分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的 Ａ 型产气荚膜梭菌 α毒素包涵体免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠后， 取小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选，共获得 １ Ａ８、１ Ｃ３、１ Ｄ５、１ Ｄ８、１ Ｆ１、１ Ｈ１ 和 ２ Ｅ３ ７ 株稳定分泌单克隆抗体（ Ｍ ｃ Ａｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，７ 株 Ｍ ｃ Ａｂ 的 Ｉｇ 亚类有 Ｉｇ Ｇ１（１ Ｄ８）、 Ｉｇ Ｇ３（１ Ａ８、１ Ｃ３ 和 ２ Ｅ３）和 Ｉｇ Ｍ（１ Ｄ５、１ Ｆ１ 和 １ Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为 １∶５１２～１∶１ ０２４ 和 １∶１０６ ～１∶１０８ 。尤为重要的是，２ Ｅ３ 杂交瘤细胞株分泌的 Ｍ ｃ Ａｂ 不仅能够中和 α毒素的磷脂酶 Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链     

抗℃型肉毒毒素单克隆抗体的研究

用透村培养法制备的Ｃ型肉毒毒素的类毒素，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合。经ＨＡＴ选择培养基选择培养，其细胞融合率平均为７４．５％。用间按ＥＬＩＳＡ法筛选后，共获得９４孔产生抗Ｃ型肉毒毒素抗体的杂交瘤阳性孔。选其中１Ｃ２、１Ｄ１２、１Ｅ８、１Ｇ６、１Ｇ１１、２Ｂ１２、２Ｃ１１、２Ｅ１２、２Ｇ１１、２Ｈ３、３Ａ４、３Ｃ５、３Ｄ３、３Ｆ７、３Ｈ６共１５孔用有限稀释法进行     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体的研制

利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）国内分离株Ｊ１,采用反复差速离心法制备免疫抗原,长程免疫法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体,通过细胞融合技术,并经３次亚克隆获得了１０株能稳定分泌抗ＰＲＲＳＶ单抗的杂交瘤细胞单克隆株（Ａ１Ｄ７Ｈ１０,Ａ１Ｄ７Ｈ１１,Ａ１Ｅ７Ｈ９,Ａ１Ｅ７Ｄ９,Ａ２Ｄ８Ｅ７,Ａ２Ｄ８Ｂ１１,Ｂ３Ｄ１１Ｄ６,Ｂ２Ｇ９Ａ９,Ｂ２Ｇ９Ｆ２）。这些细胞经体外连续传     

抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。     

有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

抗鸽IgG单克隆抗体的制备及鉴定

鸽卵黄经硫酸铵盐析、酒精沉淀及凝胶（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００）柱层析后,得到较纯的鸽ＩｇＧ,以其免疫ＢＡＬ Ｂ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）进行细胞融合,经过酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,得到两株能稳定分泌抗鸽ＩｇＧ的单克隆抗体（以下称单抗）,分别命名为１Ｅ５和４Ｃ２。经亚类鉴定,该类抗均为ＩｇＧ１亚类。在鸽ＩｇＧ包被的９６孔板上用间接用ＥＬＩＳＡ方法测定单抗腹水的ＥＬＩ     

分泌抗细粒棘球蚴原头节可溶性抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原免疫的Ｂａｌｌ／ｃ鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得８株分泌抗ＳＰＡ的杂交瘤细胞株，即３Ａ４，１ＩＣ２，２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３，３Ｅ６，３Ｆ１０和２Ｃ２。亚类鉴定为ＩｇＧ１（３Ａ４，３Ｅ６，１Ｃ２，３Ｆ１０和３Ｃ２），ＩｇＧ２ｂ（２Ｃ２），ＩｇＧ３（２Ｅ３），ＩｇＧ总（２Ｂ３）。免疫双扩散法显示２Ｃ２腹水及２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３培养上清粗提物与     

禽多杀性巴氏杆菌单克隆抗体的制备及其基本性状研究

将多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）Ｃ４８－１株（Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ１型；Ｃａｒｔｅｒ分型５：Ａ）灭活后全菌免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ／０骨髓瘤细胞在ＰＥＧ１０００作用下融合。用全菌包被的间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体，获得了２３株能稳定分泌抗Ｐ．ｍ．１型单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养２个月和冻存３个月后复苏培养，均能稳定分泌特异性单克隆抗体。２３株腹水ＥＬＩＳＡ效价分别从１０－３—１０－１１，无免疫沉淀性，也无凝集性。Ｉｇ类型鉴定表明，３株属于ＩｇＭ，２０株属于ＩｇＧ。间接ＥＬＩＳＡ检测结果表明：２３株单抗只与Ｐ．ｍ．１型起反应，而不与Ｐ．ｍ．３、４、１６型起反应，也不与禽类易感的鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、李氏杆菌起反应，具有型的特异性。用ＩＣ８Ｈ９腹水建立的夹心ＥＬＩＳＡ方法检定Ｐ．ｍ．１型菌株，其敏感性高，特异性强，也更为方便。     

具有中和活性的减蛋综合征病毒单抗的研制

用减蛋综合征病毒毒株ＷＰＤＶ２０５纯化抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，在最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ－４０００的作用下融合。用间接ＥＬＩＳＡ初步筛选出阳性克隆１０株（４Ｂ１、１Ｄ４、２Ｄ６、３Ｄ６、３Ａ５、２Ａ１、３Ｃ６、３Ｃ１、１Ｂ３和２Ｃ５）。这些杂交瘤细胞经克隆化和再次检测后生产腹水，用微量细胞中和试验筛选出具有中和活性的单克抗隆体４株（４Ｂ１、３Ｃ１、３Ｃ６和２Ｃ５），其     

抗牛病毒性腹泻/粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。     

抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用绵羊肺炎支原体（ＭＯ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株．以有限稀释法克隆１～２次，得到６株分泌抗绵羊肺炎支原体抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株．选择抗体分泌较高的１４Ａ６、７Ａ２７、Ｂ３８进行了较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９４～９６．抗体属性是：１株为ＩｇＧ２ａ、２株为ＩｇＧ１．用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ作符异性分析、该ＭｃＡｂ只特异地与绵羊肺炎支原体抗原发生反应，而不与猪肺炎支原体、山羊无乳症支原体抗原发生反应．将杂交瘤细胞注射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水．其抗体效价提高１００倍．杂交瘤细胞在液氮中保存１～２年后复苏仍能稳定地分泌抗绵羊肺炎支原体ＭｃＡｂ。     

产蛋下降综合征病毒单克隆抗体的制备

以粗提的ＥＤＳ－７６病毒（ＮＥ－４株）作为抗原，按常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞进行融合，采用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ进行双重筛选，共检出２５个阳性孔，阳性率为１４．８８％。对其中的１１个阳性值较高的孔进行３次克隆，最后获得的１１株杂交瘤细胞，经长期体外培养和冻存后复苏仍能稳定地分泌抗体；ＥＬＩＳＡ阻断试验和与其他病毒的交叉试验证明，其分泌的抗体具有高度特异性。经鉴定，１１株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ，均无免疫沉淀特性，腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１：３２００～１：５１２００和１：１２８～１：２０４８。杂交瘤细胞的染色体数目为８０～１１２，平均９２。尤为重要的是，１１株杂交瘤细胞中有４株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒血凝素决定簇的中和单抗，细胞培养上清和腹水的ＨＩ价分别为２１０～２￣（１２）和２￣（２２）～２￣（２４），腹水的中和效价为１：１２８０～１：５１２０。     

抗破伤风毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效应

应用破伤风类毒素多途径免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取小鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤在聚乙二醇（ＰＥＧ，４０００）作用下进行细胞融合，克隆化，经ＥＬＩＳＡ及毒素中和试验检测，获得了１１株具有一定毒素中和活性的单克隆抗体细胞株。经单一单抗和群单抗中和试验证实，其中４株具有较强的产生抗毒素活性，而且这４种单克隆抗体（１Ｄ９Ｂ１０、５Ｇ８Ｂ９Ｅｌ、５Ｇ８Ａ１０、５Ｇ８Ｂ９Ｃ１１）协同作用可完全中和标准量毒素的攻击。     

抗鼠隐孢子虫单克隆抗体的研究

利用鼠隐孢子虫卵囊脱囊物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经过３￣４次有限稀释法克隆化，获得５株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株。所获抗体均属ＩｇＧ１。ＩＦＡ检测结果表明：２Ｇ７株单抗作用于卵囊壁抗原，而ＩＡ４、２Ｅ７、３Ｇ３、４Ａ７株单抗作用于子孢子表面抗原。诱生腹水经过反复冻融、冻干及硫酸铵沉淀后，抗体活性无明显变化。５株单抗均不与贝氏隐孢子虫及柔嫩艾美尔球虫产生交叉反应，与小孢隐