的生长有明显抑制作用,这将为其作为抗癌药物临床治疗黑色素癌提供参考作用. 相似文献
34.
[目的]探讨Vc对黑色素癌细胞A375的生长抑制作用。[方法]利用MTT法分析不同剂量组的Vc对A375增殖的影响,并通过荧光染色和荧光显微镜观察A375细胞的形态学变化,用流式细胞术检测Vc对各组A375的细胞周期变化。[结果]流式方法测定的结果显示,Vc对黑色素癌细胞A375的增殖具有抑制作用;Vc能以浓度依赖和时间依赖方式阻滞黑色素癌细胞A375细胞于G0/G1期,抑制其生长并诱导凋亡。[结论]Vc对黑色素癌细胞的生长有明显抑制作用。 相似文献
35.
为研究牛分枝杆菌(M.bovis)溶血磷脂酶基因在致病机理中的作用,本研究构建了表达M.bovis的溶血酶(LIP)基因的重组质粒pET30a-LIP,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹实验表明,原核表达的蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,具特异的免疫反应性。 相似文献
36.
半胱氨酸蛋白酶是植物体中重要的蛋白水解酶,广泛参与种子萌发、幼苗发育、胁迫响应和组织分化衰老等生理过程.我们对水稻中半胱氨酸蛋白酶基因OsCF2 (Oryza sativa cysteine protease 2)序列进行分析.该基因cDNA全长2 279 bp,由2个外显子和1个内含子组成;包含1个1 089 bp的开放读码框,编码1个含362个氨基酸残基的蛋白,在蛋白氨基端有-36个氨基酸组成的信号肽.生物信息学分析表明,OsCP2与大麦半胱氨酸蛋白酶HvCP同源性最高,同属木瓜蛋白酶亚家族.另外,我们构建了pET32a/CP2原核.表达载体,通过转化大肠杆菌BL21DE3,成功表达了OsCP2重组蛋白.分子量约为58kD;通过纯化包涵体获得了纯度高达90%以上的重组OsCP2蛋白,这为进一步研究该基因的功能提供了基础. 相似文献
37.
肿瘤坏死因子的体外诱生及检测 总被引:2,自引:0,他引:2
试验以BCG和LPS为诱导物,在体外培养条件下刺激小鼠腹腔巨噬细胞诱生TNF,培养上清对L929细胞具有细胞毒作用。结果显示,PEC具有良好的体外诱生TNF的能力,产生了并分泌TNF的最佳条件是LPS浓度为1μg/mL,培养时间为8h;改良的结晶紫染色测定TNF活性的方法具有简便,快速,易于重复等优点。 相似文献
38.
39.
本试验旨在研究奶牛结核分枝杆菌rpoB和katG基因突变与耐药性之间的关系。将临床分离的30株牛源结核分枝杆菌,利用噬菌体生物扩增法(phage amplified biologically assay,PhaB)检测其对利福平(RFP)和异烟肼(INH)的药物敏感性,采用聚合酶链式反应—DNA直接测序法(PCR-DS)扩增rpoB和katG基因并测序,分析rpoB和katG基因突变及其耐药相关性。15株表型耐药菌株中4株单耐RFP,PCR产物直接测序后发现3株在rpoB基因531位点发生突变,突变率为75.00%(3/4);9株单耐INH菌株中7株发生突变,6株katG基因315位点基因突变,突变率为85.71%(6/7),1株发现463位点密码子基因突变,突变率为14.29%(1/7);2株耐RFP的同时也对INH耐药,测序发现2株均在rpoB基因的531位点〖JP2〗和katG基因的315位点发生突变。所有菌株均未发现rpoB和katG基因的缺失。rpoB基因531位点和katG基因315位点的突变是RFP和INH产生耐药性的主要机制;检测牛源结核分枝杆菌RFP耐药性的同时可以初步筛选耐多药结核分枝杆菌。 相似文献
40.
奶牛副伤寒的诊断和病原分离鉴定王玉炯,徐桂珍,徐洋(宁夏农学院,银川750105)杨久海,孟克俭,杨鹏,郭劲松,史玉花,王少金,牟平,任金让(宁夏平吉堡奶牛场)据资料报道,牛的副伤寒病主要由肠炎沙门氏菌、都柏林沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌引起,该病多发生... 相似文献