七种猪常见病毒核酸磁-纳米微粒可视化快速检测技术的建立与应用

随着集约化养殖业的发展，规模化养猪场对于病原的早期快速检测需求逐步增高，本研究旨在建立针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus, PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)和猪细小病病毒(porcine parvovirus, PPV)等7种常见病毒病病原感染的广谱磁纳米微粒可视化(ultrasensitive nanoparticle visualization detection, UNVs)现场检测技术。根据不同病毒的复制酶区域的高度保守区域，设计探针和引物，通过探针的筛选和条件的优化...     

贵州省种猪场5种传染病的血清学调查分析

近年来,贵州省一些种猪场出现了一种以母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道症状及生长发育不良为主要临床表现的疫病,严重影响了养猪业的健康发展.研究资料表明,引起上述症状的病毒性传染病主要有猪瘟(hog cholera,HC)、猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)、猪伪狂犬病(pseudorabies, PR)、猪细小病毒病(porcine parvovirus infection,PP)和猪圆环病毒病(porcine circovirus infection,PC)等.     

猪主要腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立检测猪主要腹泻病毒的多重RT-PCR方法，本试验参考GenBank中登录的猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine, TGEV)M基因、猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus, PSV)VP1基因、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)N基因和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)N基因的序列，分别设计相应的引物，构建4种病毒的阳性质粒。以阳性质粒为标准品，通过优化反应条件和反应程序，建立了检测猪主要腹泻病毒的多重RT-PCR方法，并确定了该检测方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示，该方法具有较高的灵敏性，对PSV、TGEV、PDCoV和PEDV的最低检测量分别为1.37×10²,1.44×10²,1.51×10²和1.56×10²拷贝/μL。而扩增猪细小病毒(porcine parvovirus, PPV)、猪瘟病...     

宏基因组学技术分析四川省集约化猪场中仔猪腹泻粪便的病毒种群

旨在了解四川省集约化猪场腹泻仔猪粪便中病毒种群的变化。于2019年从四川省15个猪场采集腹泻仔猪粪便样本共156份，每个猪场挑取3份样本混合成1个pool样，提取其总RNA并进行高通量测序，利用SOAP denovo软件进行序列组装，并对病毒的种类和分子特征进行研究。分析结果显示，腹泻仔猪粪便样本中的病毒种群包括12个科的20种病毒，以冠状病毒科(Coronaviridae)成员为主，与腹泻相关的主要病原有猪流行性腹泻病毒(porcine pidemic diarrhea virus, PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine infectious gastroenteritis virus, TGEV)和猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)。获得PEDV N基因的完整基因组和TGEV、猪星状病毒2型(porcine astrovirus, PAstV-2)、posavirus 1和猪细小病毒4型(porcine parvovirus, PPV-4)的部分基因组。系统发育结果显示，PEDV、TGEV、PAstV-2、posavirus 1和PPV-4均与参...     

PCR方法在PCV2和PRRSV检测上的应用

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)分为两个基因型:PCV1和PCV2。PCV1无致病性,广泛存在于猪群中;PCV2具有致病性,能引起多种疾病综合征,如断奶后仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪呼吸道疾病复合症(porcine respiratory diseasecom     

猪流行性腹泻疫苗的研究

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由尼多目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)α-冠状病毒中的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic d iarrhea virus,PEDV)引起的猪的一种急性、高度传染性的肠道疾病,该病以急性肠炎、呕吐、水样腹泻和脱水为主要特征.     

同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的四重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

为实现对猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)、猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)和猪流性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的同时鉴别检测,根据PDCoV M基因、TGEV S基因、PoRV VP6基因和TGEV N基因保守区域序列合成特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了一种可同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的实时荧光RT-PCR方法。结果显示,所建立的四重实时荧光RT-PCR方法仅对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV出现阳性扩增,与PRV、PPV、PRRSV、CSFV、PCV2等猪常见病原无交叉反应;对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的最低检出限分别为1.17×10³,1.13×10³,1.31×10²和1.18×10^2<...     

新疆地区4种猪病多重PCR检测方法的建立与初步应用

本试验旨在建立一种可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的多重PCR检测方法。参考相关文献合成PRRSV、PCV2、PRV、Mh的特异性引物,通过对反应条件优化、特异性、敏感性测定,建立了可同时检测以上4种猪多发传染病的PCR诊断方法。扩增的片段长度分别为424 bp (PRRSV)、490 bp (PCV2)、298 bp (PRV)和360 bp (Mh),对其他常见猪病病原无特异性扩增,采用Multiplex PCR Master Mix对PRRSV、PCV2、PRV、Mh的核酸最低检出量为3个拷贝。采用多重PCR方法对60份临床样本反复检测,与单重PCR相比,4种病原符合率均为100%。结果表明,建立的多重PCR诊断方法可用于猪群中上述4种病原的单一或混合感染的快速鉴别诊断和流行病学调查。     

从猪繁殖与呼吸综合征病毒的起源与进化谈猪繁殖与呼吸综合征的防制

1猪繁殖与呼吸综合征概述猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起猪的一种高度接触性传染病,不同年龄、品种和性别的猪均可感染,以母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊胎,以及仔猪的呼吸困     

2009-2010年云南部分猪场猪主要传染病血清流行病调查

为了探查2009-2010年云南部分猪场对猪主要传染病疫苗接种后的免疫效果,本试验主要通过ELISA方法对样品进行血清流行病调查。结果表明,猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)抗体阳性率为84.33%(1211/1436);猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体阳性率为74.84%(803/1073);猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)抗体阳性率为0.00%(0/80);猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)抗体阳性率为62.26%(287/461);猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)抗体阳性率为54.25%(83/153);日本乙型脑炎抗体阳性率为63.33%(76/120)。提高PRRSV、PRV、PPV和乙脑疫苗的使用效果是云南省内猪场解决母猪流产的有效途径。     

猪传染性胸膜肺炎病原菌的分离鉴定与药敏试验

猪传染性胸膜肺炎(porcine infectious pleurop-neumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)引起猪的一种高致死性呼吸道传染病[1].我国于1990年始见报道[2],主要表现为肺炎和胸膜炎的特征性症状和病理变化[3].     

猪冠状病毒的起源与遗传演化

冠状病毒变异率高,宿主广泛,主要感染哺乳动物和禽类,严重威胁公共卫生安全与养殖业发展.生猪养殖业中,冠状病毒也是危害猪只健康的重要病原.本研究对4种代表性猪冠状病毒:猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic...     

猪圆环病毒病与附红细胞体病混合感染的诊治

<正>猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus,PCV2)引起的断奶仔猪进行性消瘦、淋巴组织等病变的一种多系统衰竭综合症(PMWS)。猪圆环病毒为单股负链环状DNA病毒,是已知最小的动物病毒之一     

单层细胞共培养对猪去卵丘卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响

本试验比较观察第一极体(The first polar body,PbⅠ)、Oosight imaging system观察和hocchst33342染色法对第2次减数分裂中期(Metaphase Ⅱ,MⅡ)卵母细胞判定结果的相关性分析,并探讨卵巢皮质细胞(porcine ovarian cortex cells,pOCCs)、猪输卵管上皮细胞(porcine oviductal epithelial cells,pOECs)和猪卵丘颗粒细胞(porcine cumulus cells,pCCs)等3种单层细胞体外共培养体系对猪去卵丘卵母细胞(cumulus cells denuded oocytes,Dos)体外成熟(in vitro maturation,IVM)和孤雌发育的影响。结果显示:(1)Oosight imaging system判定卵母细胞成熟的结果与hocchst33342染色法判定的结果有很强相关性(R=0.973,P<0.01,N=90);(2)pOCCs单层细胞共培养体系中猪去卵丘卵母细胞成熟率显著高于pOECs((52.5±0.30)%vs(43.8±2.18)%,P<0.05),且...     

10种猪常见病毒基因芯片检测方法的建立及初步应用

旨在建立一种可同步检测猪10种常见疫病病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)、猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)、猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)和口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus,FMDV)的基因芯片检测技术,为临床病料的初步诊断及流行病学调查提供一个新的可靠方法。对10种病毒基因的序列进行分析,设计引物对靶基因进行PCR扩增,将纯化后的靶基因点制成芯片,通过Cy3标记特异性引物扩增病毒得到具有荧光标记的探针,然后与芯片进行杂交,扫描分析结果,建立其基因芯片检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行检测。应用建立的基因芯片检测方法和普通PCR/RT-PCR方法对1 006份样品进行符合检测。试验结果表明,基因芯片检测10种病毒特异性好、灵敏度高,最低检测限度可达10~(5 )copies·μL~(-1),检测中,基因芯片与普通PCR/RT-PCR对1 006份临床样品的检测符合率为96.79%以上。初步研究表明,该基因芯片技术可同时同步检测10种猪疫病病毒,可应用于临床病料的初步诊断。     

遵义地区猪细小病毒病的血清学调查

猪细小病毒病(porcine panvovirus disease,PPVD)是由猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎和产弱仔为特征的繁殖障碍性疾病,在我国各地均有发生,给养猪业造成了重大经济损失.为及时掌握猪细小病毒病在该地区的流行动态,制定科学合理的防治方案,我们于2006年10月份对遵义地区7个县(市)部分规模养殖场和散养户随机采取271份猪血清进行了血清学检测,现将结果报告如下.     

上海地区出现猪繁殖与呼吸综合征和2型猪圆环病毒混合感染

上海地区6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征，剖检的18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)N蛋白和2型猪圆环病毒(porcine circovirus type2，PCV-2)部分基因的特异性PCR引物，通过RT—PCR和PCR技术从患病猪肺脏组织均扩增出PRRSV和PCV-2的特异基因片段。结合临床症状和流行病学调查，证实上海地区出现PRRSV和PCV-2的混合感染。     

猪圆环病毒2型靶细胞及其受体的研究进展

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是统称为猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)的几个综合征的主要致病因子。目前,对PCV2配体表位和细胞受体在病毒入侵过程中的致病机理还不清楚,受体识别是病毒黏附到宿主细胞表面的第一步,在病毒入侵和致病机理方面起到重要的作用。作者对近几年来PCV2侵染的靶细胞及其靶细胞受体的研究进展作一综述。     

猪Ⅱ型圆环病毒河南株分离鉴定及其ORF2基因序列分析

猪圆环病毒(porcine circoyirus,PCV)分PCV1和PCV2两种血清型,PCV1无致病性,而具致病性的PCV2能引起多种疾病综合征,如断奶猪多系统衰竭综合征[1](PMWS),猪皮炎肾病综合征(PDNS),猪呼吸道综合征(PRDC)等[2].