Dot—ELISA间接法检测鸡新城疫病毒（NDV）的研究

常规方法分离纯化鸡ＩｇＧ,免疫羊制备羊抗鸡ＩｇＧ二抗,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记制备酶标记物的工作浓度为１：１０００;选用硝酸纤维素（ＮＣ）膜作固相载体,建立检测ＮＤＶ抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。检测ＮＤＶ鸡胚毒４０份,阳性检出率１００％;人工感染非免疫鸡的气管组织、肺组织各４７份,检出率为９３．６％;人工感染ＳＰＦ鸡气管组织、肺组织各４０份,检出率１００％。与传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）无交叉反应。试验显示该方法简便、特异、快速、结果直观,便于生产应用     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

RT—PCR与夹心ELISA检测粪便及饲料中IBDV的研究

将ＩＢＤ病鸡粪便及饲料经ＰＥＧ浓缩处理后用ＲＴＰＣＲ与单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ进行ＩＢＤＶ检测。在ＲＴＰＣＲ试验中，粪便和饲料的阳性检出率均为１００％（８／８）；在夹心ＥＬＩＳＡ试验中，粪便的阳性检出率为１００％（８／８），而在饲料中末检出ＩＢＤＶ（８／８％。试验结果证明，ＲＴＰＣＲ是ＩＢＤＶ流行病学特别是传播途径研究的首选方法。     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板,将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ,确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ４℃冰箱     

单抗免疫过氧化物酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒

以抗鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）的单抗株６ＤＨ８作为一抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗,建立了检测石蜡切片中ＩＢＶ抗原的单抗免疫过氧化物酶技术（Ｍｃ－ＩＰ）,并对人工攻毒鸡及临床ＩＢＶ感染疑似鸡进行了检测。在ＩＢＶＭ４１株人工攻毒鸡,用该技术于１～１２ｄ从气管、２～７ｄ从肾脏可以检测到ＩＢＶ抗原,阳性染色集中于气管粘膜上皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆;临床疑为ＩＢＶ感染的病鸡,以Ｍｃ－ＩＰ技术和单抗免疫荧光试验（Ｍｃ－ＩＦＡ）同时进行检测,结果阳性率分别为９０．３％及８３．９％。     

斑点免疫金测定法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

本文通过制备胶体金标记提事的兔抗ＩＶＢ ＩｇＧ。从而建立一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物，检测鸡传染性支气管炎病毒的斑点免疫金测定法。该法对ＩＢＶ的最小检测量为０．２０３μｇ，与鸡胚培养测定法比较，在１０份自然病例样品中ＤＩＧＦＡ法检出８份，检出率为８０％，而鸡胚培养测定法以盲传３－５天，出现侏儒胚者为阳性，其检出６份。检出率为６０％。．     

应用Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用差速离心结合琼脂糖凝胶层析纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）制备抗原免疫兔,获得高效价的多克隆免疫血清,提纯ＩｇＧ后用辣根过氧化物酶标记,建立了检测ＩＢＶ的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）方法。对影响本方法因素的研究表明,当酶标抗体作１：１００稀释、工作时间为３７℃、６０ｍｉｎ时结果最理想;对待检组织用氯仿处理、对硝酸纤维素膜用０．３％Ｈ２Ｏ２处理３０ｍｉｎ可有效地消除组织内过氧化物酶的影响。该方法具有较强的特异性和敏感性,对病毒的最低检出量为０．０１２４ｍｇ／ｍＬ。本法不仅可检测到纯化ＩＢＶ,而且可直接用于检测鸡胚尿囊液或病变组织（如气管、肾）中的病毒;对临床上疑似ＩＢＶ感染的病鸡的阳性检出率达７８．６％,而病毒分离率仅达６０％,两者符合率为９０％。试验结果表明,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ可作为ＩＢＶ早期诊断的方法,具有简单、快速、样品用量少等优点。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究

本文报道了一种既可以检测ＩＢＤ囊毒抗原，又可以检测ＩＢＤ抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗体夹心法。用本方法检测ＩＢＤ阳性法氏囊样品１２２份，结果检出阳性１２０份，符合率为９８．４％。检测阴性法氏羹样品８８份，均为阴性。本方法与琼脂扩散试验方法比较，共检测人工感染发病的病死鸡法氏囊９７份，结果琼脂扩散检出阳性法氏囊４９份（５０．５１％），阴性４８份（４９．４８％），而用本方法检测结果，全为阳性，检出阳性率为１００％，比ＡＧＰ法检出率高４９．４８％。检测高免蛋黄液的抗体。１６个样品（以２倍递增进行稀释），结果本方法比琼脂扩散试验高１～２个滴度。试验证明该方法特异、敏感，并且快速简便，试验在室温条件下进行，不需要任何仪器设备，用肉眼观察颜色的变化就可判断试验结果，试验反应时间仅需１０分钟左右。     

应用双抗体夹心法ELISA检测IBDV的研究

从抗ＩＢＤＶ高免蛋黄液中提取ＩｇＧ，用作包被抗体和酶标记，建立了检测ＩＢＤＶ的双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ。经抗原阻断，无关病毒对照、取代、验证等项试验，并与常规ＡＧＰ法比较，对来源不同的１００多个样品进行检测，结果表明：该法对患鸡腔上囊、脾脏的检出率均为１００％，比ＡＧＰ法敏感１００倍以上，用肉眼观察阳性与阴性之间颜色差异显著，不存在非特异性反应。试验证明该法具有满意的待异性、敏感性、快速性和稳定性，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用（摘要）

本文应用鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ—ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙烯胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６μｇ／ｍｌＩＢＤＶ蛋白。作者比较了ＬＰＡ、直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ试验的检出率高于ＡＧＰ。ＬＰＡ和ＤＦＡ试验结果的符合率为８６％。     

兔源抗IBDV独特型抗体疫苗的制备

用纯化的抗鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体免疫家兔，将所获效从较高（１：１６）的兔源抗ＩＢＤＶ独特型抗体分别与福氏完全和福氏不完全佐剂按１：１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，用该疫轩免疫迪卡公雏鸡和ＳＰＦ组鸡，经用ＩＢＤＶ强毒株以点眼和滴鼻方式攻击，试验组的保护率分别为９８／９８，１００／１００，４９／４９，大群免疫接种的应答率为１００％。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联油乳剂灭活疫苗研制及应用

用新城疫病毒（ Ｎ Ｄ Ｖ） Ｌａ Ｓｏｔａ 株、鸡传染性支气管炎病毒 （ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｍ４ １ 株接种鸡胚, 收获含毒鸡胚尿液。用传染性法氏囊病病毒 （ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） 地方强毒 Ｈ Ｂ９ ０ ９ 株接种３０ ～４０ 日龄肉用鸡, 发病后取囊组织 （ 或收集 Ｉ Ｂ Ｄ 典型发病鸡囊组织） 制备成含毒组织悬液。将三种病毒液按一定比例混合, 制备成三联油乳剂灭活苗。三联苗免疫１８ 日～２８ 日龄雏鸡, 免疫后２１ 天攻毒测保护力, 三种传染病保护率均在９０ ％ ～１００ ％ , Ｎ Ｄ Ｈ Ｉ抗体≥１∶３２ , Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ａ Ｇ Ｐ阳性率１００ ％ , Ｉ Ｂ Ｖ Ｎ 抗体≥１∶８ , 疫苗免疫期可达４ 个月以上。疫苗在４ ℃～８ ℃保存期为１８ 个月, １０ ℃～２０ ℃保存为６ 个月, 该疫苗在全省不同地区、不同品种鸡应用１５ 万羽份, 取得理想免疫效果。     

抗鸡IgG重链单克隆抗体的制备与应用

以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散