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为建立一种应用于宠物布鲁氏菌、弓形虫及巴尔通体的高通量、高灵敏、高特异的检测方法,根据各自保守序列合成了特异性引物及Taq Man探针,通过优化反应体系,建立了多重Taq Man荧光PCR检测方法,并利用该方法对2021年厦门市抽检的304份犬猫全血样品进行了检测。结果显示:该方法特异性好,可特异性扩增布鲁氏菌、弓形虫和巴尔通体阳性核酸,其他对照菌株核酸均无扩增信号;抗干扰性强,检测混合模板时,不同成分间无交叉干扰反应;灵敏度高,最低检出限均为3×100 copies/μL;重复性好,批内及批间重复试验变异系数均小于2%。应用该方法在4 h内即可完成304份临床样品的快速检测,此次临床抽检样品中未检出布鲁氏菌、弓形虫及巴尔通体阳性核酸。该方法大大提高了检测效率,为多种动物布鲁氏菌、弓形虫及巴尔通体感染的早期诊断及筛查提供了技术支持。 相似文献
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为初步了解厦门市宠物犬猫中布鲁氏菌、弓形虫、A型流感病毒及巴尔通体的流行情况,采用荧光PCR、ELISA及血凝抑制等检测方法,对2021年从厦门市32家动物诊疗机构中采集的304份宠物犬猫血清及对应的全血样品进行抗体及核酸检测。结果显示:宠物犬猫中,布鲁氏菌(光滑型及粗糙型)表观流行率为2.0%,真实流行率为0.5%(95%CI:0~1.3%);弓形虫表观流行率为3.3%,真实流行率为0.8%(95%CI:0~1.8%);A型流感病毒表观流行率为8.6%,真实流行率为7.7%(95%CI:4.7%~10.7%),检出H9亚型抗体阳性样品19份(抗体滴度为4log2~6log2),未检出H5亚型及H7亚型抗体阳性样品(抗体滴度<1log2)。未检出布鲁氏菌、弓形虫、巴尔通体及A型流感病毒核酸阳性样品。结果表明,厦门市宠物犬猫中存在一定的A型低致病性流感病毒传播风险,其他病原流行风险较低,但这些病原均具有感染人和其他动物的潜在风险,需要继续加强监测,做好个人防护。本研究为本地犬猫人兽共患病防治提供了依据。 相似文献
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