新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用

牛血清是医药生物技术产品中重要的原辅材料之一,做好牛血清的质量控制是提高生物制品质量的重要环节。本研究通过应用PK15、BHK21和ST三种兽用生物制品研制中常用的细胞作为载体,选用国内同等价位5个不同厂家生产的新生牛血清作为比较对象,采用细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率测定法、细胞三次连续传代培养法、MTT比色法和微量终点稀释法五种血清质量鉴定的方法进行比较,检测新生牛血清的促细胞生长活性,最终确定了MTT比色法作为便捷高效快速筛选新生牛血清的检测方法。     

5种杀虫剂的烟青虫防治效果研究

５种杀虫剂对烟青虫的毒力试验表明：质量分数为８０％～８３％的高效氯氰菊酯和８６．７％的氰戊菊酯分别稀释２０００和１０００倍对烟青虫的防治效果较好，ＬＧ５０分别为０．０３２２ｕｇ．头＾－１和０．０５８２ｕｇ．头＾－１，久效磷和乙酰甲胺磷稀释１０００倍的效果次之，吡虫啉效果最差。     

Changes of serum vascular endothelial growth factor levels in a rat model of acute myocardial infarction

AIM and METHODS: To study the changes of serum vascular endothelial growth factor (VEGF) levels in a rat model of acute myocardial infarction (MI) and its significance. Eighty-eight male Sprague-Dawley rats were used in this study. MI was produced by left coronary arterial ligation in 80 animals, and eight rats undergoing thoracotomy but not coronary ligation served as controls (sham).Blood samples were drawn from the right atrium before (sham animals) and 1, 3, 6, 12, 24 hours and 2, 3, 5, 7, 14 days after MI(n=8, respectively). Serum VEGF concentrations were measured by a sensitive enzyme-linked immunosorbent assay with a rabbit polyclonal antibody specific for VEGF. RESULTS: In 8 sham animals, the concentration of serum VEGF was (66.99±17.83) pg/mL. Six hours after MI, the level of serum VEGF significantly increased to (125.68±28.07)pg/mL (P＜0.01 vs sham control), and reached a peak (240.61±70.63 pg/mL, P＜0.01 vs sham control) at 24 hours after ligation and then decreased gradually over the remaining 2 weeks. But the level remained significantly elevated for 14 days (107.64±30.31 pg/mL, P＜0.01 vs sham control).CONCLUSION: Serum VEGF levels markedly and permanently increase in the rat model of acute MI may play an important role in the angiogenesis associated with MI     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查     

间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

应用超声波裂解珐制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板，成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。     

利福平乙基纤维素微球在小鼠体内的组织分布

以有机相分散、溶媒扩散二步法制备了利福平乙基纤维素微球，粒径范围2.5-12.5μm，其中粒径2.5-5.0μm的约占63％。采用微生物测定法研究了利福平乙基纤维素微球静脉给药后，利福平在小鼠体内的组织分布，且与游离利福平在小鼠体内组织分布进行了比较，小鼠单剂量静脉注射游离利福平或利福平乙基纤维素微球（相当于利福平原药）10mg/kg，测定0.5、1、3、7、12、24、48、72、120、168h共10个时间点各组织中的药物浓度。结果表明，游离利福平给药组和利福平乙基纤维素微球给药组在12h内均以肝脏中药物浓度为最高，为9.96-22.41μg/g，在3h内微球给药组高于游离药物给药组，7、12h微球给药组的药物浓度迅速下降，低于游离药物给药组；肾脏的药物浓度在12h内微球给药组明显低于游离药物给药组，24－168h微球给药组的药物浓度下降迟缓，显著高于游离药物给药组直到168药物浓度始终是微球给药组高于游离药物给药组，12h游离药物给药组已不能检出药物含量，而微球给药组直到168h仍维持在5.44μg/g，接近游离药物给药组的最高峰值；血清中利福平浓度在48h已不能检出，而微球给药组在168h为1.33mg/L；心脏、用脏微球给药组和游离药物给药组的药物浓度变化无统计学意义，与游离药物相比，利福平微球明显提高了肺脏中的药物分布，降低了利福平对肝脏、肾脏的毒性，并显著延缓了药物代谢，说明利福平微球具有长效、靶向作用。     

应用ELISA双抗体夹心法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

本试验建立了检测鸡病毒性关节炎病毒的ELISA双抗体夹心法.取代反应、阻断试验均为阴性,与NDV、MDV和IBDV无交叉反应,对已知阳性标本的检测均为阳性;其敏感性比琼扩试验高80倍以上,这表明ELISA夹心法具有较高的特异性和敏感性.在人工感染后2～27d,关节滑膜、腱鞘和脾脏中病毒检出率为100％;还从肝脏、法氏囊和脑组织中检测到病毒.     

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究

禽流感（AI）是由A型禽流感病毒（AIV）引起的一种发生于禽类的病毒性传染病。笔者以杂交瘤技术研制抗AIV共同抗原的特异单克隆抗体，旨在建立一种双抗体夹心ELISA方法快速检测AIV，以便为A型AIV的快速诊断技术的研究提供理论依据。     

PRRSV重组N蛋白的抗原性分析及其特异性抗体制备

利用大肠杆菌表达技术和亲和层析法纯化出重组PRRSV N蛋白 ,用间接ELISA法和Western blot分析 ,证明其具有较好的抗原性。将该纯化蛋白采用大剂量长程免疫法免疫家兔 ,制备了兔抗重组N蛋白抗体 ,用Western blot分析和竞争抑制试验证明其具有很高的特异性 ,ELISA效价达 1∶32 0 0以上。