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1.
为了建立鉴别检测小反刍兽疫疫苗毒与野毒的快速分子生物学检测方法,通过对自行测序的疫苗毒基因组序列及GenBank中登录的野毒基因组序列进行比对分析,设计了2套引物和TaqMan荧光探针,对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了小反刍兽疫疫苗毒与野毒实时荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性试验证实,该检测方法只能检测到目的病毒核酸,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,检测疫苗株的最低检测限可达1.38mg/L的总RNA,检测野毒株的最低检测限为0.16mg/L的核酸。对同一样品进行重复性检测,检测的荧光扩增曲线阈值完全重舍,证明其重复性极好。从180份临床样品中,检测出2份疫苗病毒株阳性样品,其余均为阴性。结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR方法能对小反刍兽疫疫苗毒及野毒进行鉴别检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性极好的优点,是开展小反刍兽疫疫情监测的有力工具。  相似文献   
2.
应用PCR技术检测禽类源性成分   总被引:1,自引:0,他引:1  
据禽类(鸽子、鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸵鸟、鹧鸪)线粒体DNA 12sRNA基因中的保守序列,用Primer5.0设计针对禽类动物的特异性扩增引物。通过聚合酶链式反应从禽类样品中得到大约200bp的特异条带,而参考物种牛、羊、马、驴、鱼和空白对照则无此条带,说明该引物只对禽类有特异性,能将禽类与牛、羊、马、驴、鱼区分开来。通过测序对扩增产物进行验证,结果表明:禽类组织的PCR产物序列与基因库中检索到的相应序列相吻合。建立了一种检测禽类动物源性成分的PCR方法,该方法检测的灵敏度为0.1%。  相似文献   
3.
用分子生物学方法鉴别检测动物源性饲料中的牛羊源性成分   总被引:10,自引:0,他引:10  
为了防止海绵状脑病疫区和痒病疫区反刍动物源性饲料进入我国 ,非常有必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定检测。我们采用分子生物学方法从动物源性饲料中鉴别检测牛、羊特异性线粒体DNA的片段 ,并用限制性内切酶SspⅠ对PCR产物进行酶切鉴定及DNA序列测定。该方法的灵敏度可达 0 .12 5 % ,具有灵敏度高、快速和特异性强的优点。  相似文献   
4.
小鼠孤雌胚的体内体外发育研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
小鼠孤雌激活卵登攀上培养于CZB溶液中可发育至孵出囊胚阶段,而且孤雌胚移植后可在受体子宫内附植发育。单倍体、二倍体孤雌胚发育至桑椹胚的能力相似,但发育于囊胚的能力,后得高于前者。孤雌囊胚体外发育至孵出的比率仅为20%,但在卵巢切除的受体子宫内期发育至孵出囊胚的比率提高到73.3%。与受精扩张囊胚相比,孤雌扩张囊肿成纤维细胞饲养层上很难贴壁生长,但延迟孤雌囊胚的内细胞团(ICM)呆在细胞饲养层上增殖  相似文献   
5.
本研究利用猪水泡病病毒外壳蛋白VP1基因和pGEX-4T-1质粒成功构建重组质粒pGEX-4T-1-VP1,并转入BL21(DE3)表达菌中,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE凝胶电泳实验和考马斯亮蓝染色,结果显示在57KDu处出现特异性表达条带。经免疫印迹试验证实本研究所表达的重组蛋白VP1具有抗原性,可为利用重组蛋白VP1建立间接ELISA方法检测猪水泡病奠定基础。  相似文献   
6.
本文通过对甘肃不同产区滩羊被毛主要品质的分析后认为:各县、区滩羊被毛品质的差异与当地生态条件(及与此有联系的绵羊品种分布)有关。景泰由于毗连滩羊品种中心产地,被毛(与选种也有关)具有滩羊品种被毛固有特征,如被毛在细、长度上均匀;与国家规定的滩羊品种相比较,仅两型毛数量稍感不足,细度稍粗。皋兰,榆中滩羊除两型毛上的缺点外,被毛在细、长度等方面都不够均匀。作者认为:甘肃滩羊以改进两型毛数量、细度并兼顾改善被毛均匀度的改良方向能提高滩羊裘皮和成年羊被毛的品质。  相似文献   
7.
根据GenBank中的鹌鹑线粒体DNA(mtDNA)12S RNA基因保守序列,用Primer5.0软件设计了1对针对鹌鹑的特异性扩增引物,建立了一种检测鹌鹑动物源性成分的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法.通过SYBRGreen Ⅰ实时荧光PCR反应,同时进行溶解曲线和Tm值分析.结果表明:只有鹌鹑样品在Tm值为82℃下有特异的溶解曲线峰,而参考物种鸽子、鸡、鸭、鹅、鸵鸟、鹧鸪、牛、羊、猪、马、驴、鱼和空白对照,则无特异的溶解曲线峰,说明该引物只对鹌鹑有特异性.测序结果表明,鹌鹑组织SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR产物的核苷酸序列与GenBank中检索到的相应序列相吻合;该方法的检测灵敏度为0.001%.  相似文献   
8.
利用特异引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,从家鸽(Columbalivia)肝脏组织的总DNA中扩增到目的片段,并将扩增产物克隆到pMD18-T载体中,经菌落PCR与酶切鉴定、序列测定及序列分析.结果表明:克隆得到了家鸽ATPase8-ATPase6基因842 bp及COII的部分序列共861 bp.用DNA分析软件对家鸽ATPase8和ATPase6基因与Genbank中的5种鸟类的ATPase8和ATPase6基因序列进行比较分析,表明家鸽与其他5种鸟类的ATPase8和ATPase6基因具有较高的同源性(88.1%~75.0%),其中与山斑鸠(Streptopelia orientalis)的同源性最高,分别为88.1%和86.5%.家鸽ATPase8和ATPase6基因核苷酸序列的组成中,(A+T)含量分别为55.95%和54.68%,与其它5种鸟类的(A+T)含量(53.5%~60.12%)和(51.9%~54.24%)相近,说明鸟类ATPase8和ATPase6基因序列组成对A+T核苷酸的偏倚程度比较低;而且家鸽该片段的基因组织结构与其他鸟类的基本一致,显示鸟类线粒体基因排列的保守性.家鸽与其他5种鸟类的ATPase8和ATPase6基因序列同源性的分子进化树聚类结果表明家鸽与山斑鸠亲缘关系最近.  相似文献   
9.
畜群结构系指家畜品种内部的性别和年龄组成格局。影响畜群结构的因素较多,主要有家畜品种的生产方向、畜群类别、饲养管理和经营水平以及不同产品的市场价格等。长期以来由于种种原因,我国各种家畜的畜群结构不尽合理,尤以群牧饲养的草食家畜为甚。  相似文献   
10.
线粒体DNA是真核生物核外遗传物质,其结构简单,发生变异的机率相对稳定,被广泛用于系统起源、进化、亲缘关系及物种鉴别的研究中。为了挖掘禽类(源性成分)鉴别的分子生物学数据,探讨线粒体不同基因发育信息及鉴别的可信度和灵敏度。本研究扩增鹧鸪线粒体基因组中COⅡ、ATPase8区域,克隆出1138 bp片段,测序结果分析表明,在所克隆的片段中,含有COⅠ基因部分序列、tRNASer基因、tRNAAsp基因、COⅡ基因、tRNA Leu基因、ATPase8基因全序列和ATPase6基因部分序列。分析COⅡ、ATPase8和tRNA基因显示其与鹌鹑、鸡、火鸡、鹅、鸵鸟5种禽类的序列均具有较高的同源性,基于它们MEGA3.1构建系统进化树,探讨了它们所含的信息量及在鹧鸪和其它禽类鉴别方面的应用潜力,发现COⅡ比ATPase8和tRNA基因含有更多的鉴别信息。  相似文献   
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