牛结核病诊断方法研究进展

<正>牛结核病(Bovinetuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病。牛结核病被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。牛结核病的检测方法可归为2大类:一类是细菌学、分子生物学等直接检测法,另一类是免疫学、噬菌体测定等间接检测法。现有的研究结果显示,仅靠单一的检测方法很难筛选出牛群中所有结核感染牛,因此在临床可以综合应用一种以上的检测方法,提高检测的敏感性     

用分子生物学方法鉴别检测动物源性饲料中的牛羊源性成分

为了防止海绵状脑病疫区和痒病疫区反刍动物源性饲料进入我国 ,非常有必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定检测。我们采用分子生物学方法从动物源性饲料中鉴别检测牛、羊特异性线粒体DNA的片段 ,并用限制性内切酶SspⅠ对PCR产物进行酶切鉴定及DNA序列测定。该方法的灵敏度可达 0 .12 5 % ,具有灵敏度高、快速和特异性强的优点。     

辽宁从美国进口鸡骨粉中检出牛源成份

今年以来,辽宁检验检疫局利用“饲料中动物源性成份分子生物学检测技术”加大检测力度,严把疫情关,连续两次从美国进口的鸡骨粉中和饲料添加剂中检出牛源性成份,为口岸一线严防疯牛病疫情传入提供了技术支持。今年2月初,辽宁局保税区办事处将大连出口加工区某日资企业从美国进口21吨鸡骨粉中检出牛源性成份,21吨鸡骨粉当即被封存。这是我国首次从进口鸡骨粉中检出牛源性成份。非牛源性饲料中带有牛源性成份,要么是人为掺入,要么是加工环节受到污染。不论是哪种原因造成的,都客观地存在着传播疫情的隐患。因此,在动物疫情频发的国际环境下,加…     

基于磁珠核酸提取法的动物源性分测研究

实验采用磁珠提取肉制品及饲料中的核酸,并利用常规PCR和实时荧光PCR技术建立鉴定动物源性成分的方法.通过对磁珠核酸提取法与商品化核酸提取试剂盒进行比较,证明磁珠核酸提取法具有方便、快速、灵敏、安全及可实现自动化等优点.将磁珠核酸提取法与实时荧光PCR技术相结合,对猪、牛、羊、鸭、鸡等动物源性成分进行鉴别研究,结果表明:该方法完全适用于动物源性饲料及肉制品中动物源性成分的鉴定工作,为确证肉及肉产品的成分和来源,预防疯牛病的传播及物种的鉴别提供了有效的分子生物学检测方法.     

奶牛结核病实验室诊断技术研究进展

牛结核病(Bovine Tuberculosis)是由牛分枝杆菌引起的一种慢性传染病 [1].该病传染性强,且能通过奶制品传染给人和其他动物,危害严重,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类动物疫病,我国将其列为二类动物疫病.牛结核病的诊断大体上可归为两类:一是临床症状诊断;二是实验室诊断,包括细菌学检测,如涂片镜检、细菌培养、动物实验等;免疫学检测;分子生物学诊断技术等.传统的细菌学方法由于繁琐费时、检出率低、灵敏度差.已不能满足当前疫病诊断的需要.目前世界各国都在致力于研究开发牛结核病的快速诊断方法,并已经建立了一些快速、准确、可靠的新型检测技术,有些技术已经在生产实践中得到了广泛的应用.本文对奶牛结核病临床诊断方法不再作赘述,只重点综述其实验室检测方法的研究进展.     

动物产品及饲料中牛源和羊源性成分三重荧光PCR检测方法的建立

为鉴定和区分饲料及动物产品中牛、山羊、绵羊源性成分,根据线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守序列,设计合成了3对特异性引物与TaqMan探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了三重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成3种动物源性成分的检测。用该方法对16种不同源性的动物DNA进行检测,结果表明能特异地鉴别检测出牛、山羊和绵羊源性成分,且敏感性比现行国标PCR法高100倍。该方法适用于饲料、肉制品、奶制品等动物源性产品的检测。     

牛传染性鼻气管炎诊断方法研究进展

牛传染性鼻气管炎是由牛传染性鼻气管炎病毒引起的一种牛的热性、急性、接触性传染病。该病是世界动物卫生组织(OIE)规定的必须上报的疾病之一,在我国也被列为二类疫病。牛传染性鼻气管炎可降低牛的肥育率、繁殖率和产奶量,给养牛业造成了重大经济损失。从病毒的分离鉴定、血清学以及分子生物学等方面对该病的诊断方法进行综述,以期为牛传染性鼻气管炎的检测和防控提供参考。     

牛传染性鼻气管炎诊断方法的研究进展

牛传染性鼻气管炎是由牛传染性鼻气管炎病毒引起的一种牛的热性、急性、接触性传染病。该病是世界动物卫生组织(OIE)规定的必须上报的疾病之一,在我国也被列为二类疫病。牛传染性鼻气管炎可降低牛的肥育率、繁殖率和产奶量,给养牛业造成了重大经济损失。从病毒的分离鉴定、血清学以及分子生物学等方面对该病的诊断方法进行综述,以期为牛传染性鼻气管炎的检测和防控提供参考。     

动物沙门氏菌病的防制

沙门氏菌病的感染范围很广,在家畜和野生动物中均有发生,多以败血症和肠炎为主要临床表现,因此该病在世界上引起了广泛的关注。本文总结了猪、牛、禽、狐和貉这五种易感动物的临床特征和病理变化,同时对传统检测方法、免疫学检测方法和分子生物学检测方法进行了介绍,并从多个方面总结动物沙门氏菌病的防制办法。本文综述了动物发生沙门氏菌病的情况,为有效控制动物沙门氏菌病提供理论参考。     

河北省石家庄市召开动物源性饲料专项整治会议

按照农业部的要求．河北省开展了“2009年饲料质量安全执法年活动”．并加大了对动物源性蛋白饲料生产企业的整治力度．3月份．在沧州市、秦皇岛市、唐山市动物源性蛋白饲料主产区分片召开了专项整治会议．对动物源性饲料生产企业及有关市、县饲料管理人员进行了培训．     

动物蛋白饲料中动物源性成分的鉴别1.同一PCR鉴别动物蛋白饲料中牛羊成分

为了防止牛海绵状脑病(俗称疯牛病)和羊痒病传入我国,对来自疫区国家的动物源性饲料进行动物种类鉴别非常必要.本研究根据牛羊特异性卫星DNA建立了同一PCR体系同时检测羊、牛源性物质的方法.应用DNA提取液制备模板,不但有效地缩短了试验时间,还大大降低了成本,有利于在生产实际中推广应用.     

反刍动物饲料产品和动物源性饲料产品中牛羊源成分检测

[目的]检测反刍动物饲料和动物源性饲料中牛羊源成分,掌握动物饲料安全情况。[方法]利用聚合酶链式反应法（PCR法）对反刍动物饲料产品（预混料、精料补充料、全价配合料等）和动物源性饲料产品（鱼粉、肉粉等）共计300个样品进行了牛羊源成分检测。[结果]牛羊源性成分检测合格率为99.33%。其中,反刍动物饲料产品260批次,牛羊源性成分合格率为99.23%;动物源性饲料产品40批次,均未检出牛羊源性成分。2个阳性样品均为牛源阳性。[结论]反刍动物饲料产品存在潜在的安全隐患。     

根据线粒体保守序列检测鹿属动物源性成分

本文根据鹿线粒体mtDNA细胞色素b中的保守序列 ,设计了针对鹿属动物的特异性扩增引物。通过聚合酶链反应 (PolymeraseChainReac tion,PCR)得到 1 94bp的特异片段 ,而其它动物如鸡、牛、羊、兔、猪、鱼、骆驼、马等中则无此条带。通过内切酶AlwI酶切可对扩增结果进行验证。该方法对鹿成分的检测低限为 0 1 % ,可作为饲料中鹿属动物源性成分鉴别检测的有效方法之一 ,也可作为鹿类药材真伪鉴别的方法。     

Animal-derived feedstuffs as possible vectors for bovine encephalopathy (BSE) in Germany. Part 2: Assessment of vector risk for compounded feed

Specific conditions and practices of cattle feeding in Germany have to be taken into account for assessing the risk of feed born transmission of bovine spongiform encephalopathy, especially regarding the situation before the year 2000 when specific directives were introduced for feed production. The present retrospective epidemiological study includes data on feed production and the estimated amount of animal derived feedstuffs for the production of compounded feed for cattle. Risk assessment was performed based on the 'reproduction rate' (R0), that is defined as the estimated number of infections resulting from the processing of brain and spinal cord of BSE affected cattle that is recycled to bovines via feed. Under the conditions as given in Germany until the year 2000 the reproduction rate of BSE via the inclusion of animal derived feedstuffs in compounded feed production for cattle was estimated to be 1.1. Thus, it can be expected that BSE could be reproduced in the system, but with comparatively low efficiency. The expected incidence of BSE should be considerably lower compared to the situation during the 90th in the UK, due to the markedly lower recycling rate of animal protein in cattle feeding. Animal fat could have been a significant factor for BSE transmission due to contamination by proteinaceous brain and spinal cord material during the production process. The relative significance of fat containing feedstuffs for BSE transmission could have been higher in Germany compared to the situation in the UK where meat and bone meal was produced under different conditions and frequently used in higher proportions as an ingredient for compounded feed for ruminants.     

Bovine spongiform encephalopathy and related diseases: an epidemiological overview

Following the recognition of the novel disease bovine spongiform encephalopathy in Great Britain in 1986, epidemiological and other research studies were initiated. The initial results of these studies revealed that bovine spongiform encephalopathy was caused by a scrapie-like agent and the vehicle of infection was meat-and-bone meal incorporated into cattle feedstuffs as a protein source. The British cattle population became effectively exposed in 1981-82 and this was associated with a dramatic reduction in the use of hydrocarbon solvents for the extraction of fat in the production of meat-and-bone meal. The feeding of ruminant-derived protein to ruminants was statutorily banned in July 1988 to prevent further exposure from the food-borne source. This paper reviews the epidemiological aspects of bovine spongiform encephalopathy and the occurrence of transmissible spongiform encephalopathies in other species.     

动物产品中牛、羊源性成分多重PCR检测方法的建立

以肉骨粉、鱼粉、猪肉干和鱼肉干为研究对象,异硫氰酸胍法提取总DNA,18S rDNA片段的扩增结果表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质。应用梯度PCR技术对牛、羊源性成分检测的退火温度进行了优化,在单一PCR检测技术的基础上分别进行了18S rDNA片段和牛、羊源性成分的多重PCR分析,得到了预期的结果。试验表明,本文建立的多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,对动物产品牛、羊源性成分检测具有重要意义。     

中国黄牛PrPc成熟蛋白基因的克隆和序列分析

根据已发表的PrP^c蛋白基因序列，设计合成一对引物，并在2个引物的两端分别加入Bam HI和Nde Ⅰ酶切位点。以从中国黄牛肝脏中提取的基因组DNA为模板，经PCR扩增出一约640bp的目的基因片段，将此基因克隆于pET11a载体，构建了PrP^c蛋白基因重组质粒b-pET11a-PrP^c，转化DH－5α并进行序列测定。同源性分析表明：中国黄牛PrP^c成熟蛋白基因与目前国外发表牛的成熟蛋白PrP^c基因相比，有较大差异，发现了一个新的NdeⅠ酶切位点；推导的氨基酸序列有4个氨基酸差异，缺少一个8氨基酸重复区。     

应用SPC分析蛋白质原料配料保真加工现状及误差产生原因

试验应用统计过程控制（SPC）分析饲料生产中蛋白质原料配料保真现状,并对配料误差存在原因进行探讨,旨在为饲料企业配料质量管理提供借鉴。收集两家饲料厂（饲料厂A、B）2015年仔猪料中豆粕、鱼粉和膨化大豆3种蛋白质原料的配料设定值和实际称量值,应用单值-移动极差控制图和生产过程能力评价方法对蛋白质原料的配料保真现状进行分析。结果显示,饲料厂A豆粕、鱼粉和膨化大豆生产过程能力指数C_PK分别为0.20、0.11和0.01,膨化大豆的配料保真度最差,且3种原料的配料实际称量值远高于设定值;饲料厂B豆粕、鱼粉和膨化大豆生产过程能力指数C_PK分别为0.24、0.12和0.24,鱼粉的配料保真度最差,膨化大豆的配料过程存在失控情况;两家饲料厂的蛋白质原料配料误差均超过了饲料行业动态配料精度±0.3% FS的要求,配方保真性较差,需采取措施进行改进。综合分析两家饲料厂配方保真性差的原因是,配料秤工艺参数配置不合理,空中落料量和快慢进料量参数需进一步优化,饲料厂B存在人为操作错误。结果提示,应用SPC方法可较为直观的监控饲料配料过程,提升蛋白质原料的配料精度,减少蛋白质原料的浪费,降低饲料生产成本,从而提高饲料厂配料质量管理水平。     

鉴别牛早期胚胎性别PCR方法引物的设计与筛选

根据牛Y-染色体特异重复序列、睾丸特异蛋白基因以及性别决定基因序列设计合成5对公牛Y-染色体特异引物，依据牛骨胳肌α肌动蛋白前体基因和微卫星DNA序列设计合成4对牛DNA特异引物(内标引物)。单重PcR扩增牛基因组DNA，筛选出4对牛Y-染色体特异引物和1对牛DNA特异内标引物。将不同的Y-染色体特异引物与内标引物组合，多重PCR扩增牛基因组DNA、已知性别的牛成纤维细胞和克隆胚胎，筛选出2个可用于牛早期胚胎性别鉴别的PCR引物组合：B34／A12和B78／A12。