应用ELISA双抗体夹心法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

本试验建立了检测鸡病毒性关节炎病毒的ELISA双抗体夹心法.取代反应、阻断试验均为阴性,与NDV、MDV和IBDV无交叉反应,对已知阳性标本的检测均为阳性;其敏感性比琼扩试验高80倍以上,这表明ELISA夹心法具有较高的特异性和敏感性.在人工感染后2～27d,关节滑膜、腱鞘和脾脏中病毒检出率为100％;还从肝脏、法氏囊和脑组织中检测到病毒.     

布氏锥虫伊氏亚种和马媾疫亚种在不同气相条件下的体外培养

在烛缸和密闭培养的气相下,用我们改良的Baltz无细胞培养系统培养了3个已适应于体外培养的布氏锥虫伊氏亚种虫株、1个布氏锥虫马媾疫亚种虫株和3个未经培养的布氏锥虫伊氏亚种虫株(未适应株),并与常规CO_2培养箱(含5%CO_2的空气)培养作比较。所有适应株和未适应株均可在烛缸和密闭培养条件下正常生长,连续培养1—2月,虫体形态、生长特性和对小白鼠的致病力与CO_2培养箱培养相同。培养物的虫密度,密闭培养明显高于烛缸和CO_2培养箱培养,CO_2培养箱培养一般稍高于烛缸培养。密闭和烛缸培养的成功,对普及锥虫体外培养技术有很大实用价值,也提示应进一步研究培养的最佳气相条件。此外,不经饲养层培养系统适应直接建立3个未适应株的无细胞培养系统的培养也是重要进展。     

基因芯片技术在钩端螺旋体病传染源监测中的应用

为了将合成的核酸探针点样到玻片 上制备成基因芯片,先用常规PCR扩增动物 组织中钩端螺旋体特异片段,再用Cy3标记 引物,通过不对称PCR获取荧光素标记的靶 序列,然后与制备的芯片杂交,扫描仪记录结 果。同时,以PCR技术为对照,进一步观察 基因芯片技术检测动物传染源中钩端螺旋体 的特异性、敏感性及可行性。常规PCR扩增 问号钩端螺旋体阳性标本,出现单一482bp 的扩增产物,而双曲钩端螺旋体及其他螺旋 体、病原、正常动物组织均无任何DNA扩增 条带,芯片杂交结果与常规PCR方法结果一 致。用芯片和PCR对动物组织中不同浓度 钩端螺旋体的检测,最低检测浓度分别为10 条和100条钩端螺旋体,芯片检测的敏感性 高于常规PCR法。用基因芯片与PCR分别 对标本进行检测,5只人工感染的豚鼠肾、 肝、心、血等组织的检测结果均为阳性;28份 疫区野鼠肾标本阳性结果分别为8份和4 份,10份可疑病猪肾标本阳性结果分别7份 和5份;5份非疫区野鼠肾、5份正常猪肾标 本以及其他微生物的检测结果均为阴性。结 果表明,基因芯片技术可快速、灵敏、特异地 检测动物传染源中问号钩端螺旋体。     

用DEAE—纤维素柱分离伊氏锥虫

本文报道了用国产DEAE—纤维素从人工感染伊氏锥虫的小鼠、大鼠和犬的血液分离伊氏锥虫的具体方法,测定了压积DEAE—纤维素对小鼠、大鼠和犬的血液吸附值分别为0.25～0.41、0.23～0.39、0.33;伊氏锥虫的回收率,小鼠为83.19～98.19％,大鼠为84.87～93.85％。分离的锥虫形态正常,运动活泼,离心浓集后呈炼乳状,镜检无任何血细胞。此外,对用DEAE—纤维素分离伊氏锥虫的有关技术问题作了讨论。     

伊氏锥虫在家兔体内的抗原变异和NaTat1．1—1．9九个群体的建立

以伊氏锥虫YNB2克隆感染家兔，于52天内，以一定间隔，用经环磷酰胺处理的小鼠由兔血分离锥虫，并予以克隆，获得9个抗原性互不相同的克隆群体。用此9个克隆群体分别免疫家兔制备免疫血清，与同源和各异源克隆群体作交叉免疫溶解和间接免疫荧光试验。结果证明，9个克隆群体是单一可变抗原型(VAT)，制备的血清是单价VAT特异血清。按国际通用命名法，依分离顺序命名为NaTat1．1～1．9(Najing rypanozoon antigen type 1.1～1.9).     

传染性法氏囊病病毒VP2高表达毒株血清型分析与免疫试验

对 2个传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2高表达毒株 0 0 ZB和 99TA3的血清亚型进行了分析 ,交叉中和试验表明 ,它们属不同的血清亚型。用这 2个毒株分别制备灭活疫苗进行免疫试验 ,试验保护率为 10 0 %,显示出良好的免疫效力。     

分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

按katendel氏法用伊氏锥虫JG株制备全虫抗原,以其免疫BALB/C小鼠。以50％PEG(MW4000,pH8.0)作融合剂。使免疫鼠脾细胞与S P2/0 Ag14(简称S P2/0)骨髓瘤细胞融合。经系统筛选和克隆化,建立了9个分泌抗伊氏锥虫抗体的杂交瘤细胞株。他们分泌的McAb,4株为IgG1、1株为IgG3、另4株为IgM。9株McAb在琼脂免疫双扩散试验中均不形成沉淀线。用ELISA检测,这些细胞系培养上清和腹水与同源伊氏锥虫虫株抗原的滴度分别为1:64-1:1024和1:6.4×103-1:6.4×105;与泰氏锥虫和弓形虫抗原则全为阴性。用2个异源伊氏傩虫虫株抗原检测时,8株无任何交叉反应,8株与2个异源株均有交叉反应,另3株则只与1个异源株有交叉反应。用增值反应检查了5株IgG类McAb识别抗原决定簇的特异性,除2株共同识别一种抗原决定簇外,另8株各自识别不同的抗原决定簇。     

应用间接ELISA检测鸡病毒性关节炎抗体的研究

用本试验建立的抗鸡病毒性关节炎(AVA)抗体的间接 ELISA 方法检测了实验感染 AVA 病毒(AVAV)的鸡血清、自然感染鸡血清及 IBD,ND 和 MD 病鸡血清,证明其具有较高特异性.通过对鸡实验感染 AVAV 后不同时期的检测表明.间接 ELISA 可在感染后6天检出血清特异性抗体,且不同时期检出率均高于 AGID 法,并可在2小时内报告试验结果.适用于 AVAV 抗体的常规检测.用该法对来自南京、海宁、长春等地鸡场的162份血清进行检测,阳性率为10.5%.     

检测伊氏锥虫循环抗原的McAb-RPHA试验

用一株抗伊氏锥虫、马媾疫锥虫和布氏锥虫共同抗原(与泰氏锥虫等抗原无交叉反应)的单克隆抗体建立了检测伊氏锥虫循环抗原(TcA)的反向间接血凝试验。用以检测人工感染兔,于感染后8～10天TcA转阴;如不治疗直至观察期结束持续阳性;治疗后一周即转阴。用以检测疫区36份虫血症阳性水牛血清,25份阳性(69.44％);16份虫血症阴性、IHA阳性水牛血清,3份阳性;25份虫血症和IHA阴性水牛血清,全部阴性。     

某牛群暴发狂犬病的报告

某军用仓库,饲养黄牛13头,水牛4头。1983年9月,开始流行一种以兴奋或沉郁、后期麻痹为特征的疫病,至同年12月,陆续发病8头,全部死亡,经实验室诊断为狂犬病。