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旨在探讨牛分枝杆菌疫苗株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核巨噬细胞THP-1细胞后内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)对细胞焦亡的调控作用及分子机制。在BCG单独感染THP-1细胞或与ERS抑制剂TUDCA共处理细胞后,采用qRT-PCR检测ERS标志性分子GRP78,细胞焦亡标志性分子GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达,采用Western blot检测GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3在蛋白水平的表达,采用ELISA检测IL-1β和IL-18的释放量,采用CCK-8检测细胞存活率。结果表明:在BCG单独感染THP-1细胞不同时间后,GRP78在mRNA水平和蛋白水平的表达均随感染时间延长而升高(P<0.01),GSDMD蛋白表达在24 h达到最高,IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达呈时间依赖性(P<0.01)。在BCG单独感染或与TUDCA共同作用细胞24 h后,与未感染对照组相比,BCG感染组GRP78、GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA水平表达上调(P<0.05),GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3蛋白水平表达上调(P<0.001),IL-1β和IL-18的浓度增加(P<0.01),细胞存活率下降(P<0.001),而经TUDCA预处理的BCG感染组与BCG单独感染组相比,以上分子的表达下降,细胞存活率上升(P<0.01)。综上表明,在BCG感染THP-1细胞后,引起的ERS对细胞焦亡具有调控作用。 相似文献
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本研究旨在检测重组结核分枝杆菌10 ku培养滤液蛋白(culture filtrate protein 10,CFP10)对肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞Toll样受体(TLRs)信号途径及其介导的炎症反应的影响。PCR扩增cfp10目的基因片段,构建重组质粒载体pCzn1-CFP10。将重组质粒pCzn1-CFP10转入BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白CFP10(rCFP10)并鉴定,纯化rCFP10,去除内毒素及脱盐备用。设置对照组,利用MTT检测rCFP10对A549细胞的存活率的影响;通过qRT-PCR、Western blot及ELISA等技术,分别在转录和翻译水平检测rCFP10对A549细胞TLRs信号途径关键分子及其下游炎症因子表达的影响。结果显示,成功构建重组表达载体pCzn1-CFP10并表达纯化出高纯度的rCFP10。MTT结果显示,随着rCFP10浓度增加和处理时间延长,A549细胞存活率显著降低。与空白对照组相比,rCFP10分别从转录和翻译水平显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)上调A549细胞中TLRs途径关键分子TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平。rCFP10蛋白可以通过激活A549细胞TLRs受体信号途径促进细胞炎症因子的分泌,这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据。 相似文献
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将禽巴氏杆菌荚膜粗提物经SephadexG—200分子筛凝胶过滤层析,获得纯化荚膜抗原;然后用反相蒸发法制备脂质体-荚膜抗原(A组),并以单纯荚膜抗原(B组)、禽霍乱“731”菌苗(C组)作对照,进行免疫试验,以酶标单克隆抗体间接ELISA,分别检测IgM和IgG的效价.结果,免疫后3个组的IgM效价相差都不显著(P>0.05),A组的IgG效价明显增高,与其他两组差异非常显著(P<0.01).3个组的IgM、IgG消长规律一致,IgM于免疫后7d开始上升,峰值在14d,其后下降迅速,第8周后降至免疫前水平,IgG于免疫后14d开始明显上升,峰值在28d,其后缓慢下降.保护率,A、B、C组分别为67%、33%、33%.结果表明,脂质体对禽巴氏杆菌荚膜抗原具有明显的佐剂作用. 相似文献
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用幼畜腹泻CPB-ST双价基因工程苗对1628头孕孕母牛,2343只怀孕弱羊进行免疫接种,所有接种的怀孕母畜均无任何不良反应,所产幼畜均发育正常。免疫母牛共产犊牛1628头,发生腹泻者88头,发病率为5.4%,死亡26头,死亡率为1.59%,与对照组(发病率46.7%、死亡率28.9%)相比,两组的发病率和死亡率均呈极显著差异(P〈0.01)。免疫母羊共产羔羊2347只,发生腹泻者136只,发病率 相似文献
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58.
白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用 总被引:2,自引:1,他引:1
[目的]探讨白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721体外生长的影响和作用机制。[方法]利用MTT法检测不同剂量组的白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,通过Hoechst染色和荧光显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721细胞核的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721作用的周期变化与凋亡分析。[结果]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,白藜芦醇阻滞肝癌细胞SMMC-7721于S期。[结论]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721生长具有抑制作用,使其细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡。 相似文献
59.
肿瘤坏死因子体内抗瘤活性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文以S180瘤细胞株为靶细胞建立了动物肿瘤模型,分别以TNF单用、TNF-CTX合用和脂质体-TNF复合物三种给药方式,进行了肿瘤坏死因子(TNF)体内抗瘤试验。结果TNF-CTX合用,具有协同抗瘤作用,且能减轻副作用;脂质体-TNF复合物能明显减轻TNF的毒性反应,而不影响TNF的抗瘤作用。 相似文献
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