抗独特型抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫作用

用PRRSV感染SPF猪，血清检测结果显示，机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1)，而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2)。根据各种蛋白质的等电点不同，应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG。分别以纯化的抗PRRSV—GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头，7d后经鼻腔感染PRRSV，定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验。抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；3头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；2头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；2头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；3头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—GP5和抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫作用显著，可作为PRRSV-GP5和PRRSV—M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体，保护机体免受PRRSV的感染。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究

为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-la株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清.此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清.间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异.病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性.间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体.以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的传染病,对养猪业危害很大.GP5蛋白是PRRSV ORF5基因编码的一个糖基化的囊膜蛋白,具有较好的免疫原性,能够诱导产生中和抗体.因此,GP5蛋白在PRRSV的致病性、诊断、预防与控制等方面研究中具有重要意义,是研制基因工程疫苗的最佳候选基因.近年来对GP5蛋白的研究取得了重要的进展,现就GP5蛋白的特征、免疫作用及疫苗等方面做一综述.     

中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征感染过程中的作用

中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染过程中起重要作用,被动输入PRRSV的中和抗体可预防PRRSV感染妊娠母猪,并且对母猪和仔猪都可起到消除性免疫作用。然而在自然感染PRRSV的过程中,这种中和抗体产生较晚,为病毒在宿主体内大量复制并感染其他易感动物提供了充裕的时间。PRRSV的主要中和位点位于糖蛋白GP5,核心区域称作B位点,GP5的另一个显性表位称作A位点,是非中和位点。A位点与B位点的同时出现将会抑制机体对B位点的免疫反应。当PRRSV发生中和位点突变时,产生无位点A的PRRSV,这种类型的PRRSV可诱导中和抗体的产生。文章通过对PRRSV的免疫反应、中和抗体的作用以及中和位点等三方面的阐述,综述了中和抗体在抗PRRSV感染过程中的作用。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒GP5蛋白羧基端的噬菌体展示及其诱导仔猪产生中和抗体水平

为了发现并验证猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)保护性抗原GP5蛋白羧基端新的中和性表位,本研究运用生物信息学软件预测PRRSV GP5蛋白羧基端的抗原性,全基因合成GP5蛋白羧基端168～198位氨基酸的编码序列,构建了重组噬菌体M13-GP5aa168～198,以临床阳性血清进行Western blot分析重组噬菌体表面展示的GP5aa168～198多肽的免疫反应原性。以1.0×10~(13) PFU/mL重组噬菌体混合氢氧化铝佐剂制备免疫抗原,按照灭活疫苗免疫程序肌肉注射免疫PRRSV抗体阴性断乳仔猪2次,间隔2周,分别于末次免疫后的第2,4和6周采血,分离血清,以临床分离PRRSV强毒株进行中和试验。结果显示:重组噬菌体表面展示的GP5aa168～198多肽具有免疫反应原性,免疫仔猪后,能够诱导仔猪产生较高水平的中和性抗体,为构建PRRSV GP5新型多表位疫苗的开发奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征对塞内卡病毒灭活苗免疫效果的影响

为探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)对塞内卡病毒(SVA)灭活疫苗免疫效果的影响,对PRRS阳性猪和PRRS阴性猪分别免疫相同批次、相同剂量的SVA灭活苗,检测首次免疫后7 d、14 d、21 d、28 d血清中和抗体效价,并在免疫后28 d对所有试验猪进行攻毒保护试验。结果显示,所有PRRS阳性猪的SVA血清中和抗体效价均小于1∶4,而PRRS阴性猪SVA血清中和抗体效价在二免后上升到较高水平。攻毒保护结果与中和抗体效价结果呈正相关,PRRS阳性组0/5保护,而PRRS阴性组试验猪达到5/5保护。这一研究表明PRRS会使SVA灭活疫苗免疫效果下降,为SVA及PRRS疫苗的研发及猪场疾病的防控提供了参考。     

PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后特异性抗体的中和活性分析

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体的中和活性,研究以原核表达的重组蛋白GP5和M为抗原分别与霍乱毒素B亚基(CTB)佐剂按10∶1的比例混合制备成CTB黏膜佐剂疫苗,滴鼻免疫小鼠,于首次免疫后0,7,14,21,28,35,42 d收集唾液和血清样品,利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠唾液中特异性抗体IgA,结果均于28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶2;血清中特异性抗体IgG分别于21,28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶800。通过本实验室建立的基于PAM细胞中和试验方法分别检测唾液中特异性抗体IgA和血清中特异性抗体IgG中和滴度均1∶2,结果表明PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体未达到免疫保护作用的中和抗体水平。     

猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗免疫效力

利用猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗免疫4周龄仔猪,免疫后7、14、21、28d采血,测定免疫后血清中抗PRRSV、PCV中和抗体和ELISA抗体较价,并于免疫后28d分别用PRRSV和PCV2攻毒,攻毒后每日检测猪体温和观察临床症状,于攻毒后21d所有存活猪全部扑杀,分别对每头猪肺、肝、脾、淋巴结、心和血进行剖解病理和组织病理学观察及PRRSV和PCV2核酸检测,以确定该疫苗免疫保护率。结果表明,所有试验猪于免疫后7d血清抗体开始检出,28d达到峰值,免疫后28dPRRSV和PCV2攻毒保护率均为100%(5/5)。     

陕西省关中部分县（区）散养猪群PRRS流行情况调查

进行猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）疫苗安全及效力试验时,需要选用猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗原、抗体均为阴性的猪血清。为此,应用EUSA和RT—PCR方法对取自陕西省关中部分县（区）散养的未进行猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫猪群共计135份血清样品进行了PRRSV抗体和抗原测定。结果表明,PRRSV抗体阳性率为6．67％（9／135）．PRRSV抗体阴性猪群中抗原阳性率为11．11％（14／126）。由此可以得出,该地区农户散养的猪群存在感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的危险。     

针对不同形式猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组蛋白的抗体中和活性比较

GP5蛋白被认为是猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导中和抗体的主要蛋白,为探讨GP5蛋白诱导免疫保护的能力,本研究用杆状病毒/昆虫表达系统分别表达了全长和截短的GP5蛋白,同时用大肠杆菌表达系统表达了截短的GP5蛋白。三种重组蛋白经纯化后,免疫小鼠制备抗血清,以PRRSV全病毒作为ELISA包被抗原检测抗血清时,原核表达的截短GP5蛋白抗血清效价为1∶200,真核表达的全长GP5蛋白抗血清效价为1∶800,真核表达的截短GP5蛋白抗血清效价为1∶1 600。将获得的三种抗血清分别在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)进行PRRSV同源(PRRSV VR2332)和异源(PRRSV HeN-3)毒株的血清学中和试验,并通过实时定量PCR方法检测各组中PRRSV mRNA的绝对拷贝数,以抗血清的病毒阻断率≥70%的最大血清稀释度作为该血清的中和效价。结果显示:1)三种重组蛋白的抗血清对两种PRRSV毒株的中和效价均1∶2,不具有中和活性,部分稀释滴度的血清还增强了病毒的感染;2)抗PRRSV全病毒对照阳性血清对同源毒株的中和效价为1∶8,具有中和活性;对异源毒株的中和效价1∶2,不具有中和活性,同时还产生了ADE增强作用。上述研究结果提示,GP5的主要中和表位可能更多是构象表位,PRRSV全病毒中主要诱导中和抗体产生的蛋白可能并不完全在GP5蛋白上;PRRSV全病毒阳性抗血清虽然能够提供一定的免疫保护,但这种免疫保护只发生在同源毒株之间,对异源毒株并没有效果,反而会介导ADE效应发生。     

口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度符合性研究

血清中和抗体滴度的大小反映血清对病毒感染的中和能力,其是评价疫苗免疫效果和病毒感染状况的重要指标,而液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA, LPB-ELISA)是一种通过ELISA检测抗体滴度的方法,因此研究LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度的关系对疫苗评价和理论研究有重要意义。本研究采用野外采集的90份牛血清进行了中和试验和LPB-ELISA试验,结果表明中和抗体滴度和LPB-ELISA抗体滴度具有相关性,相关系数为0.642,但是试验证明有41%中和抗体阴性样品会被LPB-ELISA检测为阳性,通过改变LPB-ELISA的阳性判断标准,采用抑制率>0.7的抗体滴度计算方法和1/8判定标准,可以使改进的LPB-ELISA的计算结果和中和试验结果更好的符合,降低假阳性率,使LPB-ELISA更适合进行口蹄疫血清学监测和普查。     

血清中IBV特异性IgG及总IgG含量变化规律的研究

本研究采用间接酶联免疫吸附试验对人工感染鸡传染性支气管炎病毒的SPF鸡血清中特异性抗体及总IgG含量进行检测并比较其相关性.结果表明感染IBV-M41第1 d、3 d、5 d、7 d、10d、14d、21 d、28 d的血清中特异性抗体水平随感染天数增加而升高,于第14天达到最高,之后略呈降低趋势,与健康对照比较差异显著(P＜0.01);总IgG含量较健康对照组增幅小,差异显著(P＜0.01).同时,两者的消长趋势基本一致.     

猪繁殖与呼吸综合征抗体应答反应

正1绪论研究发现,猪对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抵抗力具有年龄依赖性。因此,与年龄稍大的猪相比,尽管幼龄猪在抗PRRSV病毒抗体的产生时间和数量相似,但它们仍表现出较高水平和较长时间的病毒血症。大多数研究抗PRRSV中和抗体的研究以幼龄猪为试验对象,但我们在长时间暴露在PRRSV多种野毒下的母猪体内,观测到其体内含有高水平的中和抗体。2试验目的使用高通量的基于ELISA的分析法,检测PRRSV的中和抗体应答反应。笔者试图辨别出,高水平的抗体滴度是否随     

应用单克隆抗体酶联免疫斑点试验检测抗传染性喉气管炎抗体

本文提出以硝酸纤维膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记的抗传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ），邻苯二胺为底物，检测ＩＬＴＶ抗体的免疫斑点试验方法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。该方法较常规方法敏感，特异、省时。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平的检测提供了新的可靠方法。     

牛生长激素单克隆抗体的制备

选取18只BALB／c小鼠，以不同抗原（交联牛生长激素或未交联牛生长激素），以不同剂量、不同免疫间隔分别进行免疫，皆完全弗氏佐剂乳化抗原，皮下多点注射，三次免疫后，检测小鼠血清效价，确定免疫方案。从取脾前五天起，分别腹腔注射牛生长激素50、75、100、125和150μg，然后进行细胞融合，得到了分泌牛生长激素单克隆抗体的杂交瘤两株，分别将两株杂交瘤细胞注入小鼠体内生产腹水，腹水效价均达1：10000（ELISA）。     

应用间接免疫荧光抗体技术检测鸡传染性贫血病毒抗体

用MDCC－MSB1细胞增殖鸡传染性贫血病毒（CAV）CuX-1毒株制备抗原,建立了检测CAV抗体的间接免疫荧光的方法。应用该方法检测CAV基因工程亚单位苗首免、二免和三免后鸡体内的CAV抗体,结果表明首免一个月后,鸡血清中CAV抗体的滴度很低或几乎测不到抗体;二免一个月后,鸡血甭中可测到较高的CAV抗体;三免一个月后,鸡血清中的CAV抗体滴度更高。另外,应用此方法调查了某禽场3个批次鸡体内的CAV抗体,其中32日龄黄鸡和1日龄乌骨鸡体内的 CAV抗体为阴性,而1日黄鸡体内的CAV抗体为阳性。     

褪黑素单克隆抗体的制备

褪黑素（MT）广泛存在于哺乳动物体内,是一种常见的吲哚类物质,可起到清除自由基、调节免疫、调节神经等作用。本文使用褪黑素-OVA作为免疫原,免疫5 只BALB/c小鼠,5 次免疫后采血检测,通过间接ELISA方法确定抗血清针对褪黑素-OVA的滴度。经ELISA筛选,最终获得5 株可稳定表达褪黑素抗体的单克隆细胞株（3G3B2、3G3C7、3G3D1、3G3F4、3G3G3）。纯化后抗体浓度为0.28 mg/mL,经测定,褪黑素单克隆抗体滴度可达1∶64 000,为进一步开发褪黑素的快速检测方法奠定了材料基础。     

单克隆抗体纯化的研究进展

单克隆抗体在现代生物检测领域和医疗领域起着越来越重要的作用。而不管是何种抗体,来源于哪种形式,在用于检测和治疗之前都需进行纯化,纯化的方法因抗体种类和用途不同而不同。大致可分为沉淀法和色谱法两大类,作者就各种不同方法的应用范围及纯化结果的纯度、活性回收率、纯化周期、每批可纯化样品量、纯化成本等方面进行了比较和讨论。     

苯酚在兽医生物制品检测中的应用

作者们发现可以用低浓度苯酚作为破乳剂将油乳剂疫苗中水相分离出来，利用后者在体外进行免疫学测定。应用这个方法发现市售减蛋综合症疫苗中的血凝价为２１０，市售卵黄抗体中新城疫病毒血凝抑制价和抗法氏囊病病毒抗体价分别为２７～２９和２５～２７。