一种从鸭新分离的黄病毒研究初报

从以产蛋下降为主的樱桃谷种鸭以及出现神经症状的雏鸭各分离出1株病毒,分别命名为BZ株和LC株.该2株病毒对SPF鸡胚和健康鸭胚均能产生相同的病变,分离病毒不能凝集鸡、鸭、鹅、鸽等的红细胞,在鸭胚成纤维细胞(DEF)能够产生典型的细胞病变(CPE),电镜下观察到约50 nm的病毒粒子.病理组织学研究表明,二者在临床上均可导致脑组织危害,表现为脑膜水肿、血管充血和皮质层神经胶质细胞增生等.血清学检测表明,分离病毒与禽流感病毒(AIV)、鸭瘟病毒(DEV)、新城疫病毒(NDV)等病原无交叉.生物学特性鉴定该病原为有囊膜单股RNA病毒.利用不同禽病的特异性引物分别进行PCR或RT-PCR,均未扩增出特异条带.设计随机引物进行RT-PCR,扩增出基因片段,利用GenBank进行Blast同源比较,结果发现,分离病毒与以色列火鸡脑膜脑炎病毒(Israelturkey meningo-encephlitis virus,TMEV)和在马来西亚发现的Tembumu病毒至少在2段基因上具有较高的同源性,属于黄病毒属.测序表明,分离病毒与Tembumu病毒的非结构蛋白(NS5基因)和囊膜蛋白(E基因)的核苷酸同源性为86.7%～90.2%和87.0%～91.8%,与TMEV的NS5基因和E基因的同源性为72.4%～73.2%和72.7%～72.8%.2分离株之间E基因和NS5基因的核苷酸同源性均为99.5%.血清中和试验表明,BZ株阳性血清可以中和LC病毒,因此证实二者可能是同一种病毒.综合以上研究,建议将该病命名为"鸭病毒性脑炎"(Duck viral encephalitis disease).     

一种新的黄病毒导致蛋鸭产蛋下降及死亡

为探求2010年在上海、浙江和江苏等地鸭群出现产蛋下降甚至停止的发病原因,对浙江省4个发病鸭场发病鸭进行病理剖检以及病毒的PCR鉴定。解剖病鸭发现其脾脏肿大明显,肝脏有针尖状白色点状坏死。进一步的病理学变化分析发现病鸭的肝脏呈现程度不一的脂肪变性和空泡变性,肝细胞呈现局灶性溶解,脾细胞坏死。采集临床发病鸭的脾脏,提取总RNA,用随机引物进行反转录,然后用多种病毒的特异性引物进行PCR鉴定。结果显示,4个鸭场的病料呈鸭黄病毒PCR阳性,其他病毒呈阴性,说明这些鸭场均感染了鸭黄病毒,此病毒在浙江省已广泛流行。     

鸭坦布苏病毒江苏XZ株的分离和鉴定

从江苏徐州地区分离到的以引起樱桃谷鸭产蛋下降和死亡为特征的1株病毒,命名为XZ株。对该病毒进行电镜观察、血凝试验、ELD₅₀测定、RT-PCR扩增特异性目的基因、序列比对分析和动物回归试验。结果显示,分离毒株能致死鸭胚和鸡胚,电镜下观察到球形病毒粒子,不具有血凝性,对病料和接毒鸭胚尿囊液进行RT-PCR,均可扩增出基因片段,其核苷酸序列与坦布苏病毒奉贤株的相似性最高,为98.7%,与其他坦布苏病毒的毒株也具较高同源性,为86%~98%。用鸭胚分离毒株接种健康产蛋鸭,能复制出同样的疾病。结果表明分离病毒为鸭黄病毒属的坦布苏病毒。     

鸭传染性产蛋减少症（暂定名）的病原分离初报

本文对2010年在成年蛋鸭中流行的以产蛋下降为特征的未知疫病病原进行了初步鉴定。病原能在鸭胚、鸡胚和细胞上复制增殖,对鸭胚、鸡胚的致死率达100%。鸭胚病毒分离物不具有血凝性,在透射电镜下可观察到直径为50~100 nm、有囊膜带突起的病毒粒子。病毒对酸敏感、能耐受pH9的碱性环境,50℃1 h可使病毒失去感染能力。SPF鸡人工感染试验结果显示,感染鸡生长缓慢、致死亡率低、能回收病毒。说明引起鸭产蛋量下降的疫病病原是病毒性的,并导致鸡感染发病,我们将此病暂称为鸭传染性产蛋减少症。     

贵州省鸡产蛋下降综合征的调查

根据贵州省１９９３～１９９７年期间鸡产蛋下降综合征（ＥＤＳ）的发生情况,对其流行病学、血清学、病原学进行了广泛的调查研究。从出现产蛋下降等症状的鸡群中分离出１株病毒,命名为ＨＳ－１。该病毒能致死鸭胚,在尿囊液中产生高效价的红细胞凝集素,人工感染蛋鸡能复制出与自然病例相类似的临床症状。根据对病毒分离物血凝谱,理化特性和血清学关系的鉴定,证明贵州分离毒ＨＳ－１与国际标准毒ＡＶ－１２７属于同一血清型,是一株ＥＤＳ病毒。     

致鸡产蛋下降禽病原的检测基因诊断芯片的研制及临床应用

本试验研究的目的是利用RT-PCR技术扩增出新城疫病毒(NDV)、低致病性禽流感病毒(AIV H9)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征(EDS)、传染性喉气管炎病毒(ILT)、鸡毒支原体(MG)各一段保守序列,以纤维素酯膜作为生物芯片制作的基质,通过微量点样技术制作基因芯片(gene chip)。从可疑病料中提取组织核酸,通过掺入法bio-11-dUTP标记,对杂交信号的强弱检测来实现对生物样品的高效分析诊断。     

鸭坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒二重PCR检测方法的建立

参考Gen Bank上已发表的鸭坦布苏病毒(DTMUV)NS5基因序列和产蛋下降综合征病毒(EDSV)五邻体(penton)基因序列,分别设计了检测DTMUV和EDSV的特异性引物,扩增目的片段大小分别为242 bp和181 bp。通过退火温度及引物浓度的优化,建立了针对这两种病毒的二重PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法可以同时检测DTMUV和EDSV,且不与鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、番鸭呼肠孤病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒以及大肠杆菌的核酸发生交叉反应;敏感性试验表明,该方法对DTMUV的最低检出限为590个拷贝,对EDSV的最低检出限为3 260个拷贝;该方法重复性良好,对不同批次的样品扩增效果良好。通过检测两种病毒感染的阳性病料各10份,结果显示,该二重PCR检测方法对阳性样品的检出率可达100%。这表明该方法可以用于鸭坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒的检测。     

鸭黄病毒感染病例的病理组织学观察

为了探明湖北省肉种鸭和蛋鸭产蛋下降的原因,对引起产蛋下降的病鸭的卵巢中分离的病毒的目的基因进行测序,对3代接种的SPF鸡胚尿囊液进行电镜观察,对脑等组织进行组织病理学观察。序列分析结果表明,扩增的序列属于黄病毒的NS5基因,且与恩塔亚病毒群有相近的遗传进化关系。电镜可观察到40nm～60nm的有囊膜的病毒粒子。组织病理学观察发现输卵管出现严重的充血、出血和炎性反应,脑充血、炎性反应,心脏中有大量变性坏死的炎性细胞。     

鸡产蛋下降综合征病毒内蒙分离株的生物学特性研究

对鸡产蛋下降综合征病毒内蒙古地区分离株进行了生物学特性测定和血清学鉴定,结果表明,Ｂ４、Ｎ３株与１２７株均能抵抗乙醚、氯仿和胰蛋白酶,而在对酸、碱、温度及甲醛的稳定性测定中,Ｎ３株ＥＤＳ７６病毒对这些因素抵抗力强于Ｂ４株和１２７株,而Ｂ４株和１２７株ＥＤＳ７６病毒对这些因素的抵抗力基本相同,说明不同ＥＤＳ７６病毒株间理化特性上存在有差异。血清学试验结果表明,Ｂ４、Ｎ３株与１２７株ＥＤＳ７６病毒的血清学关系非常相近。     

产蛋下降综合征的实验室诊断技术

产蛋下降综合征（eggs drop syndrome,EDS76）是由腺病毒科禽腺病毒属Ⅲ群中的病毒引起的一种传染病。以产蛋下降为特征,其主要表现为鸡群产蛋骤然下降,软壳蛋和畸形蛋增加,褐色蛋蛋壳颜色变淡。该病主要侵害26～32周龄鸡,给养鸡业带来的经济损失巨大。主要对病料的采集和保存、病毒的分离培养、病毒的理化特性和血清学诊断进行了阐述,以期为更好地防控产蛋下降综合征提供参考依据。     

应用二重实时荧光定量RT-PCR鉴别坦布苏病毒与产蛋下降综合征病毒

为更加快速敏感地对两种导致产蛋下降的禽类病毒:坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒进行鉴别,试验建立了一套二重实时荧光定量RT-PCR方法。通过针对两种病毒的特异保守序列,设计两套引物和探针,分别标记不同的荧光基团和淬灭基团,并优化反应体系。结果显示:建立的二重实时荧光定量RT-PCR方法只扩增这两种病毒的目的片段,无交叉扩增反应,与其他常见禽类病原体也无扩增反应;该检测体系最低可同时检测100个拷贝的坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒,比常规PCR和RT-PCR敏感10~100倍;检测30份样品,共检出7份EDSV阳性,6份TMUV阳性,与病毒分离结果符合。表明建立的二重实时荧光定量RT-PCR方法可以快速、敏感、特异地鉴别诊断坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒。     

现代禽病防治技术专题（十四）鸡产蛋下降综合征的诊断与防制

鸡产蛋下降综合征（EDS－76）是一种主要侵害商品蛋鸡和种鸡，并造成产蛋量严重下降及蛋品质降低的病毒性传染病。1病原本病病原为EDS－76病毒，属于腺病毒科，只有一个血清型。其最大特点是能够凝集鸡、鸭、鹅等禽类的红细胞，并且这种血凝作用可被特异性抗体所抑制。该病毒抵抗力较强，适合用鸡胚、鸭胚及其肾细胞和成纤维细胞繁殖，尤其是用鸭胚培养可达到很高的血凝价。2流行病学本病主要发生于刚进入产蛋期不久及正在产蛋的鸡群，其它目龄的鸡也可被感染，但一般没有明显的临床症状。在性成熟前，病毒潜伏于体内如咽喉、鼻粘膜、肠…     

禽呼肠孤病毒研究进展

禽呼肠孤病毒（Avianreovirus,ARV）属于呼肠孤病毒科,呼肠孤病毒属的成员,是一种能引起关节炎、心包炎、肠炎、肝炎、法氏囊及胸腺萎缩、骨骼异常、产蛋下降和营养吸收障碍等疾病的双链RNA病毒。1957年Olson等首次分离到禽呼肠孤病毒,此后英国、美国、     

应用PCR技术检测鸡产蛋下降综合征病毒

根据已发表的鸡产蛋下降综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV)基因序列设计特异性引物,目的基因片段大小为273 bp,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对EDSV进行扩增。结果表明,该方法对EDSV标准株扩增为阳性,对鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病毒及肾型传染性支气管炎病毒的扩增结果均为阴性。应用PCR技术对试验样品进行检测,均能够扩增出预期的DNA片段。由此可以得出,PCR技术可以用于鸡产蛋下降综合征病毒的检测。     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

鸡产蛋下降综合征防治

鸡产蛋下降综合症是一种由腺病毒引发的鸡传染性疾病,其可造成母鸡产蛋率明显下降和畸形蛋等情况,该病毒多为垂直传播,也可水平传播,一旦发生,将严重威胁养殖场的经济效益.本文将通过对鸡产蛋下降综合症的流行病学、临床症状、病理变化进行分析,为其临床防治工作提供参考依据.     

产蛋下降综合征病毒PCR检测方法的建立

根据已报道的腺病毒DNA序列，设计合成了1对核苷酸引物，引物间隔约630bp。用该引物对EDS76病毒内蒙古分离株(N3，N4)和参考株(AV-127)核酸进行聚合酶链式反应(PCR)。结果，均扩增出了约630bp的特异性DNA片段。所建立的PCR方法可检出100pg的样品模板。结果表明，此PCR方法是检测EDS76病毒的一种简便快速、特异性强和灵敏度高的方法。     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒（ EDS-76）检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗 EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA 试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原（ NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV）均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

蛋鸡产蛋下降综合症的流行、诊断与治疗

产蛋下降综合症,是由病毒引起的能使产蛋鸡产蛋率下降的传染病。其临诊断特征为鸡群产蛋突然下降,大量出现软壳蛋、畸形蛋或蛋壳的颜色变浅。该病可使产蛋鸡群产蛋率下降10％～30％,蛋壳破损率达35％～40％,无壳蛋、软壳蛋在15％左右。1病原产蛋下降综合症病毒是腺病毒属禽腺病毒Ⅲ群的病毒,其结构为某种无囊膜的双股脱氧核糖核酸病毒,病毒含红细胞凝集素,能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞,故可用于血凝试验及血凝抑制试验,血凝抑制试验具有较高的特异性,可用于检测鸡的特异性抗体。     

鸡产蛋下降综合征的影响因素与防制措施

产蛋下降综合征是20世纪70年代后期发现的一种使商品蛋鸡和种鸡产蛋量下降的病毒（腺病毒EDS-76）性传染病。患病鸡主要表现为群发性产蛋量下降、产蛋异常、蛋体畸形、蛋质低劣等。本病可使产蛋率下降10％～30％,甚至50％,蛋的破损率达到30％～40％,无壳蛋、软壳蛋可达15％,给养鸡业造成严重的经济损失。本文总结出影响鸡产蛋下降综合征的主要因素并提出防制措施,以供同行们参考。