牛白细胞黏附缺陷病液相基因芯片检测方法的建立

从福建某奶牛场200头进口荷斯坦牛采血提取牛血液DNA，根据已知牛染色体上CD18编码基因序列383位基由A变为G而引起牛白细胞黏附缺陷症（BLAD）设计特异性野生型和突变型引物，建立液相基因芯片检测方法用于牛白细胞黏附缺陷症（BLAD）的检测，结果检出2头母牛为BLAD携带者，检出率为0．67％，没有发现患病牛。结果证明建立的液相基因芯片检测方法是一种敏感性和特异性很高的筛选奶牛BLAD有害基因的新方法     

纳米金PCR技术检测副溶血弧菌方法的建立与初步应用

纳米金PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,它能够明显提高普通PCR的灵敏度和特异性。根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计一对特异性引物,建立了纳米金PCR方法,并对该方法的最佳反应条件、循环数、特异性和灵敏度进行测定。采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果表明能扩增得到与试验设计相符的208bp(VP)的特异性条带;与溶藻弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌、沙门氏菌、枸橼酸杆菌没有交叉反应;纯培养细菌检测灵敏度为3cfu/反应体系。与普通PCR法进行比较,该方法检测灵敏度比普通PCR高10倍。经临床检测,从150份带鱼、鱿鱼和鱼粉中检出5份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法符合率100%。该试验方法的建立对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。     

纳米PCR技术检测溶藻弧菌的建立与初步应用

本研究根据溶藻弧茵（VA）的特异性基因toxR基因序列,应用primer6．0设计了1对特异性引物,并建立了纳金米金PCR方法,并对该方法的最佳反应条件、特异性和灵敏度进行了测定,采用2．0％琼脂糖电泳进行检测,结果表明本实验能扩增得到与实验设计相符的159bp（VA）的特异性条带;与副溶血弧菌、霍乱弧茵、麦氏弧菌、沙门氏菌、枸橼酸杆菌无交叉反应;纯培养细菌检测灵敏度可达22cfu／反应体系,同条件下比普通PCR的灵敏度高10倍。经临床检测,从120份带鱼、鱿鱼和鱼粉中检出8份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法符合率100％。本试验方法的建立对于加强进出口水产品中VA的检验检疫具有十分重要的意义。     

牛传染性鼻气管炎检测方法的研究进展

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)是引起牛传染性鼻气管炎的病原。文中介绍了牛传染性鼻气管炎的各种检测方法的研究进展,包括病理组织学诊断、病毒的分离鉴定、免疫学检测和核酸分子检测,为牛传染性鼻气管炎的检测提供了有价值的参考。     

PDCoV、PEAV、TGEV及PEDV“一步法”多重荧光RT-PCR的建立和应用

为快速鉴别检测猪冠状病毒,使用一步法试剂,对猪δ冠状病毒、猪肠道α冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪流行性腹泻病毒的检测方法进行优化,建立了同时检测上述4种病毒的“一步法”多重荧光RTPCR。随后对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评估,并将其用于厦门市规模猪场上述4种腹泻病毒感染的流行病学调查。结果显示:该方法的敏感性高,对上述4种病毒阳性质粒的最低检出限均可达10¹ copies/μL;特异性好,对4种病毒的单一及混合模板进行检测时,均可在相应荧光通道中获得良好的扩增曲线,而对其他病毒和细菌无扩增信号;重复性好,批间试验变异系数小于1.1%。使用该方法对从厦门市53家猪场采集的265份腹泻样品进行检测,4 h即可完成全部检测,猪δ冠状病毒和猪流行性腹泻病毒的场阳性率分别为18.87%和5.66%,未检出猪肠道α冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒。结果表明,本研究建立的方法敏感性高,特异性及重复性好,操作简便、耗时短,适用于临床大批量样本的检测,可为防控猪腹泻疾病提供有力的技术支持。